Culture Cellulaire Animale: Principes et Procédés
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Questions and Answers

Expliquez pourquoi la courbe de croissance des cultures cellulaires primaires montre une phase de prolifération exponentielle suivie d'une phase de sénescence.

La phase de prolifération exponentielle est due à la multiplication rapide des cellules après leur adaptation au milieu de culture. La phase de sénescence survient car les cellules atteignent un nombre limite de divisions, leur capacité de prolifération diminuant progressivement.

Décrivez deux différences principales entre les cultures cellulaires primaires et les lignées cellulaires continues.

Les cultures cellulaires primaires sont finies et ont une durée de vie limitée, tandis que les lignées cellulaires continues sont immortelles et peuvent proliférer indéfiniment. De plus, les cultures cellulaires primaires maintiennent généralement l'identité génétique de l'organisme d'origine, tandis que les lignées cellulaires continues peuvent avoir subi des modifications génétiques résultant de processus de transformation.

Quelles sont les deux principales catégories de transformations qui peuvent conduire à la création de lignées cellulaires continues?

Les deux principales catégories de transformations sont les transformations chromosomiques, qui modifient le nombre ou la structure des chromosomes, et les transformations physiologiques, qui modifient les propriétés physiologiques des cellules, notamment leur capacité à proliférer indéfiniment.

Expliquez l'importance de l'inhibition de contact dans la croissance des cellules normales.

<p>L'inhibition de contact est un mécanisme qui empêche les cellules de proliférer lorsqu'elles entrent en contact avec d'autres cellules. Ce mécanisme garantit une croissance contrôlée et ordonnée des tissus, empêchant la formation de tumeurs.</p> Signup and view all the answers

Quelle est la principale différence entre les cellules normales et les cellules transformées en termes de dépendance au support ?

<p>Les cellules normales sont dépendantes du support, ce qui signifie qu'elles nécessitent une surface solide, comme le plastique ou le verre, pour se fixer et proliférer. Les cellules transformées, en revanche, sont moins dépendantes du support et peuvent se multiplier les unes sur les autres, formant des multicouches cellulaires.</p> Signup and view all the answers

Donnez un exemple de lignée cellulaire continue et décrivez sa caractéristique chromosomique.

<p>La lignée cellulaire Vero, provenant de cellules du rein de singe vert, est un exemple de lignée cellulaire continue. Sa caractéristique chromosomique principale est la présence d'anomalies chromosomiques, telles que l'aneuploïdie et l'hétéroploïdie.</p> Signup and view all the answers

Expliquez pourquoi les cellules transformées sont considérées comme ayant un caractère tumoral.

<p>Les cellules transformées présentent une multiplication illimitée, perdent l'inhibition de contact et deviennent moins dépendantes du support, ce qui leur permet de proliférer de manière incontrôlée et de former des tumeurs lorsqu'elles sont injectées dans un organisme.</p> Signup and view all the answers

Pourquoi est-il important de connaître les origines et les caractéristiques des lignées cellulaires continues utilisées en recherche ?

<p>Il est essentiel de connaître les origines et les caractéristiques des lignées cellulaires continues pour comprendre les modifications génétiques et physiologiques qu'elles ont subies. Ces informations sont cruciales pour garantir la fiabilité des résultats de recherche et pour interpréter correctement les données obtenues.</p> Signup and view all the answers

Nommez deux exemples de systèmes tampons utilisés pour stabiliser le pH des milieux de culture cellulaire.

<p>Les systèmes tampons comme HEPES et le bicarbonate sont utilisés pour stabiliser le pH des milieux de culture cellulaire.</p> Signup and view all the answers

Expliquez brièvement pourquoi les milieux de culture cellulaire pour les cellules eucaryotes sont plus complexes que ceux pour les cellules procaryotes.

<p>Les milieux de culture cellulaire pour les cellules eucaryotes doivent reproduire les conditions physiologiques plus complexes de ces cellules, notamment en ce qui concerne les besoins en nutriments, hormones et facteurs de croissance.</p> Signup and view all the answers

Donnez deux exemples d'hormones souvent ajoutées aux milieux de culture cellulaire.

<p>L'insuline et l'IGF (Insulin Growth Factor) sont des hormones souvent ajoutées aux milieux de culture cellulaire.</p> Signup and view all the answers

Quel est le rôle des facteurs d'attachement dans les milieux de culture cellulaire ?

<p>Les facteurs d'attachement, comme le collagène, facilitent l'adhésion des cellules au support de culture, ce qui est crucial pour leur croissance et leur développement.</p> Signup and view all the answers

Expliquez pourquoi les antibiotiques sont souvent utilisés dans les milieux de culture cellulaire, mais pourquoi leur utilisation est limitée dans certaines applications.

<p>Les antibiotiques sont souvent utilisés dans les milieux de culture cellulaire comme mesure préventive contre les contaminations bactériennes. Cependant, ils peuvent ralentir la division cellulaire et sont donc proscrits pour les cultures destinées à une réinjection chez des patients, car ils pourraient affecter l'immunité du patient.</p> Signup and view all the answers

Quels sont les trois changements de couleur du rouge de phénol dans un milieu de culture cellulaire et que signifient-ils ?

<p>Le rouge de phénol est un indicateur de pH qui vire du rouge orangé à un pH optimal, au jaune en milieu trop acide et au violet en milieu trop alcalin.</p> Signup and view all the answers

Expliquez deux avantages du sérum dans les milieux de culture cellulaire.

<p>Le sérum apporte plusieurs avantages, notamment une richesse en éléments essentiels comme les facteurs de croissance, les hormones et les facteurs d'attachement, ainsi qu'une protection contre les toxines et les protéases.</p> Signup and view all the answers

Quelle est la principale limitation du sérum dans les milieux de culture cellulaire ?

<p>Une des principales limitations du sérum est sa variabilité entre les lots, ce qui peut affecter la reproductibilité des expériences.</p> Signup and view all the answers

Quel est l'objectif principal des recherches de Sabin en 1936?

<p>Étudier les besoins nutritionnels des cellules.</p> Signup and view all the answers

Comment Enders a-t-il contribué à la culture du virus de la poliomyélite en 1949?

<p>Il a cultivé le virus sur du tissu embryonnaire nerveux <em>in vitro</em>.</p> Signup and view all the answers

Qu'est-ce qui a permis l'immortalisation de la lignée VERO?

<p>Une forte concentration en calcium a permis l'immortalisation de la lignée VERO.</p> Signup and view all the answers

Quelles innovations techniques ont été mises en place dans les années 1960 pour améliorer la culture cellulaire?

<p>Des liquides naturels enrichis ont été introduits comme solutions de culture.</p> Signup and view all the answers

Quel type de caryotype caractérise les cellules de la lignée VERO?

<p>Les cellules de la lignée VERO sont aneuploïdes avec un caryotype de type 2n + a.</p> Signup and view all the answers

Quel est le rôle des oncogènes viraux dans la transformation cellulaire?

<p>Les oncogènes viraux, comme ceux produits par le virus SV40, induisent la transformation des cellules en cellules immortelles.</p> Signup and view all the answers

Quelle technique a été développée dans les années 1970 pour fusionner des cellules?

<p>La technologie des hybridomes.</p> Signup and view all the answers

Quel est le rôle de l'ADN recombinant dans la culture cellulaire?

<p>Il permet le développement de protéines recombinantes par modification génétique.</p> Signup and view all the answers

Quels types de cellules peuvent être cultivés en laboratoire?

<p>La majorité des tissus humains et animaux peuvent être cultivés en laboratoire.</p> Signup and view all the answers

Quelle est la définition générale de la culture cellulaire?

<p>C'est une technique permettant de maintenir des cellules isolées dans des conditions favorables à leur survie et croissance.</p> Signup and view all the answers

D'où proviennent les cultures primaires?

<p>Les cultures primaires proviennent directement d'un organe ou d'un tissu isolé, appelé explant.</p> Signup and view all the answers

Comment se multiplient les cellules procaryotes dans des milieux inertes?

<p>Elles se multiplient sur des milieux purement chimiques capables de fournir des éléments essentiels.</p> Signup and view all the answers

Pourquoi certaines cellules, comme les cellules nerveuses, sont-elles plus complexes à cultiver?

<p>Les cellules nerveuses présentent une organisation et une fonction plus complexes, rendant leur culture plus difficile.</p> Signup and view all the answers

Pourquoi les virus ne peuvent-ils pas se multiplier sur des milieux chimiques?

<p>Parce qu'ils sont intracellulaires obligatoires et nécessitent une culture cellulaire pour se développer.</p> Signup and view all the answers

Quel effet la transformation cellulaire a-t-elle sur le comportement des cellules injectées dans un modèle immunodéficient?

<p>Les cellules transformées provoquent le développement d'une tumeur in vivo lorsqu'elles sont injectées dans un modèle immunodéficient comme la souris Nude.</p> Signup and view all the answers

Quels sont les trois feuillets embryonnaires d'où proviennent les cellules cultivées?

<p>Les cellules cultivées proviennent de l'endoderme, du mésoderme et de l'ectoderme.</p> Signup and view all the answers

Quelles enzymes sont utilisées pour dissocier les cellules lors de la culture primaire?

<p>La collagénase et la trypsine.</p> Signup and view all the answers

Pourquoi les cellules sanguines sont-elles cultivées en suspension plutôt que sur un support?

<p>Parce qu'elles n'adhèrent pas au support.</p> Signup and view all the answers

Qu'est-ce que la diploïdie et pourquoi est-elle importante pour les cultures primaires?

<p>La diploïdie signifie que les cellules sont diploïdes (2n) et conservent le génotype d'origine.</p> Signup and view all the answers

Comment l'adhérence au substrat affecte-t-elle la survie des cellules dans une culture primaire?

<p>Les cellules doivent s'adhérer pour survivre; sinon, elles subissent l'apoptose.</p> Signup and view all the answers

Quel type de support est généralement utilisé pour les cultures cellulaires adhérentes?

<p>Un support en plastique ou en verre.</p> Signup and view all the answers

Qu'est-ce que l'inhibition de contact et comment influence-t-elle la prolifération cellulaire?

<p>L'inhibition de contact empêche la prolifération une fois la surface disponible saturée.</p> Signup and view all the answers

Pourquoi certaines cultures primaires ont-elles une durée de survie limitée?

<p>Elles ne se multiplient pas indéfiniment et leur période de prolifération est courte.</p> Signup and view all the answers

Quels facteurs peuvent influencer l'adhérence des cellules sur le substrat?

<p>Les propriétés du plastique utilisé peuvent influencer l'adhérence.</p> Signup and view all the answers

Quelles sont les conséquences de la sénescence progressive sur les cellules cultivées?

<p>Les cellules perdent progressivement leurs propriétés fonctionnelles et deviennent moins représentatives de l'organisme d'origine, pouvant mener à la mort cellulaire par apoptose.</p> Signup and view all the answers

Qu'est-ce qu'une lignée cellulaire immortalisée?

<p>Une lignée cellulaire immortalisée est capable de se diviser indéfiniment sous certaines conditions, permettant des études prolongées.</p> Signup and view all the answers

Quel est le rôle du clonage dans l'étude des lignées cellulaires?

<p>Le clonage permet d'obtenir une population homogène dérivée d'une seule cellule, facilitant l'étude des caractéristiques spécifiques.</p> Signup and view all the answers

Pourquoi est-il préférable d'étudier les cellules le plus tôt possible après un faible nombre de passages?

<p>Les études précoces permettent d'éviter la perte des caractéristiques spécifiques à l'organisme d'origine due à la sénescence.</p> Signup and view all the answers

Qu'est-ce que la culture secondaire et comment est-elle obtenue?

<p>La culture secondaire est obtenue par le repiquage de cellules issues de cultures primaires dans un milieu adapté à leur survie et prolifération.</p> Signup and view all the answers

Combien de fois les fibroblastes humains peuvent-ils être repiqués avant d'atteindre leur limite de prolifération?

<p>Les fibroblastes humains peuvent être repiqués jusqu'à 50 fois avant de parvenir à leur limite de prolifération.</p> Signup and view all the answers

Comment les cellules cancéreuses sont-elles liées à l'immortalité cellulaire?

<p>Les cellules cancéreuses sont naturellement immortalisées, ce qui leur permet de se diviser indéfiniment sans subir les effets de la sénescence.</p> Signup and view all the answers

Quels sont les effets de la multiplication cellulaire sur les lignées semi-continues?

<p>Les lignées semi-continues ont une forte capacité de prolifération, permettant jusqu'à 50 à 60 générations cellulaires.</p> Signup and view all the answers

Flashcards

Culture cellulaire

Technique permettant de maintenir des cellules isolées dans des conditions de laboratoire favorables à leur survie et à leur croissance.

Définition générale de la culture cellulaire

Technique permettant de maintenir des cellules isolées dans des conditions de laboratoire favorables à leur survie et à leur croissance.

Milieu de culture pour bactéries

Milieu de culture contenant des éléments essentiels comme le potassium, le calcium, le phosphate, ainsi que des facteurs de croissance spécifiques à l'espèce ou au génotype bactérien.

Technologie des hybridomes

Fusion de deux cellules pour en créer une nouvelle, viable et fonctionnelle.

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Génie génétique

Développement de protéines recombinantes grâce à l'ADN recombinant, permettant la modification génétique des protéines.

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Culture de virus

Les virus ne peuvent pas se multiplier sur des milieux chimiques, nécessitent d'abord une culture cellulaire pour se développer.

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Bactéries incultivables in vitro

Certaines bactéries, comme le Mycobacterium leprae, ne se multiplient pas en culture et ne font que survivre.

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Optimisation des milieux nutritifs

Études approfondies sur les milieux de culture pour améliorer la survie et la multiplication des cellules.

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Lignée VERO

Une lignée cellulaire immortelle issue de cellules épithéliales du rein de singe vert. Elle a été immortalisée par des conditions de culture particulières (ex : haute concentration en calcium) et a un caryotype modifié (aneuploïde).

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Transformation cellulaire

Un processus qui transforme les cellules normales en cellules tumorales. Il est souvent associé à l'activation d'oncogènes.

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Oncogènes

Des gènes qui peuvent conduire au développement du cancer lorsqu'ils sont activés ou mutés.

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Culture primaire

Un type de culture cellulaire qui utilise les premières cellules prélevées directement d'un tissu ou d'un organe à l'état frais.

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Origine des cellules cultivées

Les cellules cultivées en laboratoire peuvent provenir des trois feuillets embryonnaires : endoderme, mésoderme et ectoderme.

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Explant

Un morceau de tissu ou d'organe utilisé pour lancer une culture primaire.

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Cellules immortalisées

Cellules qui ont la capacité de se diviser indéfiniment en laboratoire. Elles ont subi des modifications génétiques.

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Souris Nude

Un modèle animal immunodéficient, utilisé pour étudier la croissance tumorale in-vivo.

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Dissociation cellulaire

Processus de séparation des cellules d'un tissu en utilisant des enzymes protéolytiques comme la collagénase ou la trypsine. Ces enzymes dégradent la matrice extracellulaire, libérant les cellules.

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Mise en culture primaire

Le processus de mise en culture des cellules dissociées pour la première fois dans un milieu de culture adapté sur un support artificiel.

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Milieu de culture

Milieu artificiel qui fournit les nutriments et les conditions nécessaires à la survie et à la croissance des cellules en culture.

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Culture adhérente

Type de culture cellulaire où les cellules sont déposées sur un support solide comme du plastique ou du verre pour leur permettre de croître et de s'organiser.

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Culture en suspension

Type de culture cellulaire où les cellules restent en suspension dans le milieu de culture sans avoir besoin d'un support solide.

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Inhibition de contact

Propriété des cellules en culture adhérente qui empêche leur prolifération une fois qu'elles ont saturé la surface disponible.

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Durée de survie limitée

Phase de croissance limitée des cultures primaires. Les cellules peuvent se multiplier temporairement, mais cette période est courte.

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Apoptose

Processus de mort cellulaire programmée, déclenché par les cellules lorsqu'elles ne sont pas attachées à un support dans une culture adhérente.

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Phase de prolifération exponentielle

La phase pendant laquelle les cellules se multiplient rapidement, leur nombre augmentant de façon exponentielle.

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Point d'inflexion

Le moment où la croissance rapide des cellules ralentit, marquant le début du déclin.

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Phase de sénescence

La phase où les cellules vieillissent et meurent, la prolifération étant dépassée par la mort cellulaire.

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Lignées continues

Des lignées cellulaires qui peuvent se multiplier indéfiniment, contrairement aux cultures primaires qui finissent par vieillir.

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Transformation

Un processus qui rend les cellules immortelles, leur permettant de se multiplier indéfiniment.

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Aneuploïdie

Une anomalie chromosomique où les chromosomes ne sont pas présents en nombre normal, ce qui peut induire l'immortalisation.

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Indépendance du support

Un processus qui permet aux cellules transformées de se développer sans être attachées à une surface, comme du plastique ou du verre.

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Multiplication cellulaire (en culture)

La capacité d'une cellule à se diviser et à produire de nouvelles cellules, permettant ainsi la formation de cultures cellulaires. Cette capacité est limitée pour les lignées semi-continues.

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Sénescence cellulaire

Le processus naturel de vieillissement et de déclin des cellules. Les cellules semi-continues finissent par perdre leurs fonctions et leurs caractéristiques avec le temps, conduisant à leur mort par apoptose.

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Clonage cellulaire

Le processus de création de cultures cellulaires homogènes à partir d'une seule cellule. Cette cellule mère donne naissance à une colonie de cellules génétiquement identiques.

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Cellules immortalisées ou transformées

Des cellules qui peuvent se diviser indéfiniment sous certaines conditions. Elles ne sont pas soumises à la sénescence cellulaire et peuvent former des cultures cellulaires pérennes.

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Cellules cancéreuses

Des cellules issues de tumeurs, elles sont déjà naturellement immortalisées et se divisent sans limite.

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Cellules souches

Des cellules capables de se différencier en différents types de cellules et de se multiplier indéfiniment. Isolées et cultivées, elles donnent naissance à des cultures clonales.

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Importance des lignées cellulaires en recherche

L'utilisation de cultures cellulaires, notamment les lignées semi-continues, pour étudier des processus biologiques sur une période prolongée tout en maintenant une certaine homogénéité cellulaire.

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Culture secondaire

Le processus de repiquage de cellules issues de cultures primaires dans un milieu adapté à leur survie et leur prolifération.

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Quel est le rôle du sérum de veau fœtal (SVF) dans les milieux de culture cellulaire ?

Le sérum de veau fœtal (SVF) est un additif crucial dans les milieux de culture cellulaire. Il apporte un large éventail d'éléments essentiels, dont des facteurs de croissance, des hormones, des oligo-éléments et des facteurs d'attachement, qui favorisent la croissance et la survie des cellules.

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Nommez deux protéines de transport utilisées dans les milieux de culture cellulaire.

L'albumine et la transferrine sont des protéines de transport qui facilitent le transport des nutriments essentiels et des métaux, comme le fer, vers les cellules cultivées.

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Donnez deux exemples d'hormones ajoutées aux milieux de culture cellulaire.

L'insuline et l'IGF (Insulin Growth Factor) sont des hormones cruciales pour la croissance et la prolifération cellulaire. Elles agissent en régulant l'absorption du glucose et en stimulant la synthèse protéique.

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Donnez un exemple de facteur d'attachement utilisé dans les milieux de culture cellulaire.

Le collagène est une protéine structurelle présente dans les tissus conjonctifs. Il est utilisé pour recouvrir les supports de culture et favoriser l'adhésion des cellules, améliorant ainsi leur croissance et leur fonctionnalité.

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Quel est le rôle des antioxydants dans les milieux de culture cellulaire ?

Les antioxydants comme la vitamine E et la vitamine C protègent les cellules du stress oxydatif, un processus qui peut endommager les cellules et les empêcher de fonctionner correctement.

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Expliquez brièvement l'utilisation des antibiotiques dans les milieux de culture cellulaire.

Les antibiotiques, comme la pénicilline-streptomycine, sont souvent ajoutés aux milieux de culture pour prévenir les infections bactériennes. Cependant, leur utilisation est controversée car ils ralentissent la croissance cellulaire et ne sont pas recommandés pour les cultures destinées à être réinjectées chez des patients.

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Quel est le rôle du rouge de phénol dans les milieux de culture cellulaire ?

Le rouge de phénol, un indicateur de pH, est souvent ajouté aux milieux de culture. Il change de couleur en fonction de l'acidité du milieu, permettant de suivre les conditions de culture de manière visuelle.

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Donnez deux avantages et deux limites de l'utilisation du sérum dans les milieux de culture cellulaire.

Le sérum offre plusieurs avantages, notamment une grande richesse en éléments essentiels, une protection contre les toxines et une action tampon contre l'acidification du milieu. Cependant, il présente également des limites, notamment sa variabilité et sa composition complexe.

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Study Notes

Culture Cellulaire Animale: Principes et Procédés

  • Historique de la Culture Cellulaire: The understanding that living things are composed of cells is the result of several key discoveries. Anton van Leeuwenhoek (1632-1723) improved microscopes, observing microorganisms like bacteria and protists. Robert Hooke (1655) first observed cells in cork, coining the term "cellula". Rudolf Virchow (1858) defined the cell as the fundamental unit of life, linking cells to diseases. Louis Pasteur (1860) disproved spontaneous generation. Early cell cultures emerged in the 20th century.
  • Précurseurs de la Culture Cellulaire: Harrison (1907) cultured an explant (tissue sample) from a frog in lymph. This laid the groundwork for stem cell research. Carrel (1912) improved tissue culture techniques, focusing on: improving tissue sample collection, asepsis (sterility), and identifying nutritional needs of cells. Sabin (1936) cultured the poliovirus in embryonic nerve tissue. Enders (1949) expanded poliovirus culture to other human tissues, paving the way for viral vaccines.
  • Définitions de la Culture Cellulaire: Cell culture is a laboratory technique maintaining isolated cells under favorable conditions for survival and growth.
  • Culture de Cellules Eucaryotes: Eukaryotic cell cultures can be derived from tissues, organs or isolated cells (e.g., yeast), or plant or animal origin.
  • Types de Cultures Cellulaires: Cell cultures are primarily classified as primary cultures (or primo-cultures) and secondary cultures. Primary cultures derive directly from tissues/organs and are not designed for continuous re-cultivation. Secondary cultures, also called cell lines, originate from primary cultures and can be repeatedly subcultured.
  • Cellule Immortelle et Transformée: Immortalization is the acquisition of the ability to divide indefinitely in vitro. Transformation is a malignant conversion of cells, often linked to oncogenes (cancer-causing genes).
  • Transformation: Transformation can occur spontaneously in benign tumors or be induced by viruses or specific genes (e.g., activation of telomerases). Examples include oncogenes from SV40 virus and Henrietta Lacks' HeLa cell line. Transformation leads to increased cell division and potentially tumor development (tumoral behavior).
  • Culture Cellulaire: Cells are maintained in a laboratory environment that mimics their natural conditions. Various types of cells (e.g., epithelial cells) can be cultured, influencing its maintenance in vitro.
  • Culture Primaire: Cell cultures originate directly from tissues/organs. The cells are carefully separated/extracted from the surrounding tissue, then put into suitable culture medium in the laboratory.
  • Lignée Cellulaire: A culture of cells that can reproduce continuously and indefinitely.
  • Durée de Survie Limitée: Primary cultures have a limited lifespan; ultimately, cells stop dividing and senesce.
  • Dépendance à l'Adhérence: Many cells require a surface to adhere to for survival and growth.
  • Inhibition de Contact: Cells stop dividing when they reach a maximal density in a culture, a phenomenon known as contact inhibition.
  • Conservation des Cellules: Cells can be preserved through cryopreservation (freezing). Various techniques for cell conservation are available, including freezing cells using cryoprotectant solutions and storing them at low temperatures (e.g., liquid nitrogen). This ensures that cells remain viable for research use in the future and enables researchers to maintain a stable cell line.

Conditions de Culture

  • Milieux de culture (Compositions): The culture media must provide essential nutrients, such as amino acids, vitamins, salts, and glucose. The composition should also incorporate substances to prevent bacterial infection and ensure appropriate conditions for cell proliferation.
  • Sérum: Serum supplementation (e.g., fetal bovine serum) is often required but can vary depending on factors like cell type and experimental conditions.
  • pH and Oxygène (O2) and Dioxyde de carbone (CO2): These parameters are crucial for cellular survival and growth. Maintaining a stable pH and specific concentrations of oxygen and carbon dioxide is essential.

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