Fissazione dei Campioni Biologici

Il processo di preparazione dei campioni per l'analisi morfologica comprende diverse fasi: prelievo, fissazione, sezionamento e colorazione. Obiettivo è ottenere una rappresentazione fedele della struttura cellulare e tissutale.

Il prelievo del campione è il primo passo dell'analisi morfologica. Può essere effettuato su diversi tipi di materiale biologico, come pezzi di organo, pellets di cellule, cellule coltivate o ovociti ed embrioni.

La fissazione è un processo fondamentale che blocca le strutture cellulari e tissutali, prevenendo l'autolisi e la putrefazione. Impedisce che il campione cambi durante la processazione.

Esistono due tipi di fissazione: fisica e chimica. La fissazione fisica utilizza metodi come il calore, l'essicazione o il congelamento. La fissazione chimica prevede l'utilizzo di soluzioni chimiche.

Esistono diversi tipi di fissazione chimica, tra cui la fissazione per perfusione, la fissazione per immersione e la fissazione a mezzo di vapori. Ogni metodo ha i suoi vantaggi e svantaggi a seconda del campione specifico.

Metodo di fissazione che utilizza una soluzione chimica per preservare la struttura cellulare e tissutale del campione. Il campione viene immerso in una soluzione fissativa per un determinato periodo di tempo.

Sostanze chimiche utilizzate per preservare la struttura dei campioni biologici. I fissativi semplici includono aldeidi, alcoli, acidi e sali di metalli pesanti.

Processo di rimozione dell'acqua dai campioni biologici prima dell'inclusione in paraffina o resina. Questo passaggio è necessario per permettere un'adeguata infiltrazione del mezzo di inclusione.

Un procedimento che rende i tessuti solidi e facili da sezionare. I campioni vengono immersi in cera di paraffina fusa che si solidifica intorno a loro.

Soluzioni alternative alla paraffina che creano preparati rigidi per sezioni molto sottili, adatte anche alla microscopia elettronica. Sono però meno flessibili e compatibili con meno colorazioni.

Strumento utilizzato per tagliare sezioni sottili di tessuti inclusi in paraffina, con spessore di 5-10 µm.

Processo che rende visibili le strutture cellulari e tissutali, rendendole distinguibili al microscopio.

Colorante basico che si lega agli acidi nucleici (DNA e RNA), colorando il nucleo cellulare di viola.

Colorante acido che si lega alle componenti basiche del citoplasma, colorandolo di rosa.

Tecnica che utilizza un composto crioprotettore, l'OCT, per congelare i campioni e permettere la sezione al criostato.

Strumento che taglia sezioni sottili di campioni congelati, con spessore di 8-10 µm, per l'analisi istologica.

Strumento che taglia sezioni ultrasottili di campioni, con spessore di 50-100 nm, per l'osservazione al microscopio elettronico.

Un tipo di microscopio che utilizza le diverse densità ottiche di un campione per creare un'immagine con variazioni di intensità luminosa, mostrando dettagli senza la necessità di coloranti.

Una tecnica che utilizza un microscopio ottico modificato per localizzare molecole o strutture specifiche mediante l'uso di fluorocromi che emettono luce fluorescente di colore caratteristico quando irradiati con luce UV.

Una tecnica di microscopia che utilizza un fascio di elettroni per creare immagini ad alta risoluzione di campioni molto sottili, permettendo di osservare strutture interne e dettagli fini.

Una tecnica di microscopia che invia un fascio di elettroni su un campione ricoperto di un sottile strato di metallo, generando immagini tridimensionali della struttura esterna del campione.

Strutture anomale o falsificate che si presentano nei preparati istologici a causa dei metodi di preparazione del campione, come la fissazione, la colorazione o il sezionamento.

Un microscopio che utilizza due lenti per ingrandire un'immagine: l'obiettivo, che focalizza la luce sul campione, e l'oculare, che ingrandisce l'immagine focalizzata.

Una misura della capacità di un materiale di rifrangere la luce. Un materiale con un indice di rifrazione più alto devia la luce in modo maggiore rispetto ad un materiale con un indice di rifrazione più basso.

Un sistema di lenti che elimina al minimo la perdita di luce, migliorando la risoluzione e le prestazioni del microscopio.

Tecnica che utilizza due sonde complementari (senso e antisenso) per la marcatura di un gene di interesse. Le sonde possono essere sintetizzate a basso costo e sono adatte per la diagnosi di malattie anche in diverse specie.

Tecnica di ibridazione in situ che utilizza sonde marcate per rilevare mRNA o DNA in tessuti interi senza sezionamento. È utile per studiare la localizzazione e l'espressione genica in un'intera struttura.

Tecnica di ibridazione in situ che utilizza sonde marcate con fluorofori per rilevare sequenze specifiche di DNA o RNA in cellule o tessuti. Permette di visualizzare i cromosomi o le sequenze di DNA con una risoluzione molto alta.

Un tipo di tecnica di ibridazione in situ che utilizza sonde amplificate e la reazione a catena della polimerasi (PCR) per rilevare l'espressione genica a livello di singola cellula. È altamente sensibile e può rilevare anche poche molecole di mRNA.

4',6-diamidino-2-fenilindolo (DAPI) è un colorante fluorescente che si lega al DNA e lo colora di blu. Consente di visualizzare la forma e la dimensione dei nuclei cellulari, facilitando il conteggio e l'analisi delle cellule.

Tecniche di microscopia che sfruttano la differenza di indice di rifrazione tra il campione e il mezzo circostante per migliorare il contrasto dell'immagine. Sono particolarmente utili per osservare cellule vive o campioni non colorati.

La capacità di un microscopio di distinguere due punti vicini come distinti. È determinata dalla lunghezza d'onda della luce utilizzata e dalla qualità dell'obiettivo.

La capacità di un microscopio di rendere un oggetto più grande di quanto non sia a occhio nudo. Deve essere proporzionale al potere di risoluzione per ottenere un'immagine utile.