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Questions and Answers
Qual è il principio che prevede di sostituire gli animali da modelli in vitro?
Qual è l'enzima utilizzato per disgregare il tessuto nella coltura cellulare?
Quale processo cellulare porta all'accumulo di mutazioni e alla morte della cellula?
Qual è la tecnica di trasferimento delle cellule in un'altra petri?
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Quale sostanza viene usata per chelare gli ioni che permettono alle molecole di adesione di funzionare?
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Cosa rappresenta la 'coltura primaria' nel contesto della coltura cellulare?
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Quali sono i tre principi fondamentali del principio delle 3R?
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Qual è uno dei vantaggi (pros) dell'utilizzo di cellule direttamente dall'organismo di interesse?
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Quale delle seguenti morfologie rappresenta le cellule epiteliali?
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Cosa succede se le cellule sono troppe in coltura?
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Qual è il metodo più utilizzato per distaccare le cellule aderenti?
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Perché le cellule in sospensione non devono mai essere staccate?
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Qual è la combinazione corretta per identificare una cellula?
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Quale metodo è utilizzato per eliminare le contaminazioni nelle colture cellulari?
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Cosa caratterizza le cellule del sangue e della linea linfoide in coltura?
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Quale di queste attrezzature è essenziale per un biologo cellulare?
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Qual è il fattore che consente alle cellule di Henrietta Lacks di essere immortali?
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Quale delle seguenti caratteristiche non si applica ai fibroblasti?
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Cosa determina se le cellule si sentono tra di loro in coltura?
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Cosa avviene alle cellule quando contengono l'enzima HUMAN TELOMERASE?
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Quale metodo non è utilizzato per immortalizzare le cellule?
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Qual è la funzione principale della tripsina?
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Che cosa genera la prima linea cellulare immortalizzata nota come HeLa?
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Per quale motivo è fondamentale adottare livelli di biosicurezza nelle colture cellulari?
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Quali condizioni sono necessarie per la conservazione delle cellule nelle biobanche?
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Qual è uno degli svantaggi dell'utilizzo dello scraper per staccare le cellule?
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Cosa fa la soluzione di dissociazione cellulare?
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Quale metodo permette di far comunicare due colture senza che le cellule si tocchino?
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Perché la tripsina è considerata poco selettiva?
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Qual è il significato di 'confluenza' nel contesto delle cellule in coltura?
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Quale metodo si raccomanda per evitare di danneggiare i marcatori superficiali delle proteine?
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Qual è l'intervallo di densità cellulare in sospensione ottimale per la divisione delle cellule?
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Quale metodo è meno invasivo per staccare le cellule dalle piastrine?
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Quale sostanza chela il calcio e riduce l'adesione cellulare quando combinata con la tripsina?
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Qual è una caratteristica principale delle colture tridimensionali (3D)?
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Qual è il metodo descritto per l'uso di pozzetti con fondo trattato?
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Cosa si intende per monocultura?
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Qual è la differenza principale tra colture bidimensionali (2D) e tridimensionali (3D)?
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Qual è uno degli effetti dell'arrivare al 100% di confluenza nelle cellule?
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Cosa distingue una co-coltura diretta da una co-coltura indiretta?
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Study Notes
Principio delle 3R
- Le 3R sono Replacement, Refinement, e Reduction.
- Replacement riguarda la sostituzione degli animali con modelli in vitro, ex vivo o in silico.
- Refinement implica il controllo della ricerca con attenzione al benessere degli animali.
- Reduction si riferisce alla riduzione del numero di animali utilizzati nella ricerca.
Colture Cellulari: Storia e Tipologie
- La prima coltura cellulare fu realizzata da Harrison nel 1907 con cellule nervose di un anfibio.
- Questo tipo di coltura è chiamata coltura primaria e deriva direttamente dall'organismo vivente.
- Per creare le colture primarie si disgrega meccanicamente il tessuto, si isolano le cellule e si mettono in coltura.
- Le cellule possono essere direttamente posizionate in una piastra Petri (Petri dish) o prima trattate con un substrato per farle aderire alla superficie.
- Una volta che le cellule riempiono la superficie della piastra Petri, la coltura deve essere divisa ("splitting") trasferendo parte delle cellule in un'altra piastra.
- Tripsina e EDTA vengono utilizzate per disgregare il tessuto.
- La tripsina è un enzima proteolitico che taglia le proteine di giunzione tra le cellule.
- L'EDTA è un chelante dei metalli che blocca il funzionamento delle proteine di adesione.
- La coltura primaria ha una vita limitata e può essere contaminata da batteri, muffe e altre cellule eucariotiche.
Linee Cellulari Immortalizzate
- Henrietta Lacks fu diagnosticata con un tumore alla cervice nel 1951.
- Un campione del suo tumore fu coltivato in vitro e le cellule si rivelarono immortali.
- Le cellule tumorali di Henrietta Lacks avevano una mutazione nell'enzima telomerasi, che le rendeva capaci di replicarsi in modo indefinito.
- La linea cellulare immortalizzata creata da queste cellule fu chiamata HeLa (dal nome di Henrietta Lacks).
- Le cellule immortalizzate possono essere congelate e conservate in una biobanca.
- Oncogeni e telomerasi possono essere utilizzati per immortalizzare le cellule.
Attrezzatura e Livelli di Biosicurezza
- Un laboratorio per colture cellulari richiede attrezzature specifiche come cappa a flusso laminare, centrifuga, incubatore, microscopio invertito, bagnetto a 37°C, frigoriferi e freezer, azoto liquido, camerette di conta per contare le cellule, pipette, materiale di plastica per coltivare le cellule e consumabili.
- I livelli di biosicurezza sono fondamentali per la conservazione delle colture cellulari e per la sicurezza degli operatori.
Morfologia delle Cellule in Coltura
- Le colture cellulari possono essere distinte dal punto di vista morfologico.
- Cellule epiteliali hanno diverse forme come squamose, cuboidali e collonari.
- Cellule endoteliali sono allungate con bordi lisci.
- Fibroblasti sono allungati con bordi non lisci e presentano delle protuberanze.
- Cellule linfatiche sono in sospensione e non hanno una forma definita.
- Neuroni hanno un supporto cellulare stellato e prolungamenti.
Confluenza e Densità Cellulare
- La confluenza indica la superficie della piastra Petri coperta dalle cellule.
- Le colture cellulari devono essere mantenute in un range di confluenza specifico (circa il 50-70%) per garantire una crescita ottimale.
- La densità cellulare indica il numero di cellule per volume di liquido.
- Le colture cellulari in sospensione hanno una densità ottimale tra 500.000 e 1.000.000 di cellule per millilitro.
Monocolture e Co-Colture
- Una monocoltura comprende un solo tipo di cellula.
- Una co-coltura comprende due o più tipi di cellule che interagiscono tra loro.
- Le co-colture indirette comprendono due colture in due pozzetti separati che comunicano attraverso il liquido di coltura.
- Le co-colture dirette comprendono due o più tipi di cellule in contatto diretto nella stessa piastra Petri.
- Il transwell è un sistema che consente di mettere in contatto due colture senza che le cellule si tocchino.
- Gli sfereoidi sono colture tridimensionali in cui le cellule si organizzano in strutture sferiche.
Colture 3D
- Le colture 3D simulano un ambiente tissutale più realistico rispetto alle colture 2D.
- Le colture 3D possono essere create utilizzando metodi come il transwell, la petri ribaltata, pozzetti con fondo liscio e substrati gelificati (come collagene).
- Le cellule nelle colture 2D sono forzate a espandersi sulla superficie della plastica e assumono una forma diversa rispetto a quella che assumerebbero in vivo.
Metodi per Staccare le Cellule
- La tripsina è il metodo più utilizzato per staccare le cellule aderenti dalla piastra Petri.
- EDTA può essere utilizzato insieme alla tripsina per aumentare l'efficacia del distacco.
- Il raschiamento con uno scraper può essere utilizzato se le cellule non si staccano con la tripsina.
- Le soluzioni di dissociazione enzimatica non tripsinica sono utilizzate per preservare i marcatori superficiali delle cellule.
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Description
Questo quiz esplora il principio delle 3R nella ricerca e la storia delle colture cellulari. Scoprirai come la sostituzione, il perfezionamento e la riduzione influenzano l'uso degli animali nella scienza. Inoltre, impara le basi della coltura primaria e le tecniche coinvolte nel processo.