Techniques Histologiques - PDF

**[La Technique Histologique :]** **La technique histologique comporte plusieurs étapes :** 1. **[Le prélèvement et fixation : ]** A. **[Le prélèvement : ]** Il doit être pratiqué le plus tôt possible après la mort de l'organisme vivant. Ce prélèvement peut être effectué sur un **organisme mai...

**[La Technique Histologique :]** **La technique histologique comporte plusieurs étapes :** 1. **[Le prélèvement et fixation : ]** A. **[Le prélèvement : ]** Il doit être pratiqué le plus tôt possible après la mort de l'organisme vivant. Ce prélèvement peut être effectué sur un **organisme maintenu en vie**, notamment chez l'humain dans le cas des biopsies. L'échantillon prélevé peut être **sectionné** en plusieurs pièces qui seront sélectionnées selon les objectifs de l'étude. B. **[La fixation :]** Le but de la fixation est de **conserver l\'échantillon** dans un état le plus proche possible de l\'état vivante. Elle consiste à immobiliser les tissus in-situ tout en préservant l'aspect structural du tissu. Cette fixation se fait à l'aide de fixateurs **physique** ou **chimique.** **Les fixateurs physiques :** La congélation (ex. à l\'azote liquide à -195°C) **Les fixateurs chimiques :** Fixateurs chimiques simples ou composés **Fixateurs chimiques simples :** Ethanol ou alcool éthylique / Le formaldéhyde ou formol **Fixateurs chimiques composés :** - Liquide de Carnoy : Alcool + chloroforme + acide acétique. - Liquide de Bouin : Formol + acide picrique 2. **[Déshydratation :]** La déshydratation est une étape de la préparation pour l\'inclusion de l\'échantillon. L\'objectif de la déshydratation est de remplacer l\'eau contenue dans les tissus par un **solvant organique** **miscible à la paraffine**. La paraffine est solide à température ambiante, mais elle devient liquide à haute température. Pour que les tissus puissent être inclus dans la paraffine, ils doivent être complètement déshydratés. La déshydratation s\'effectue en plusieurs étapes, généralement dans des **bains successifs d\'alcools de concentrations croissantes**. Dans certains cas, un **bain de toluène** peut être utilisé à la place du bain d\'alcool à 100 %. Le toluène est un solvant plus efficace pour éliminer l\'eau, mais il est aussi plus **toxique**. 3. **[L'inclusion à la paraffine :]** Cette étape consiste à substituer le liquide intracellulaire, qui donne la consistance molle des tissus, par de la paraffine qui **durcira l'échantillon** et par conséquent **facilitera son débitage en coupes.** Le résultat de l'inclusion étant l'obtention d'**un bloc de paraffine**. 4. 5. **[Etalement des coupes :]** Une fois les coupes obtenues, elles seront étalées sous forme d'un ruban de quelques coupes sur une lame porte-objet en verre. Elles y seront fixées à la lame par des **substances collantes** telle que **l'albumine** ou de **l'eau gélatinée**. 6. **[Déparaffinage et réhydratation :]** C'est une étape qui permet de préparer la coloration des coupes. La première partie de cette étape consiste à **enlever la paraffine** hydrophobe contenue dans les cellules en la faisant fondre sur une **plaque chauffante**. Au cours de la seconde partie de cette étape, la paraffine hydrophobe est substituée par de l'eau compatible avec les colorants hydrosolubles. On procèdera de **manière contraire de la déshydratation** vu plus haut. Les lames sur lesquelles sont fixées les coupes des échantillons subiront des **bains d'alcool** à **degrés décroissant**. 7. **[Coloration :]** Les structures cellulaires sont difficiles à distinguer et des méthodes de coloration particulières s\'avèrent le plus souvent indispensables pour pouvoir contraster les différentes parties d'un tissu. 8. **[Montage et Observation : ]** **Les lames** sélectionnées sont recouverte d'une **lamelle** qui sera collée à la lame grâce à de la résine type **baume du Canada**. Ces lames peuvent être **conservées longtemps**. Les lames sont observées au **microscope photonique** qui donnera un aperçu sur l'organisation **[histologique]** des coupes. **[La technique cytologique (technique des coupes minces) :]** 1. **[Prélèvement :]** Il peut se faire aussi bien chez un organisme **animal ou végétal**. Quand il s'agit d'un animal, il peut être pratiqué sur un animal maintenu en vie (biopsie) ou sacrifié (tué). Dans ce dernier cas la démarche méthodologique consiste à : - Anesthésier l\'animal, - Dissection, - Prélèvement d\'une partie de l\'organe à étudier. 2. **[Fixation :]** Le but de la fixation est de **conserver** les structures cellulaires, après prélèvement dans un état aussi proche que possible de leur état vivant. Cette fixation se fait à l'aide de fixateurs : Physiques : \- Propane liquide (-196°) \- Hélium liquide (- 272) Ou chimiques : **Glutaraldéhyde**, c'est le plus utilisé, il permet de **fixer les protéines, les sucres et les acides nucléiques.** 3. **[Post fixation : ]** C'est une étape supplémentaire qui consiste à mettre l'échantillon dans du **tétraoxyde d'osmium**. Ce produit permet de **fixer les lipides**. 4. **[Déshydratation : ]** C'est une étape qui permet de préparer l'inclusion avec une résine hydrophobe. Il est indispensable **d'éliminer toute trace d'eau** des cellules en les plongeant dans des **bains d'alcool à degrés croissants**. Le dernier bain est **l'oxyde de propylène** qui constitue le solvant de résine d'inclusion. 5. **[L'inclusion à la résine :]** Cette étape consiste à remplacer l\'eau par une **résine hydrophobe** qui durcira l\'échantillon, facilitant ainsi la production d\'une coupe fine et le rendant perméable aux électrons. 6. **[Réalisation des coupes : ]** Cette étape permet la production de **coupes ultra-fines** (d\'une **épaisseur de 50 à 70 nm**), réalisées à l\'aide d\'un instrument appelé **ultramicrotome**. Les **coupes semi-fines** sont effectuées avec un **couteau en verre** et **les coupes fines** avec **un couteau en diamant**. Les coupes sont recueillies **dans un bac d\'eau**. 7. **[Récupération des coupes et étalement sur grille porte objet :]** Les coupes obtenues, sont recueillies sur une **grille métallique (en cuivre)** parfois recouverte d'un **film de collodion** perméable aux électrons. 8. **[Contraste (coloration) :]** C\'est une étape équivalente à la coloration de la technique histologique, qui permet **d\'augmenter** et **d\'améliorer** **le contraste** des territoires cellulaires en les combinant avec des **sels de métaux lourds** tels que : - Acétate d\'uranyle. - Citrate de plomb.