Cellular and Molecular Biology Lab: Protein Quantification
40 Questions
7 Views

Choose a study mode

Play Quiz
Study Flashcards
Spaced Repetition
Chat to lesson

Podcast

Play an AI-generated podcast conversation about this lesson

Questions and Answers

¿Cuál es el objetivo principal del método de ácido bicinconínico en este laboratorio?

  • Analizar la efectividad del sulfato de cobre en reacciones químicas
  • Investigar la relación entre el adenocarcinoma y la concentración de proteínas
  • Estudiar la estructura de las células PANC-1
  • Determinar la concentración de proteínas en una muestra desconocida (correct)

    • ¿Qué es lo que se mantiene estable en condiciones alcalinas según el método Ácido Bicinconínico?

  • La concentración de sulfato de cobre
  • El color púrpura generado en la reacción (correct)
  • La temperatura de la reacción
  • La concentración de proteínas en la muestra

    • ¿Cuál es el ion que se forma en la primera reacción del método BCA?

  • Cu3+
  • Cu2+
  • Cu4+
  • Cu1+ (correct)

    • ¿Qué es lo que se utiliza para determinar la concentración de proteínas en la muestra?

    <p>La curva de calibración</p> Signup and view all the answers

    ¿Cuál es la longitud de onda a la que se lee el color púrpura generado en la reacción?

    <p>562nm</p> Signup and view all the answers

    ¿Por qué se utiliza el método Ácido Bicinconínico en este laboratorio?

    <p>Porque es altamente sensitivo y permite determinar bajas concentraciones de proteínas</p> Signup and view all the answers

    ¿Qué es lo que se obtuvo del adenocarcinoma de células del conducto pancreático?

    <p>La línea celular PANC-1</p> Signup and view all the answers

    ¿Qué es lo que se utiliza en la primera reacción del método BCA?

    <p>El sulfato de cobre</p> Signup and view all the answers

    ¿Cuál es el volumen del reactivo A que se debe servir en el 'beaker'?

    <p>10 mL</p> Signup and view all the answers

    ¿Qué sucederá cuando se mezclan los reactivos A y B?

    <p>La solución se aclara y adquiere un color verde</p> Signup and view all the answers

    ¿Cuál es la concentración final del BSA en la 'working solution'?

    <p>500 µg/mL</p> Signup and view all the answers

    ¿Cuánto dH2O estéril se necesita para preparar la solución de BSA?

    <p>375 µL</p> Signup and view all the answers

    ¿Cuántos microtubos se deben rotular con la concentración final de BSA?

    <p>10 microtubos</p> Signup and view all the answers

    ¿Qué debe hacerse con la mezcla reactiva una vez preparada?

    <p>Dejarla a temperatura ambiente</p> Signup and view all the answers

    ¿Quién se encargará de descartar la mezcla reactiva?

    <p>El técnico de laboratorio</p> Signup and view all the answers

    ¿Cuál es la concentración inicial del BSA en la 'stock solution'?

    <p>2000 µg/mL</p> Signup and view all the answers

    ¿Cuál es el propósito de utilizar la ecuación de regresión en este experimento?

    <p>Establecer la relación entre la absorbancia y la concentración de proteínas</p> Signup and view all the answers

    ¿Cuál es el papel de la cisteína en este experimento?

    <p>Es un aminoácido que contribuye al color de las proteínas</p> Signup and view all the answers

    ¿Qué es lo que se utiliza para obtener la absorbancia en este experimento?

    <p>Un Microplate Reader iMARK (Bio-Rad)</p> Signup and view all the answers

    ¿Cuál es la función del Reactivo B en el experimento?

    <p>Reacciona con las proteínas para producir un compuesto coloreado</p> Signup and view all the answers

    ¿Cuál es el paso clave para determinar la concentración de proteínas totales en las muestras desconocidas?

    <p>Calcular la concentración de proteínas utilizando la ecuación de regresión</p> Signup and view all the answers

    ¿Qué es lo que se utiliza como proteínas estándares en este experimento?

    <p>Albúmina de suero bovino (BSA) y Inmunoglobulina G (IgG)</p> Signup and view all the answers

    ¿Cuál es la longitud de onda a la que se midi la absorbancia en este experimento?

    <p>570 nm</p> Signup and view all the answers

    ¿Cuál es el propósito del agua ultrapura en este experimento?

    <p>Preparar el BCA Working Reagent</p> Signup and view all the answers

    ¿Cuál es el volumen de agua que se necesita para preparar la solución de BSA al 20 µg/ml?

    <p>192 µL</p> Signup and view all the answers

    ¿Cuál es el paso adecuado para preparar la dilución 1:10 de la muestra de extracto del citoplasma?

    <p>Añadir 4 µL de muestra a 36 µL de agua estéril</p> Signup and view all the answers

    ¿Cuál es el propósito de incubar el plato a 37°C durante 30 minutos?

    <p>Permitir que la reacción química ocurra</p> Signup and view all the answers

    ¿Cuál es el volumen total de la solución de BSA que se necesita para preparar una solución al 100 µg/ml?

    <p>200 µL</p> Signup and view all the answers

    ¿Cuál es la temperatura a la que se debe incubar el plato?

    <p>37°C</p> Signup and view all the answers

    ¿Cuál es el paso siguiente después de incubar el plato durante 30 minutos?

    <p>Leer la absorbancia a 570nm</p> Signup and view all the answers

    ¿Cuál es el volumen de la muestra de BSA estándar que se añade a cada pozo?

    <p>10 µL</p> Signup and view all the answers

    ¿Cuál es el instrumento que se utiliza para leer la absorbancia a 570nm?

    <p>Microplate Reader iMARK</p> Signup and view all the answers

    ¿Qué debe hacerse después de seleccionar 'Start Read' en la página?

    <p>Espere a que el instrumento complete la lectura</p> Signup and view all the answers

    ¿Cuál es el propósito de seleccionar 'Matrix' en el paso 18?

    <p>Guardar todos los resultados</p> Signup and view all the answers

    ¿Qué debe hacerse después de presionar 'Export Data'?

    <p>Colocar el título del experimento</p> Signup and view all the answers

    ¿Cuál es el propósito de presionar el botón verde en el instrumento?

    <p>Apagar el instrumento</p> Signup and view all the answers

    ¿Qué debe hacerse después de presionar 'Close Door'?

    <p>Apague la computadora</p> Signup and view all the answers

    ¿Cuántos segundos debe mantenerse presionado el botón de apagado del instrumento?

    <p>5 segundos</p> Signup and view all the answers

    ¿Qué debe hacerse después de apagar el instrumento?

    <p>Coloque el forro al instrumento</p> Signup and view all the answers

    ¿Quién preparó originalmente este procedimiento?

    <p>Dra. Karen Woolcock</p> Signup and view all the answers

    Study Notes

    Objetivos del Laboratorio

    • Conocer la técnica de cuantificación de proteínas por ácido bicinconínico
    • Realizar una curva de calibración para determinar la concentración de proteínas en una muestra desconocida

    Introducción

    • La línea celular PANC-1 se obtuvo de un hombre de 56 años caucásico con adenocarcinoma de células del conducto pancreático
    • El método de ácido bicinconínico (BCA) se utiliza para determinar la concentración de proteínas totales en el citoplasma de las células PANC-1
    • El método BCA es altamente sensible y permite determinar bajas concentraciones de proteínas

    Principio del método BCA

    • La primera reacción implica la formación del complejo proteína-ion cuproso (Cu1+) a partir de la proteína y el sulfato de cobre (Cu2+ ion cúprico)
    • La segunda reacción implica la formación de un color púrpura establo en condiciones alcalinas al reaccionar el complejo proteína-Cu1+ con el BCA

    Preparación del Reactivo BCA

    • Se mezclan 10 mL del reactivo A y 0.2 mL del reactivo B
    • La mezcla se deja a temperatura ambiente hasta que se vaya a utilizar
    • El técnico de laboratorio se encargará de descartar la mezcla

    Preparación del Estándar de BSA

    • Dos estudiantes prepararán el BSA estándar de 500 µg/mL
    • Se diluye el BSA (2mg/mL) a una concentración de 500 µg/mL (working solution)
    • Se prepara una solución trabajadora (working solution) de 500 µL

    Dilución del Estándar de BSA

    • Se rotulan 10 microtubos con concentraciones de BSA que van desde 0 µg/mL hasta 200 µg/mL
    • Cada tubo se mantiene en hielo

    Determinación de la Concentración de Proteínas Totales

    • Se utiliza espectrofotometría para obtener la absorbancia a 570 nm
    • Se construye una curva de calibración utilizando proteínas estándares como BSA o Inmunoglobulina G (IgG)
    • Se aplica la ecuación de regresión (y=mx+b)

    Materiales

    • Proteínas totales del citoplasma de las células PANC-1
    • Albumina de suero bovino (2mg/mL)
    • BCA Working Reagents (WR)
    • Microplatos de 96 pozos
    • Punta estéril de 10, 100, 1000µL
    • Pipetas serológicas de 1 y 10 mL
    • Aspirador de vacío rápido de 2 y 10 mL
    • Beaker de 25 mL
    • Saran wrap
    • Microtubos estériles de 1.5 mL
    • Agua ultrapura
    • Hielo
    • Water Bath 37°C
    • Microplate Reader iMARK (Bio-Rad)

    Studying That Suits You

    Use AI to generate personalized quizzes and flashcards to suit your learning preferences.

    Quiz Team

    Related Documents

    Cuantificación de Proteínas Totales - Método BCA (Ejercicio 7) PDF

    Description

    Este ejercicio de laboratorio te permite aprender y practicar la técnica de cuantificación de proteínas por ácido bicinconínico. Conoce los objetivos y pasos para determinar la concentración de proteínas en una muestra desconocida. Aprende a realizar una curva de calibración y más.

    More Like This

    Use Quizgecko on...
    Browser
    Open
    Browser
    Browser