Laboratorio II De Bioquímica PDF

Laboratorio ii Objetivos: - Desarrollar procedimientos básicos, que permitan el aislamiento de una proteína y de fosfolípidos a partir de la r espectiva muestra biológica y su valoración (cuantitativa o cualitativa). - Aislar la case ína de una muestra de leche tomando en con...

Laboratorio ii Objetivos: - Desarrollar procedimientos básicos, que permitan el aislamiento de una proteína y de fosfolípidos a partir de la r espectiva muestra biológica y su valoración (cuantitativa o cualitativa). - Aislar la case ína de una muestra de leche tomando en consideraci ón su punto isoeléctrico (pI) - Desarrollar protocolo experimental que permita separar, aislar y purificar mezcla de fosfolípidos (lecitina y cefali na) presentes en material biológico, basándose en criterios de solubilidad. - Calcular el rendimiento pr áctico de la case ína aislada de la leche. - Documentar evidencias qu ímicas que validen el aislamiento del fosfolípido a partir de la yema de huevo Proteínas Aislamiento de la caseína en la leche Por su bajo pI ésta proteína será insoluble en pH iguales a 4,7 Muestra Reactivo 200 mL de leche HCl, Alcohol 95%, éter 95% o hexano. EN UN BEAKER añadir: - Medir el pH de la leche - Añadir 200 ml de leche con 200 ml de agua - Mezclar - Añadir HCl gota a gota hasta un pH de 4,8 - Reposar 15 minutos - Filtrar - Realizar 3 lavados al sólido con alcohol - Realizar un lavado con éter o hexano - Colocar caseína en una cápsula de Petri, pesada e identificada - Dejar secar a temperatura ambiente por una semana - Pesar y estimar rendimiento Lípidos Extracción de la Lecitina y Cefalina Estos son fosfolípidos altamente polares que poseen cadenas hidrófobas e hidrofílicas, para separarlas del huevo se necesita deshidratar la yema y disolver los fosfolípidos en cloroformo Muestras Reactivos Yema de huevo de gallina Acetona y cloroformo EN UN BEAKER añadir: - Yema de huevo + 20 ml de acetona - Decantar sobre filtro - Realizar sucesivos lavados con acetona hasta obtener un sólido incoloro o Filtrado (líquido)  Reservar para análisis  Determinación de colesterol o Precipitado blanco  Secar entre papeles de filtro  Lavar dos veces con cloroformo 20 ml por lavado  Filtrar  Reunir los dos filtrados  Evaporar  Residuos de lecitina y cefalina