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Questions and Answers

Quel est l'objectif principal de la phase d'élimination de l'eau des cellules ?

  • Remplacer l'eau par une résine hydrophobe (correct)
  • Préparer les échantillons pour la coloration
  • Hydrater les cellules pour les rendre flexibles
  • Diminuer la taille des échantillons

Quelle est l'épaisseur des coupes ultra-fines effectuées à l'aide de l'ultramicrotome ?

  • Entre 50 et 70 nm (correct)
  • Entre 25 et 40 nm
  • Entre 100 et 150 nm
  • Entre 5 et 10 nm

Quelle méthode est utilisée pour recueillir les coupes effectuées avec un couteau en verre ?

  • Directement sur une grille en métal
  • Sur une plaque en plastifiée
  • Dans un bac de colle
  • Dans un bac d'eau (correct)

Quel type de solvant est utilisé pour l'inclusion des échantillons ?

<p>Oxyde de propylène (D)</p> Signup and view all the answers

Quels sels de métaux lourds sont utilisés pour augmenter le contraste lors de la coloration ?

<p>Acétate d'uranium et citrate de plomb (A)</p> Signup and view all the answers

Quelle substance est souvent utilisée pour fixer les lames sur la lame?

<p>L'albumine (A)</p> Signup and view all the answers

Quelle est la première étape du déparaffinage?

<p>Enlever la paraffine en la faisant fondre (C)</p> Signup and view all the answers

À quel type de microscope les lames sont-elles observées?

<p>Microscope photonique (B)</p> Signup and view all the answers

Quel est l'objectif principal de la fixation?

<p>Conserver les structures cellulaires (A)</p> Signup and view all the answers

Quel fixateur chimique est le plus utilisé pour fixer les tissus?

<p>Glutaraldéhyde (C)</p> Signup and view all the answers

Quel est le rôle du tétraoxyde d'osmium lors de la post-fixation?

<p>Fixer les lipides (B)</p> Signup and view all the answers

Quelle étape suit la fixation dans la méthode cytologique?

<p>Post fixation (A)</p> Signup and view all the answers

Comment se déroule la déshydratation des lames?

<p>Avec des bains d'alcool à degrés décroissants (B)</p> Signup and view all the answers

Quel est l'objectif principal de la fixation dans la technique histologique ?

<p>Conserver l'échantillon dans un état proche de l'état vivant (A)</p> Signup and view all the answers

Quel type de solvant est utilisé lors de la déshydratation des tissus ?

<p>Un solvant organique miscible à la paraffine (A)</p> Signup and view all the answers

Quelle est la fonction des fixateurs chimiques simples dans la technique histologique ?

<p>Ils conservent l'aspect structural du tissu (A)</p> Signup and view all the answers

Pourquoi l'inclusion à la paraffine est-elle nécessaire ?

<p>Pour durcir l'échantillon et faciliter son débitage (C)</p> Signup and view all the answers

Quel est le principal inconvénient du bain de toluène par rapport au bain d'alcool à 100 % ?

<p>Il est plus toxique (C)</p> Signup and view all the answers

Quelle étape suit la déshydratation dans la technique histologique ?

<p>L'inclusion à la paraffine (B)</p> Signup and view all the answers

Quels fixateurs sont considérés comme chimiques composés ?

<p>Liquide de Bouin (C), Liquide de Carnoy (D)</p> Signup and view all the answers

Comment se présentent les coupes une fois étalées sur la lame porte-objet ?

<p>Sous forme d'un ruban de quelques coupes (D)</p> Signup and view all the answers

Flashcards

Prélèvement

Action de recueillir un échantillon biologique le plus tôt possible après la mort.

Fixation

Processus visant à conserver l'échantillon dans un état proche du vivant, en immobilisant les tissus.

Fixateurs physiques

Méthodes de fixation utilisant la congélation, par exemple à l'azote liquide (-195°C).

Fixateurs chimiques

Utilisent des produits chimiques pour immobiliser les tissus.Simples ou composés.

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Déshydratation

Remplacement de l'eau des tissus par un solvant organique pour inclusion en paraffine.

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Inclusion à la paraffine

Remplacement du liquide cellulaire par de la paraffine, durcissant l'échantillon pour faciliter le découpage.

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Etalement des coupes

Disposition des tranches de tissu obtenues sur une lame porte-objet.

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Fixation (Biologie)

Processus permettant de préserver les structures cellulaires dans un état proche de leur état vivant, pour étude.

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Fixateur (chimique)

Substance utilisée pour fixer les protéines, sucres et acides nucléiques.

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Fixateur (physique)

Méthodes physiques de fixation, comme le propane liquide ou l'hélium liquide.

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Post-fixation

Traitement supplémentaire servant à fixer les lipides dans l'échantillon.

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Déshydratation (histologie)

Préparation de l'inclusion avec résine hydrophobe.

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Déparaffinage

Enlèvement de la paraffine hydrophobe pour préparer la coloration des coupes.

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Réhydratation (histologie)

Remplacement de la paraffine par l'eau compatible avec les colorants hydrosolubles, en traitement inverse à la déshydratation.

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Coloration (histologie)

Méthode indispensable pour distinguer les différentes structures cellulaires d'un tissu.

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Montage (histologie)

Couverture de la lame avec une lamelle, collée avec une résine (comme le baume du Canada).

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Tétraoxyde d'osmium

Produit chimique utilisé dans la post-fixation pour fixer les lipides.

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Substance collante

Matière utilisée pour fixer les coupes sur la lame, comme l'albumine ou l'eau gélatinée.

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Lamelles

Couche mince de verre ou autre matériau qui recouvre une préparation microscopique.

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Microscope photonique

Appareil optique pour observer un échantillon microscopique à travers des lentilles.

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Éliminer l'eau des cellules

Étape essentielle pour préparer les cellules à l'observation au microscope électronique. Cela consiste à remplacer l'eau par des bains d'alcool à degrés croissants, culminant avec l'oxyde de propylène.

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Résine hydrophobe

Substance qui remplace l'eau dans les cellules, les durcissant et les rendant perméables aux électrons pour l'observation au microscope.

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Coupes ultra-fines

Fragments minces de tissus préparés, d'environ 50 à 70 nm d'épaisseur, cruciaux pour l'observation au microscope électronique.

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Ulramicrotome

Instrument utilisé pour réaliser des coupes ultra-fines des échantillons biologiques.

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Coupes semi-fines

Coupes plus épaisses, utilisées pour visualiser l'architecture globale de l'échantillon avant les préparations ultérieures pour la microscopie électronique.

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Couteau en verre / diamant

Outils utilisés pour réaliser des coupes, soit semi-fines (verre) ou ultra-fines (diamant), en microscopie électronique.

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Grille métallique (cuivre)

Support métallique sur lequel sont déposées les coupes ultra-fines pour l'observation au microscope électronique.

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Film de collodion

Une couche mince d'une substance organique, souvent déposée sur les grilles métalliques pour faciliter l'adhérence et la perméabilité aux électrons.

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Contraste (coloration)

Traitement des coupes pour mettre en évidence les différentes structures cellulaires. Il améliore la visibilité des détails.

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sels de métaux lourds

Substances chimiques (comme l'acétate d'uranyle et le citrate de plomb) utilisées pour améliorer le contraste des structures lors de l'observation au microscope électronique.

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Study Notes

La Technique Histologique

  • Comprend plusieurs étapes
  • Prélèvement et fixation sont les premières étapes

Prélèvement

  • Se fait le plus tôt possible après la mort de l'organisme, ou sur un être vivant (biopsie)
  • L'échantillon peut être sectionné pour étude
  • Importance de la rapidité

Fixation

  • But : conserver l'aspect du tissu vivant
  • Utilise des fixateurs physiques (congélation à l'azote liquide) et chimiques
    • Fixateurs chimiques simples : ethanol, formol
    • Fixateurs chimiques composés : liquide de Carnoy (alcool, chloroforme, acide acétique); liquide de Bouin (formol, acide picrique)

Déshydratation

  • Étape préparatoire à l'inclusion
  • Remplace l'eau des tissus par un solvant organique (miscible à la paraffine)
  • Plusieurs bains d'alcools de concentration croissante
  • Optionnel : bain de toluène (plus toxique que alcool mais plus efficace pour éliminer l'eau)
  • But : Préparation à l'inclusion dans la paraffine

Inclusion dans la paraffine

  • Paraffine : solide à température ambiante, liquide à haute température
  • Remplace le liquide intracellulaire par la paraffine
  • Donne un bloc de paraffine durci, facile à découper

Coupes

  • Utilisation d'un microtome
  • Épaisseur de quelques microns (2 à 5 microns)
  • Étalement sur lame porte-objet
  • Fixation à la lame (albumine, gélatine)

Déparaffinage et Réhydratation

  • Élimination de la paraffine
  • Remplacement par des bains d'alcool de concentration décroissante
  • Préparation à la coloration

Coloration

  • Distinguer les structures cellulaires par contraste
  • Différentes méthodes de coloration selon les parties à visualiser

Montage et Observation

  • Couverture avec lamelles et résine (baume de Canada)
  • Observation au microscope photonique pour étude de l'organisation histologique

Technique Cytologique (Coupes Minces)

  • Prélèvement :
    • Éventuellement sur animaux vivants ou sacrifiés
  • Fixation : chimiques (glutaraldéhyde), physique (-196°C, -272°C)
  • Post-fixation : tétraoxyde d'osmium (fixation des lipides)
  • Déshydratation : alcool à concentration croissante, puis oxyde de propylène
  • Inclusion : résine hydrophobe
  • Réalisation coupes : microtome, coupes fines (50-70nm), matériau de la lame (diamant/verre)
  • Récupération : bac d'eau, grille porte-objet
  • Contraste : sels métalliques (acétate d'uranyle, citrate de plomb)

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