Lymphomes B diffus à grandes cellules (DLBCL) PDF - L3 UPEC - 18/03/2024

Lymphomes B diffus à grandes cellules (DLBCL) Une maladie hétérogène Dr Alexis Claudel, Pr Marie-Hélène Delfau-Larue Département d’hématologie et immunologie biologiques INSERM U955, équipe 9 CHU Henri Mondor, Créteil...

Lymphomes B diffus à grandes cellules (DLBCL) Une maladie hétérogène Dr Alexis Claudel, Pr Marie-Hélène Delfau-Larue Département d’hématologie et immunologie biologiques INSERM U955, équipe 9 CHU Henri Mondor, Créteil 18/03/2024 L3 UPEC, UE Bases moléculaires de l’oncogénèse Plan 1. Rappels sur l’ontogénie B T-dépendante 2. Oncogénèse des Lymphomes B Diffus à Grandes Cellules 3. Apport de ces connaissance à la biologie innovante 18/03/2024 DLBCL - Une maladie hétérogène - Alexis Claudel 2 Plan 1. Rappels sur l’ontogénie B T-dépendante 2. Oncogénèse des Lymphomes B Diffus à Grandes Cellules 3. Apport de ces connaissance à la biologie innovante 18/03/2024 DLBCL - Une maladie hétérogène - Alexis Claudel 3 Situation anatomique 18/03/2024 DLBCL - Une maladie hétérogène - Alexis Claudel 4 Anatomopathologie du centre germinatif Duarte et al, Case reports in Pediatrics 2013 18/03/2024 DLBCL - Une maladie hétérogène - Alexis Claudel 5 Le follicule secondaire différenciation Manteau Plasmocyte longue durée de vie apoptose (mutation désavantageuse) LB mémoire centrocytes zone FDC TFH claire sélection commutation pour l'affinité isotypique zone Ag sombre centroblastes hypermutation somatique LB2 activé prolifération Heesters et al, Nat Rev Immunology 2014 clonale 18/03/2024 DLBCL - Une maladie hétérogène - Alexis Claudel 6  4 acteurs principaux Cellule dentritique LT CD4+ (TFH) LB2 folliculaire Cellule dendritique folliculaire CD FDC cytokines BCR / Ag (IL-21, IL-4...) CD4 1 3 TFH TCR CMH II 2 CD40L / CD40 Halloran et al, NEJM 2004 Le LB présente au LTFH sur son CMH II les mêmes peptides que ceux présentés par la CD lors du priming du LT naïf. L'antigène doit être en partie protéique pour pouvoir être présenté par le CMH II. 18/03/2024 DLBCL - Une maladie hétérogène - Alexis Claudel 7 Coopération T-B Crotty et al, Nat Rev Immunol 2015 18/03/2024 DLBCL - Une maladie hétérogène - Alexis Claudel 8 Coopération T-B et synapse immunologique In vivo Simulation « Absence » d’antigène « Présence » d’antigène Mempel et al, Nature 2004 Cartron et al, Immunity 2004 18/03/2024 DLBCL - Une maladie hétérogène - Alexis Claudel 9 La réponse anticorps secondaire T dépendante Premiere rencontre : Deuxième rencontre : réponse primaire réponse secondaire 100,000 IgG 10,000 Titre anticorps 1000 100 10 IgM 1 0 Jours 0 7 14 21 0 7 14 Réponse secondaire :  Plus RAPIDE  Plus INTENSE  Plus AFFINE (hypermutations somatiques)  ADAPTEE (switch/commutation isotypique) 18/03/2024 DLBCL - Une maladie hétérogène - Alexis Claudel 10  Organes lymphoïdes secondaires Ganglions Lymphatiques Environ 1000 isolés ou groupés en "aires", superficielles ou profondes Quelques mm de diamètre : arrondis ou réniformes Rôles Exclusion des pathogènes (phagocytose par les macrophages) Développement des réponses immunitaires spécifiques (vis-à-vis des antigènes transportés par la lymphe) Mais aussi Rate Tissus lymphoïde associés aux muqueuses (MALT) 18/03/2024 DLBCL - Une maladie hétérogène - Alexis Claudel 11 Plan 1. Rappels sur l’ontogénie B T-dépendante 2. Oncogénèse des Lymphomes B Diffus à Grandes Cellules 3. Apport de ces connaissance à la biologie innovante 18/03/2024 DLBCL - Une maladie hétérogène - Alexis Claudel 12 Plan 1. Rappels sur l’ontogénie B T-dépendante 2. Oncogénèse des Lymphomes B Diffus à Grandes Cellules 3. Apport de ces connaissance à la biologie innovante 18/03/2024 DLBCL - Une maladie hétérogène - Alexis Claudel 13 Classification des hémopathies lymphoïdes B 18/03/2024 DLBCL - Une maladie hétérogène - Alexis Claudel 14 Lymphomes : cancer immuno-hématologique King, Nature reviews immunology 2011 18/03/2024 DLBCL - Une maladie hétérogène - Alexis Claudel 15 Lymphomes : cancer immuno-hématologique Hanahan et al, Cancer Discovery 2022 18/03/2024 DLBCL - Une maladie hétérogène - Alexis Claudel 16 Lymphomes = pathologie tumorale des lymphocytes matures Différents types histologiques Toutes localisations possibles 17 Laurent et al, JCO 2017 Classification des lymphomes B Swerdlow et al, OMS 2017 18  Classification des lymphomes B : cellule d’origine (COO) WHO classification of Tumours of haematopoietic and lymphoid tissues 2016-17 Swerdlow et al, OMS 2017 Indolentes Manteau, LLC Folliculaire Manteau, LLC, Myélome LZM, Waldentröm Agressive LAL B Manteau Burkitt, DLBCL, Manteau, DLBCL Myélome Hodgkin COO & Lymphome B Diffus à Grandes Cellules (ARN) Alizadeh et al, Nature 2000 DLBCL - Une maladie hétérogène - Alexis Claudel 20 COO & Lymphome B Diffus à Grandes Cellules (ARN) Rosenwald et al, NEJM 2002 21 COO & Lymphome B Diffus à Grandes Cellules (ARN) 18/03/2024 DLBCL - Une maladie hétérogène - Alexis Claudel 22 Lymphomagénèse du DLBCL GC 18/03/2024 DLBCL - Une maladie hétérogène - Alexis Claudel 23 Rappel : 2 destins du lymphocyte B2 folliculaire Tangye et al, Nat Rev Immuno 2013 18/03/2024 DLBCL - Une maladie hétérogène - Alexis Claudel 24 Rappel : BCL6, répresseur transcriptionnel clef du CG IL21 + IL4 Dalla-Favera, Trieste 2016 18/03/2024 DLBCL - Une maladie hétérogène - Alexis Claudel 25 Rappel : BCL6, répresseur transcriptionnel clef du CG IL21 Dalla-Favera, Trieste 2016 18/03/2024 DLBCL - Une maladie hétérogène - Alexis Claudel 26 Malignité : comment ne pas downreguler BCL6 ATR CHEK1 TP53 CDKN1A CDKN1B p21 miR-155 miR-361 AID extinction Miao et al, Nat Rev Clinical Oncology 2019 18/03/2024 DLBCL - Une maladie hétérogène - Alexis Claudel 27 Malignité : comment ne pas downreguler BCL6 Chronic BCR (MAPK+NFKB) CREBBP EP300 ATR CHEK1 TP53 EZH2 CDKN1A CDKN1B p21 miR-155 CD40 miR-361 AID extinction (NFKB) Miao et al, Nat Rev Clinical Oncology 2019 18/03/2024 DLBCL - Une maladie hétérogène - Alexis Claudel 28 L’AID (activation induced cytidine deaminase) : LE DANGER Miao et al, Nat Rev Clinical Oncology 2019 18/03/2024 DLBCL - Une maladie hétérogène - Alexis Claudel 29 Paysage mutationnel des DLBCL 18/03/2024 DLBCL - Une maladie hétérogène - Alexis Claudel 30 Classification initialement transcriptomique des DLBCL WES Reddy et al, Cell 2017 18/03/2024 DLBCL - Une maladie hétérogène - Alexis Claudel 31 Alterations de la regulation épigenetique : méthylation des histones Inhibition Tri -méthylation de la transcription de Mutation EZH2 de la PRDM1, XBP1 (différenciation) activatrice lysine 27 de H3 (H3K27) régulation du cycle cellulaire 18/03/2024 DLBCL - Une maladie hétérogène - Alexis Claudel 32 Alterations de la regulation épigenetique : méthylation des histones Inhibition Tri -méthylation de la transcription de Mutation EZH2 de la PRDM1, XBP1 (différenciation) activatrice lysine 27 de H3 (H3K27) régulation du cycle cellulaire Activation Mono et di -méthylation de la transcription de Mutation KMT2D (MLL2) de la Gènes suppresseurs de tumeurs inhibitrice lysine 27 de H4 (H3K4) (SOCS3, TNFRSF14…) 18/03/2024 DLBCL - Une maladie hétérogène - Alexis Claudel 33 Alterations de la regulation épigenetique : acétylation des histones Activation CREBBP Acétylation de la transcription de Mutation & de la PRDM1 inhibitrice EP300 lysine 27 de H3 (H3K27) 18/03/2024 DLBCL - Une maladie hétérogène - Alexis Claudel 34  Classification des lymphomes B : cellule d’origine (COO) WHO classification of Tumours of haematopoietic and lymphoid tissues 2016-17 Swerdlow et al, OMS 2017 Indolentes Manteau, LLC Folliculaire Manteau, LLC, Myélome LZM, Waldentröm Agressive LAL B Manteau Burkitt, DLBCL, Manteau, DLBCL Myélome Hodgkin Antigènes T-indépendants exemple : antigène polysaccharidique de S. pneumoniae, bactérie encapsulée unité pentamérique Thorax 1998;53:159-162 structure spécifiquement retrouvée chez certains agents pathogènes structure extrêmement répétitive polysaccharides, lipo-polysaccharides, polymères d'acides aminés (flagelline), polymères artificiels (dextran, ficoll) Adapted from PIR Immunologie Paris Descartes - 2019-2020, Sébastien Storck Activation lymphocytaire B Antigène TD Antigène TI répétitivité signal BCR fort signal BCR 2 modéré liaison LB2 PAMP / TLR folliculaire B1 3 MZB collaboration TFH T-B antigènes TI-2 : uniquement répétitifs ex : polysaccharides bactériens antigènes TI-1 : certains contiennent PAMP IL-4 IL-21  activation polyclonale des LB 3 ex : LPS, ADN CpG non méthylé les réponses TD mobilisent les LB2 folliculaires les réponses TI mobilisent  les LB2 de la zone marginale de la rate (MZB)  les cellules B1 d'origine fœtale (cavité pleurale et péritonéale) Adapted from PIR Immunologie Paris Descartes - 2019-2020, Sébastien Storck Caractéristiques des réponses T-indépendantes Titres TD sériques IgM IgG1 4 7 14 4 7 TI 0 4 7 0 4 7 réponse TI plus rapide que TD n'induit pas de GC car collaboration T-B impossible (Ag non protéique)  pas de maturation d'affinité  moins de commutation isotypique n'induit pas de plasmocytes à longue durée de vie induit des cellules B mémoires indépendantesAdapted du GC from PIR Immunologie Paris Descartes - 2019-2020, Sébastien Storck Réponse T-indépendante Akkaya et al, Nat Rev Immunology 2020 18/03/2024 DLBCL - Une maladie hétérogène - Alexis Claudel 39 Activation cellulaire constitutive : altération de la voie T-indépendante 18/03/2024 DLBCL - Une maladie hétérogène - Alexis Claudel 40 Echappement au système immunitaire Miao et al, Nat Rev Clinical Oncology 2019 18/03/2024 DLBCL - Une maladie hétérogène - Alexis Claudel 41 Un paysage dense Miao et al, Nat Rev Clinical Oncology 2019 18/03/2024 DLBCL - Une maladie hétérogène - Alexis Claudel 42 Un paysage dense Dalla-Favera, Trieste 2016 18/03/2024 DLBCL - Une maladie hétérogène - Alexis Claudel 43 Classification moléculaire actuelle des DLBCL (ADN) u- Morin et al, BJH 2022 DLBCL 18/03/2024 DLBCL - Une maladie hétérogène - Alexis Claudel 44 Plan 1. Rappels sur l’ontogénie B dépendante de l’antigène 2. Oncogénèse des Lymphomes B Diffus à Grandes Cellules 3. Apport de ces connaissances à la biologie innovante 18/03/2024 DLBCL - Une maladie hétérogène - Alexis Claudel 45 Plan 1. Rappels sur l’ontogénie B dépendante de l’antigène 2. Oncogénèse des Lymphomes B Diffus à Grandes Cellules 3. Apport de ces connaissances à la biologie innovante 18/03/2024 DLBCL - Une maladie hétérogène - Alexis Claudel 46 ADN libre circulant 18/03/2024 DLBCL - Une maladie hétérogène - Alexis Claudel 47 cfDNA Fragments d’ADN libres en circulation 200 paires de bases environ Libérés par apoptose ou nécrose Quantité de cfDNA très variable Corcoran, NEJM 2018 18/03/2024 cfDNA et hémopathies malignes Paediatric Lymphomas, L Mussolin, Journal of Cancer, 2013 Adult lymphomas Hohaus, annals of oncology, 2009 18/03/2024 DLBCL - Une maladie hétérogène - Alexis Claudel 49 ctDNA Fragments d’ADN libres en circulation 200 paires de bases environ cfDNA Libérés par apoptose ou nécrose Quantité de cfDNA très variable ctDNA En cas de cancer, le ctDNA est une fraction enrichie du cfDNA ctDNA reflète l’hétérogénéité tumorale ctDNA est corrélé au volume tumoral (TMTV) 18/03/2024 DLBCL - Une maladie hétérogène - Alexis Claudel 50 Informativité du ctDNA Fragmentation pattern Jonathan et al, Nature Reviews Cancer 2017 18/03/2024 DLBCL - Une maladie hétérogène - Alexis Claudel 51 Séquençage haut débit 18/03/2024 DLBCL - Une maladie hétérogène - Alexis Claudel 52 Molecular Biology Revolution Set the Stage for the Human Genome Project (HGP) DNA DNA Polymerase Chain Reaction Cloning Sequencing (PCR) 1970s 1977 1983 53 https://www.genome.gov/human-genome-project  Two Major Protagonists of HGP Drama Francis Collins (UVA Alumnus) Craig Venter (UCSD Alumnus) https://www.genome.gov/human-genome-project Purported ‘Race’ to Sequence Human Genome VS Initial HGP Plan Venter/Celera Plan ‘Clone-by-Clone ‘Whole-Genome Shotgun Sequencing’ Shotgun Sequencing’ Editorial Aside: Not really a fair ‘race’ since Celera had access to HGP data (but not vice versa)!!! https://www.genome.gov/human-genome-project Press Coverage of the ‘Race’ Vanity Fair (December 2000) https://www.genome.gov/human-genome-project  February 2001: Papers Reporting Draft Sequence of Human Genome HGP Paper Venter/Celera Paper https://www.genome.gov/human-genome-project Principe du NGS « Massively parallel sequencing » Alignement sur le génome de référence Profondeur suffisante Capacité actuelle des séquenceurs 18/03/2024 58 Préparation des librairies WGS WES capture Target amplicon 18/03/2024 DLBCL - Une maladie hétérogène - Alexis Claudel 59 Principe du NGS Analyse bio-info puis Interprétation biologique QIAsymphony, Qiagen Magnis (XTHS2), Agilent Illumina Analyse primaire : base-calling et demultiplexage Analyse secondaire : allignement et variant-calling Analyse tertiaire : interprétation biologique 18/03/2024 DLBCL - Une maladie hétérogène - Alexis Claudel 60 Principe du NGS 18/03/2024 DLBCL - Une maladie hétérogène - Alexis Claudel 61 Principe du NGS ROI VAF = nombre de reads variants / nombre de reads totaux lus à cette position 62 Du cfDNA au ctDNA Quantification NGS du ctDNA : quantité de cfDNA x VAF moyenne des variants VAF (T>G) 2/7= 28,9% GCTCTCAGGCTGTTCATTTGCAGA GCTCTCAGGCTGTTCATGTGCAGA GCTCTCAGGCTGTTCATTTGCAGA GCTCTCAGGCTGTTCATTTGCAGA GCTCTCAGGCTGTTCATGTGCAGA GCTCTCAGGCTGTTCATTTGCAGA GCTCTCAGGCTGTTCATTTGCAGA 18/03/2024 DLBCL - Une maladie hétérogène - Alexis Claudel 63 Principe du NGS Kurtz, Nature biotechnology 2021 18/03/2024 DLBCL - Une maladie hétérogène - Alexis Claudel 64 Interprétation des variants (analyse tertiaire) Mutation … G A T … Vrai variant A Poly- A Nucléotide morphisme alternatif A T Erreur A 18/03/2024 65 Applications 18/03/2024 DLBCL - Une maladie hétérogène - Alexis Claudel 66 Apport de ces connaissances à la biologie innovante Dépistage 18/03/2024 DLBCL - Une maladie hétérogène - Alexis Claudel 67 Apport de ces connaissances à la biologie innovante Dépistage Diagnostic 18/03/2024 DLBCL - Une maladie hétérogène - Alexis Claudel 68 ctDNA dans les DLBCL: un marqueur tumoral? Training set (n=30) Validation set (n=20) Rossi et al, Blood 2017 18/03/2024 DLBCL - Une maladie hétérogène - Alexis Claudel 69 Apport de ces connaissances à la biologie innovante Dépistage Diagnostic Traitement 18/03/2024 DLBCL - Une maladie hétérogène - Alexis Claudel 70 ctDNA: corrélation avec le TMTV McEvoy et al, BMC Cancer 2018 18/03/2024 DLBCL - Une maladie hétérogène - Alexis Claudel 71 ctDNA au diagnostic dans les DLBCL: un marqueur pronostique Le Goff et al, BJH 2023 Meriranta et al, Blood 2022 18/03/2024 DLBCL - Une maladie hétérogène - Alexis Claudel 72  1 classification, 2 objectifs : pronostique Chapuy : nat med 2018 Wright : cancer cell 2020 Lacy : blood 2020 Runge : br J haematol 2021 18/03/2024 DLBCL - Une maladie hétérogène - Alexis Claudel 73 Première ligne DLBCL Coiffier et al, NEJM 2002 18/03/2024 DLBCL - Une maladie hétérogène - Alexis Claudel 74 Echecs d’améliorations de la première ligne depuis le RCHOP 18/03/2024 DLBCL - Une maladie hétérogène - Alexis Claudel 75 1 classification, 2 objectifs : théranostique Wright et al, Cancer Cell 2020 Zhang et al, Cancer Cell 2023 18/03/2024 DLBCL - Une maladie hétérogène - Alexis Claudel 76 Apport de ces connaissances à la biologie innovante Dépistage Diagnostic Traitement Suivi 18/03/2024 DLBCL - Une maladie hétérogène - Alexis Claudel 77 ctDNA comme marqueur de MRD Corcoran, NEJM 2018 18/03/2024 78 Analyse du ctDNA dans les DLBCL Roschewski et al, Oncology 2016 Newman et al, Nat biotechnology 2016 Analyse du ctDNA dans le suivi des DLBCL Meriranta et al, Blood 2022 Réponse moléculaire précoce au traitement EMR (Early Molecular Response) : 2 Log10 drop after 1 cycle MMR (Major Molecular Response) : 2,5 Log10 drop after 2 cycles Kurtz, JCO 2018 18/03/2024 DLBCL - Une maladie hétérogène - Alexis Claudel 81 Réponse moléculaire fin de traitement Meriranta et al, Blood 2022 18/03/2024 DLBCL - Une maladie hétérogène - Alexis Claudel 82 Réponse moléculaire fin de traitement Meriranta et al, Blood 2022 18/03/2024 DLBCL - Une maladie hétérogène - Alexis Claudel 83 Apport de l’analyse des variants en cis (variants de phases) 18/03/2024 Kurtz et al, Nat Biotechno 2021 Projet French Connect Harmoniser l’analyse du ctDNA en France « Un résultat concomitant de la réponse moléculaire du ctDNA et de la réponse métabolique au PETSCAN, en permettant une évaluation globale (métabolique et moléculaire) de la réponse au traitement est un élément attendu des cliniciens »