40 Questions
¿Cuál es la configuración de las hébras del ADN?
Una hebra va de 5´a 3´ y la otra de 3´a 5´
¿Qué ocurre cuando se aplica calor al ADN de doble banda?
Se separan las dos hébras
¿Cuáles bases nitrogenadas se unen entre sí?
Guanina y Citosina
¿Cuál es el nombre del proceso que se utiliza para amplificar los nucleótidos?
Reacción en cadena de la polimerasa
¿Cuáles son los componentes del nucleótido?
Azúcar y base nitrogenada
¿Cuántos nucleótidos diferentes hay en el ADN?
4
¿Por qué es importante recordar la configuración del ADN?
Para entender la PCR
¿Qué ocurre después de separar las dos hébras del ADN?
Se detecta una región específica
¿Cuál es la fórmula que describe la reacción de amplificación de ADN durante el proceso de PCR?
2x10^n
¿Por qué no se puede visualizar automáticamente una sola copia de ADN?
Porque la copia es muy pequeña para ser visualizada
¿Cuál es el propósito principal de correr el ADN en una electroforesis?
Separar el ADN según su peso molecular
¿Cuál es el propósito de los primers en la reacción de PCR?
Ubicar la región de interés
¿Qué ocurre cuando se alcanzan los 95°C en un proceso de PCR?
Se inicia el proceso de desnaturalización de las cadenas de ADN
¿Qué sucede con la cadena de ADN original después de un ciclo de PCR?
Se duplica
¿Cuántas copias de ADN se obtendrían después de 3 ciclos de PCR?
16
¿Cuál es la función del bromuro de tidio en un gel de agarosa?
Marcar el gel para revelar las bandas de ADN
¿Por qué se utiliza la PCR en lugar de otras técnicas de amplificación de ADN?
Porque se puede amplificar una sola copia de ADN
¿Qué se forma en el paso 5 del PCR convencional?
Un gel de agarosa
¿Qué representa la columna de peso molecular en un gel de agarosa?
El tamaño de las moléculas
¿Qué sucede con la hebra de ADN cuando se aplica calor?
Se abre en su totalidad
¿Qué es lo que se coloca en la plataforma luminiscente para poder ver?
El gel de agarosa
¿Cuál es el resultado final de una reacción de PCR después de 50 ciclos?
Miles de copias de ADN
¿Cuál es el propósito de los primers en un proceso de PCR?
Amplificar un fragmento específico de ADN
¿Qué se forma cuando se alcanzan los 500 pares de bases en la columna de peso molecular?
Una banda en la columna de peso molecular
¿Qué sucede en el ciclo 18,5 en este experimento?
La fluorescencia comienza a aumentar exponencialmente
¿Qué ocurre cuando se tiene una gran cantidad de ADN o ARN en la muestra?
La curva de fluorescencia se desplaza hacia la izquierda
¿Por qué un valor de CT bajo significa que fue fácil amplificar?
Porque la muestra contenía mucha cantidad de ADN o ARN
¿Qué sucede cuando el valor de CT es muy alto?
Es más difícil amplificar la muestra
¿Qué indica un valor de CT bajo en un PCR para SARS-CoV-2?
Que la muestra contenía mucha cantidad de ADN o ARN
¿Cuál es el propósito de determinar el valor de CT en un PCR?
Determinar la cantidad de ADN o ARN en la muestra
¿Qué sucede cuando se alcanza el valor de CT en un PCR?
La fluorescencia aumenta exponencialmente
¿Por qué la cantidad de ADN o ARN en la muestra afecta el valor de CT?
Porque la cantidad de ADN o ARN afecta la velocidad de amplificación
¿Cuál es el patrón de crecimiento de la cantidad de moléculas de fluoróforo en el proceso de PCR?
Exponencial
¿Por qué la cantidad de fluorescencia es muy baja en los primeros ciclos del proceso de PCR?
Por la cantidad insuficiente de copias de ADN
¿Qué ocurre en el punto morado de la gráfica de fluorescencia?
La cantidad de fluorescencia comienza a aumentar exponencialmente
¿Qué se utiliza para determinar el punto en el que se dispara la cantidad de fluorescencia?
Un umbral
¿Qué representa la primera derivada de la curva de fluorescencia?
La velocidad de aumento de la cantidad de fluorescencia
¿Cuál es el resultado final del proceso de PCR?
La llegada a una meseta de fluorescencia
¿Qué se observa en la gráfica de fluorescencia después del ciclo 10?
Un aumento exponencial en la cantidad de fluorescencia
¿Qué representa el eje 'y' en la gráfica de fluorescencia?
La cantidad de fluorescencia
Study Notes
Secuenciación del Genoma
- El proceso de secuenciación del genoma implica la lectura del ADN todo.
- La técnicas moleculares de diagnóstico viral, como la PCR, se utiliza para amplificar segmentos específicos del ADN.
Configuración del ADN
- El ADN está formado por nucleósidos (azúcar y fosfato) y bases nitrogenadas (A, C, G, T).
- Las bases nitrogenadas se complementan: Aparea con T y G aparea con C.
- El ADN tiene dos hebras que se orientan en direcciones opuestas: 5' a 3' y 3' a 5'.
Fundamento de la reacción en cadena de la polimerasa (PCR)
- La PCR se basa en la separación de las hebras del ADN doble mediante calor (95°C).
- Las hebras separadas se vuelven a unir con la ayuda de primers específicos y polimerasa, lo que permite amplificar un segmento específico del ADN.
- La PCR es un proceso exponencial, es decir, en cada ciclo se duplica el número de copias de ADN.
Visualización de la amplificación
- La amplificación del ADN se puede visualizar mediante electroforesis en un gel de agarosa.
- La electroforesis separa los fragmentos de ADN según su tamaño y carga.
- Al revelar el gel con bromuro de etidio, se pueden ver las bandas de ADN amplificado.
Desnaturalización
- La desnaturalización es el proceso de separación de las hebras del ADN.
- In vivo, la desnaturalización ocurre durante la replicación del ADN.
- In vitro, la desnaturalización se logra mediante calor (95°C).
Reacción de PCR
- La reacción de PCR implica la unión de los primers a las hebras de ADN separadas.
- La polimerasa se une al grupo hidroxilo (HO) y comienza a sintetizar el ADN.
- La fluorescencia aumenta exponencialmente con cada ciclo de PCR.
- La curva de fluorescencia muestra una fase exponencial, una meseta y un punto de inflexión, que se utiliza para determinar el valor de CT (ciclo threshold).
Valor de CT
- El valor de CT es el ciclo en el que se alcanza la fase exponencial de la amplificación.
- El valor de CT es más bajo cuando se tiene más cantidad de ADN o ARN en la muestra.
- El valor de CT se utiliza para determinar la presencia de virus o antígenos en una muestra.
Determinar el valor de CT en función de los ciclos y la fluorescencia. Analizar cómo la fluorescencia cambia en cada ciclo. Calcular el punto de inflexión en la gráfica.
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