Análisis de fluorescencia en ciclos
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Análisis de fluorescencia en ciclos

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Questions and Answers

¿Cuál es la configuración de las hébras del ADN?

  • Ambas hebras van de 5´a 3´
  • Una hebra va de 5´a 3´ y la otra de 3´a 5´ (correct)
  • Una hebra va de 3´a 5´ y la otra de 5´a 3´
  • Ambas hebras van de 3´a 5´

    • ¿Qué ocurre cuando se aplica calor al ADN de doble banda?

  • Se destruye el ADN
  • No ocurre nada
  • Se separan las dos hébras (correct)
  • Se unen las dos hébras

    • ¿Cuáles bases nitrogenadas se unen entre sí?

  • Guanina y Timina
  • Citosina y Adenina
  • Adenina y Timina
  • Guanina y Citosina (correct)

    • ¿Cuál es el nombre del proceso que se utiliza para amplificar los nucleótidos?

    <p>Reacción en cadena de la polimerasa</p> Signup and view all the answers

    ¿Cuáles son los componentes del nucleótido?

    <p>Azúcar y base nitrogenada</p> Signup and view all the answers

    ¿Cuántos nucleótidos diferentes hay en el ADN?

    <p>4</p> Signup and view all the answers

    ¿Por qué es importante recordar la configuración del ADN?

    <p>Para entender la PCR</p> Signup and view all the answers

    ¿Qué ocurre después de separar las dos hébras del ADN?

    <p>Se detecta una región específica</p> Signup and view all the answers

    ¿Cuál es la fórmula que describe la reacción de amplificación de ADN durante el proceso de PCR?

    <p>2x10^n</p> Signup and view all the answers

    ¿Por qué no se puede visualizar automáticamente una sola copia de ADN?

    <p>Porque la copia es muy pequeña para ser visualizada</p> Signup and view all the answers

    ¿Cuál es el propósito principal de correr el ADN en una electroforesis?

    <p>Separar el ADN según su peso molecular</p> Signup and view all the answers

    ¿Cuál es el propósito de los primers en la reacción de PCR?

    <p>Ubicar la región de interés</p> Signup and view all the answers

    ¿Qué ocurre cuando se alcanzan los 95°C en un proceso de PCR?

    <p>Se inicia el proceso de desnaturalización de las cadenas de ADN</p> Signup and view all the answers

    ¿Qué sucede con la cadena de ADN original después de un ciclo de PCR?

    <p>Se duplica</p> Signup and view all the answers

    ¿Cuántas copias de ADN se obtendrían después de 3 ciclos de PCR?

    <p>16</p> Signup and view all the answers

    ¿Cuál es la función del bromuro de tidio en un gel de agarosa?

    <p>Marcar el gel para revelar las bandas de ADN</p> Signup and view all the answers

    ¿Por qué se utiliza la PCR en lugar de otras técnicas de amplificación de ADN?

    <p>Porque se puede amplificar una sola copia de ADN</p> Signup and view all the answers

    ¿Qué se forma en el paso 5 del PCR convencional?

    <p>Un gel de agarosa</p> Signup and view all the answers

    ¿Qué representa la columna de peso molecular en un gel de agarosa?

    <p>El tamaño de las moléculas</p> Signup and view all the answers

    ¿Qué sucede con la hebra de ADN cuando se aplica calor?

    <p>Se abre en su totalidad</p> Signup and view all the answers

    ¿Qué es lo que se coloca en la plataforma luminiscente para poder ver?

    <p>El gel de agarosa</p> Signup and view all the answers

    ¿Cuál es el resultado final de una reacción de PCR después de 50 ciclos?

    <p>Miles de copias de ADN</p> Signup and view all the answers

    ¿Cuál es el propósito de los primers en un proceso de PCR?

    <p>Amplificar un fragmento específico de ADN</p> Signup and view all the answers

    ¿Qué se forma cuando se alcanzan los 500 pares de bases en la columna de peso molecular?

    <p>Una banda en la columna de peso molecular</p> Signup and view all the answers

    ¿Qué sucede en el ciclo 18,5 en este experimento?

    <p>La fluorescencia comienza a aumentar exponencialmente</p> Signup and view all the answers

    ¿Qué ocurre cuando se tiene una gran cantidad de ADN o ARN en la muestra?

    <p>La curva de fluorescencia se desplaza hacia la izquierda</p> Signup and view all the answers

    ¿Por qué un valor de CT bajo significa que fue fácil amplificar?

    <p>Porque la muestra contenía mucha cantidad de ADN o ARN</p> Signup and view all the answers

    ¿Qué sucede cuando el valor de CT es muy alto?

    <p>Es más difícil amplificar la muestra</p> Signup and view all the answers

    ¿Qué indica un valor de CT bajo en un PCR para SARS-CoV-2?

    <p>Que la muestra contenía mucha cantidad de ADN o ARN</p> Signup and view all the answers

    ¿Cuál es el propósito de determinar el valor de CT en un PCR?

    <p>Determinar la cantidad de ADN o ARN en la muestra</p> Signup and view all the answers

    ¿Qué sucede cuando se alcanza el valor de CT en un PCR?

    <p>La fluorescencia aumenta exponencialmente</p> Signup and view all the answers

    ¿Por qué la cantidad de ADN o ARN en la muestra afecta el valor de CT?

    <p>Porque la cantidad de ADN o ARN afecta la velocidad de amplificación</p> Signup and view all the answers

    ¿Cuál es el patrón de crecimiento de la cantidad de moléculas de fluoróforo en el proceso de PCR?

    <p>Exponencial</p> Signup and view all the answers

    ¿Por qué la cantidad de fluorescencia es muy baja en los primeros ciclos del proceso de PCR?

    <p>Por la cantidad insuficiente de copias de ADN</p> Signup and view all the answers

    ¿Qué ocurre en el punto morado de la gráfica de fluorescencia?

    <p>La cantidad de fluorescencia comienza a aumentar exponencialmente</p> Signup and view all the answers

    ¿Qué se utiliza para determinar el punto en el que se dispara la cantidad de fluorescencia?

    <p>Un umbral</p> Signup and view all the answers

    ¿Qué representa la primera derivada de la curva de fluorescencia?

    <p>La velocidad de aumento de la cantidad de fluorescencia</p> Signup and view all the answers

    ¿Cuál es el resultado final del proceso de PCR?

    <p>La llegada a una meseta de fluorescencia</p> Signup and view all the answers

    ¿Qué se observa en la gráfica de fluorescencia después del ciclo 10?

    <p>Un aumento exponencial en la cantidad de fluorescencia</p> Signup and view all the answers

    ¿Qué representa el eje 'y' en la gráfica de fluorescencia?

    <p>La cantidad de fluorescencia</p> Signup and view all the answers

    Study Notes

    Secuenciación del Genoma

    • El proceso de secuenciación del genoma implica la lectura del ADN todo.
    • La técnicas moleculares de diagnóstico viral, como la PCR, se utiliza para amplificar segmentos específicos del ADN.

    Configuración del ADN

    • El ADN está formado por nucleósidos (azúcar y fosfato) y bases nitrogenadas (A, C, G, T).
    • Las bases nitrogenadas se complementan: Aparea con T y G aparea con C.
    • El ADN tiene dos hebras que se orientan en direcciones opuestas: 5' a 3' y 3' a 5'.

    Fundamento de la reacción en cadena de la polimerasa (PCR)

    • La PCR se basa en la separación de las hebras del ADN doble mediante calor (95°C).
    • Las hebras separadas se vuelven a unir con la ayuda de primers específicos y polimerasa, lo que permite amplificar un segmento específico del ADN.
    • La PCR es un proceso exponencial, es decir, en cada ciclo se duplica el número de copias de ADN.

    Visualización de la amplificación

    • La amplificación del ADN se puede visualizar mediante electroforesis en un gel de agarosa.
    • La electroforesis separa los fragmentos de ADN según su tamaño y carga.
    • Al revelar el gel con bromuro de etidio, se pueden ver las bandas de ADN amplificado.

    Desnaturalización

    • La desnaturalización es el proceso de separación de las hebras del ADN.
    • In vivo, la desnaturalización ocurre durante la replicación del ADN.
    • In vitro, la desnaturalización se logra mediante calor (95°C).

    Reacción de PCR

    • La reacción de PCR implica la unión de los primers a las hebras de ADN separadas.
    • La polimerasa se une al grupo hidroxilo (HO) y comienza a sintetizar el ADN.
    • La fluorescencia aumenta exponencialmente con cada ciclo de PCR.
    • La curva de fluorescencia muestra una fase exponencial, una meseta y un punto de inflexión, que se utiliza para determinar el valor de CT (ciclo threshold).

    Valor de CT

    • El valor de CT es el ciclo en el que se alcanza la fase exponencial de la amplificación.
    • El valor de CT es más bajo cuando se tiene más cantidad de ADN o ARN en la muestra.
    • El valor de CT se utiliza para determinar la presencia de virus o antígenos en una muestra.

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    Description

    Determinar el valor de CT en función de los ciclos y la fluorescencia. Analizar cómo la fluorescencia cambia en cada ciclo. Calcular el punto de inflexión en la gráfica.

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