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Questions and Answers
Quel est l'objectif principal de la phase d'élimination de l'eau des cellules ?
Quel est l'objectif principal de la phase d'élimination de l'eau des cellules ?
Quelle est l'épaisseur des coupes ultra-fines effectuées à l'aide de l'ultramicrotome ?
Quelle est l'épaisseur des coupes ultra-fines effectuées à l'aide de l'ultramicrotome ?
Quelle méthode est utilisée pour recueillir les coupes effectuées avec un couteau en verre ?
Quelle méthode est utilisée pour recueillir les coupes effectuées avec un couteau en verre ?
Quel type de solvant est utilisé pour l'inclusion des échantillons ?
Quel type de solvant est utilisé pour l'inclusion des échantillons ?
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Quels sels de métaux lourds sont utilisés pour augmenter le contraste lors de la coloration ?
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Quelle substance est souvent utilisée pour fixer les lames sur la lame?
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Quelle est la première étape du déparaffinage?
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À quel type de microscope les lames sont-elles observées?
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Quel est l'objectif principal de la fixation?
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Quel fixateur chimique est le plus utilisé pour fixer les tissus?
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Quel est le rôle du tétraoxyde d'osmium lors de la post-fixation?
Quel est le rôle du tétraoxyde d'osmium lors de la post-fixation?
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Quelle étape suit la fixation dans la méthode cytologique?
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Comment se déroule la déshydratation des lames?
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Quel est l'objectif principal de la fixation dans la technique histologique ?
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Quel type de solvant est utilisé lors de la déshydratation des tissus ?
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Quelle est la fonction des fixateurs chimiques simples dans la technique histologique ?
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Pourquoi l'inclusion à la paraffine est-elle nécessaire ?
Pourquoi l'inclusion à la paraffine est-elle nécessaire ?
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Quel est le principal inconvénient du bain de toluène par rapport au bain d'alcool à 100 % ?
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Quelle étape suit la déshydratation dans la technique histologique ?
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Quels fixateurs sont considérés comme chimiques composés ?
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Comment se présentent les coupes une fois étalées sur la lame porte-objet ?
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Study Notes
La Technique Histologique
- Comprend plusieurs étapes
- Prélèvement et fixation sont les premières étapes
Prélèvement
- Se fait le plus tôt possible après la mort de l'organisme, ou sur un être vivant (biopsie)
- L'échantillon peut être sectionné pour étude
- Importance de la rapidité
Fixation
- But : conserver l'aspect du tissu vivant
- Utilise des fixateurs physiques (congélation à l'azote liquide) et chimiques
- Fixateurs chimiques simples : ethanol, formol
- Fixateurs chimiques composés : liquide de Carnoy (alcool, chloroforme, acide acétique); liquide de Bouin (formol, acide picrique)
Déshydratation
- Étape préparatoire à l'inclusion
- Remplace l'eau des tissus par un solvant organique (miscible à la paraffine)
- Plusieurs bains d'alcools de concentration croissante
- Optionnel : bain de toluène (plus toxique que alcool mais plus efficace pour éliminer l'eau)
- But : Préparation à l'inclusion dans la paraffine
Inclusion dans la paraffine
- Paraffine : solide à température ambiante, liquide à haute température
- Remplace le liquide intracellulaire par la paraffine
- Donne un bloc de paraffine durci, facile à découper
Coupes
- Utilisation d'un microtome
- Épaisseur de quelques microns (2 à 5 microns)
- Étalement sur lame porte-objet
- Fixation à la lame (albumine, gélatine)
Déparaffinage et Réhydratation
- Élimination de la paraffine
- Remplacement par des bains d'alcool de concentration décroissante
- Préparation à la coloration
Coloration
- Distinguer les structures cellulaires par contraste
- Différentes méthodes de coloration selon les parties à visualiser
Montage et Observation
- Couverture avec lamelles et résine (baume de Canada)
- Observation au microscope photonique pour étude de l'organisation histologique
Technique Cytologique (Coupes Minces)
- Prélèvement :
- Éventuellement sur animaux vivants ou sacrifiés
- Fixation : chimiques (glutaraldéhyde), physique (-196°C, -272°C)
- Post-fixation : tétraoxyde d'osmium (fixation des lipides)
- Déshydratation : alcool à concentration croissante, puis oxyde de propylène
- Inclusion : résine hydrophobe
- Réalisation coupes : microtome, coupes fines (50-70nm), matériau de la lame (diamant/verre)
- Récupération : bac d'eau, grille porte-objet
- Contraste : sels métalliques (acétate d'uranyle, citrate de plomb)
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