Biologia Cellulare: 3R e Colture Cellulari
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Questions and Answers

Qual è il principio che prevede di sostituire gli animali da modelli in vitro?

  • Replacement (correct)
  • Reduction
  • Refinement
  • Recycling

    • Qual è l'enzima utilizzato per disgregare il tessuto nella coltura cellulare?

  • Tripsina (correct)
  • EDTA
  • Amilasi
  • Pepsina

    • Quale processo cellulare porta all'accumulo di mutazioni e alla morte della cellula?

  • Apoptosi
  • Metabolismo
  • Senescenza (correct)
  • Divisione cellulare

    • Qual è la tecnica di trasferimento delle cellule in un'altra petri?

    <p>Splitting</p> Signup and view all the answers

    Quale sostanza viene usata per chelare gli ioni che permettono alle molecole di adesione di funzionare?

    <p>EDTA</p> Signup and view all the answers

    Cosa rappresenta la 'coltura primaria' nel contesto della coltura cellulare?

    <p>Cellule isolate direttamente dall'organismo</p> Signup and view all the answers

    Quali sono i tre principi fondamentali del principio delle 3R?

    <p>Reduction, Replacement, Refinement</p> Signup and view all the answers

    Qual è uno dei vantaggi (pros) dell'utilizzo di cellule direttamente dall'organismo di interesse?

    <p>Maggiore compatibilità cellulare</p> Signup and view all the answers

    Quale delle seguenti morfologie rappresenta le cellule epiteliali?

    <p>Cellule squamose, collonari e cuboidali</p> Signup and view all the answers

    Cosa succede se le cellule sono troppe in coltura?

    <p>Non hanno abbastanza nutrienti</p> Signup and view all the answers

    Qual è il metodo più utilizzato per distaccare le cellule aderenti?

    <p>Trattamento a tripsina</p> Signup and view all the answers

    Perché le cellule in sospensione non devono mai essere staccate?

    <p>Perché non hanno forma definita</p> Signup and view all the answers

    Qual è la combinazione corretta per identificare una cellula?

    <p>Utilizzare 3 o 4 marcatori</p> Signup and view all the answers

    Quale metodo è utilizzato per eliminare le contaminazioni nelle colture cellulari?

    <p>Utilizzare la sterilizzazione con fuoco</p> Signup and view all the answers

    Cosa caratterizza le cellule del sangue e della linea linfoide in coltura?

    <p>Galleggiano e sono di forma tonda</p> Signup and view all the answers

    Quale di queste attrezzature è essenziale per un biologo cellulare?

    <p>Cappa a flusso laminare</p> Signup and view all the answers

    Qual è il fattore che consente alle cellule di Henrietta Lacks di essere immortali?

    <p>Mutazione dell'enzima telomerasi</p> Signup and view all the answers

    Quale delle seguenti caratteristiche non si applica ai fibroblasti?

    <p>Sono cellule epiteliali</p> Signup and view all the answers

    Cosa determina se le cellule si sentono tra di loro in coltura?

    <p>Il numero di cellule</p> Signup and view all the answers

    Cosa avviene alle cellule quando contengono l'enzima HUMAN TELOMERASE?

    <p>I telomeri si allungano</p> Signup and view all the answers

    Quale metodo non è utilizzato per immortalizzare le cellule?

    <p>Utilizzare farmaci antitumorali</p> Signup and view all the answers

    Qual è la funzione principale della tripsina?

    <p>Digerire le proteine di adesione</p> Signup and view all the answers

    Che cosa genera la prima linea cellulare immortalizzata nota come HeLa?

    <p>Un campione di tumore alla cervice</p> Signup and view all the answers

    Per quale motivo è fondamentale adottare livelli di biosicurezza nelle colture cellulari?

    <p>Per conservare le colture e proteggere gli operatori</p> Signup and view all the answers

    Quali condizioni sono necessarie per la conservazione delle cellule nelle biobanche?

    <p>Temperatura di congelamento a -150°C</p> Signup and view all the answers

    Qual è uno degli svantaggi dell'utilizzo dello scraper per staccare le cellule?

    <p>Potrebbe danneggiare le cellule</p> Signup and view all the answers

    Cosa fa la soluzione di dissociazione cellulare?

    <p>Stacca le cellule in modo delicato</p> Signup and view all the answers

    Quale metodo permette di far comunicare due colture senza che le cellule si tocchino?

    <p>Transwell</p> Signup and view all the answers

    Perché la tripsina è considerata poco selettiva?

    <p>Perché digerisce tutti i tipi di proteine della superficie cellulare</p> Signup and view all the answers

    Qual è il significato di 'confluenza' nel contesto delle cellule in coltura?

    <p>La percentuale di copertura della superficie da parte delle cellule</p> Signup and view all the answers

    Quale metodo si raccomanda per evitare di danneggiare i marcatori superficiali delle proteine?

    <p>Utilizzare una soluzione di dissociazione non tripsinica</p> Signup and view all the answers

    Qual è l'intervallo di densità cellulare in sospensione ottimale per la divisione delle cellule?

    <p>50-70%</p> Signup and view all the answers

    Quale metodo è meno invasivo per staccare le cellule dalle piastrine?

    <p>Uso di una soluzione di dissociazione cellulare</p> Signup and view all the answers

    Quale sostanza chela il calcio e riduce l'adesione cellulare quando combinata con la tripsina?

    <p>EDTA</p> Signup and view all the answers

    Qual è una caratteristica principale delle colture tridimensionali (3D)?

    <p>Le cellule crescono in una matrice simile ai tessuti</p> Signup and view all the answers

    Qual è il metodo descritto per l'uso di pozzetti con fondo trattato?

    <p>Rendere le cellule meno aderenti</p> Signup and view all the answers

    Cosa si intende per monocultura?

    <p>Coltura di un unico tipo cellulare</p> Signup and view all the answers

    Qual è la differenza principale tra colture bidimensionali (2D) e tridimensionali (3D)?

    <p>Le 3D imitano l'ambiente in vivo</p> Signup and view all the answers

    Qual è uno degli effetti dell'arrivare al 100% di confluenza nelle cellule?

    <p>Le cellule smettono di dividersi completamente</p> Signup and view all the answers

    Cosa distingue una co-coltura diretta da una co-coltura indiretta?

    <p>Le cellule devono toccarsi fisicamente</p> Signup and view all the answers

    Study Notes

    Principio delle 3R

    • Le 3R sono Replacement, Refinement, e Reduction.
    • Replacement riguarda la sostituzione degli animali con modelli in vitro, ex vivo o in silico.
    • Refinement implica il controllo della ricerca con attenzione al benessere degli animali.
    • Reduction si riferisce alla riduzione del numero di animali utilizzati nella ricerca.

    Colture Cellulari: Storia e Tipologie

    • La prima coltura cellulare fu realizzata da Harrison nel 1907 con cellule nervose di un anfibio.
    • Questo tipo di coltura è chiamata coltura primaria e deriva direttamente dall'organismo vivente.
    • Per creare le colture primarie si disgrega meccanicamente il tessuto, si isolano le cellule e si mettono in coltura.
    • Le cellule possono essere direttamente posizionate in una piastra Petri (Petri dish) o prima trattate con un substrato per farle aderire alla superficie.
    • Una volta che le cellule riempiono la superficie della piastra Petri, la coltura deve essere divisa ("splitting") trasferendo parte delle cellule in un'altra piastra.
    • Tripsina e EDTA vengono utilizzate per disgregare il tessuto.
    • La tripsina è un enzima proteolitico che taglia le proteine di giunzione tra le cellule.
    • L'EDTA è un chelante dei metalli che blocca il funzionamento delle proteine ​​di adesione.
    • La coltura primaria ha una vita limitata e può essere contaminata da batteri, muffe e altre cellule eucariotiche.

    Linee Cellulari Immortalizzate

    • Henrietta Lacks fu diagnosticata con un tumore alla cervice nel 1951.
    • Un campione del suo tumore fu coltivato in vitro e le cellule si rivelarono immortali.
    • Le cellule tumorali di Henrietta Lacks avevano una mutazione nell'enzima telomerasi, che le rendeva capaci di replicarsi in modo indefinito.
    • La linea cellulare immortalizzata creata da queste cellule fu chiamata HeLa (dal nome di Henrietta Lacks).
    • Le cellule immortalizzate possono essere congelate e conservate in una biobanca.
    • Oncogeni e telomerasi possono essere utilizzati per immortalizzare le cellule.

    Attrezzatura e Livelli di Biosicurezza

    • Un laboratorio per colture cellulari richiede attrezzature specifiche come cappa a flusso laminare, centrifuga, incubatore, microscopio invertito, bagnetto a 37°C, frigoriferi e freezer, azoto liquido, camerette di conta per contare le cellule, pipette, materiale di plastica per coltivare le cellule e consumabili.
    • I livelli di biosicurezza sono fondamentali per la conservazione delle colture cellulari e per la sicurezza degli operatori.

    Morfologia delle Cellule in Coltura

    • Le colture cellulari possono essere distinte dal punto di vista morfologico.
    • Cellule epiteliali hanno diverse forme come squamose, cuboidali e collonari.
    • Cellule endoteliali sono allungate con bordi lisci.
    • Fibroblasti sono allungati con bordi non lisci e presentano delle protuberanze.
    • Cellule linfatiche sono in sospensione e non hanno una forma definita.
    • Neuroni hanno un supporto cellulare stellato e prolungamenti.

    Confluenza e Densità Cellulare

    • La confluenza indica la superficie della piastra Petri coperta dalle cellule.
    • Le colture cellulari devono essere mantenute in un range di confluenza specifico (circa il 50-70%) per garantire una crescita ottimale.
    • La densità cellulare indica il numero di cellule per volume di liquido.
    • Le colture cellulari in sospensione hanno una densità ottimale tra 500.000 e 1.000.000 di cellule per millilitro.

    Monocolture e Co-Colture

    • Una monocoltura comprende un solo tipo di cellula.
    • Una co-coltura comprende due o più tipi di cellule che interagiscono tra loro.
    • Le co-colture indirette comprendono due colture in due pozzetti separati che comunicano attraverso il liquido di coltura.
    • Le co-colture dirette comprendono due o più tipi di cellule in contatto diretto nella stessa piastra Petri.
    • Il transwell è un sistema che consente di mettere in contatto due colture senza che le cellule si tocchino.
    • Gli sfereoidi sono colture tridimensionali in cui le cellule si organizzano in strutture sferiche.

    Colture 3D

    • Le colture 3D simulano un ambiente tissutale più realistico rispetto alle colture 2D.
    • Le colture 3D possono essere create utilizzando metodi come il transwell, la petri ribaltata, pozzetti con fondo liscio e substrati gelificati (come collagene).
    • Le cellule nelle colture 2D sono forzate a espandersi sulla superficie della plastica e assumono una forma diversa rispetto a quella che assumerebbero in vivo.

    Metodi per Staccare le Cellule

    • La tripsina è il metodo più utilizzato per staccare le cellule aderenti dalla piastra Petri.
    • EDTA può essere utilizzato insieme alla tripsina per aumentare l'efficacia del distacco.
    • Il raschiamento con uno scraper può essere utilizzato se le cellule non si staccano con la tripsina.
    • Le soluzioni di dissociazione enzimatica non tripsinica sono utilizzate per preservare i marcatori superficiali delle cellule.

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    Description

    Questo quiz esplora il principio delle 3R nella ricerca e la storia delle colture cellulari. Scoprirai come la sostituzione, il perfezionamento e la riduzione influenzano l'uso degli animali nella scienza. Inoltre, impara le basi della coltura primaria e le tecniche coinvolte nel processo.

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