Examen Techniques d'analyses biologiques 14 Janvier 2019 PDF

# UNIVERSITE SULTAN MOULAY SLIMANE ## FACULTE DES SCIENCES ET TECHNIQUES ### DEPARTEMENT DES SCIENCES DE LA VIE **Année 2018/2019** **14 Janvier 2019** ## EXAMEN **Module:** Techniques d'analyses biologiques **Elément 2:** Techniques d'analyses microbiologiques **LST:** S5; **Filières:** TQPA/SBA...

# UNIVERSITE SULTAN MOULAY SLIMANE ## FACULTE DES SCIENCES ET TECHNIQUES ### DEPARTEMENT DES SCIENCES DE LA VIE **Année 2018/2019** **14 Janvier 2019** ## EXAMEN **Module:** Techniques d'analyses biologiques **Elément 2:** Techniques d'analyses microbiologiques **LST:** S5; **Filières:** TQPA/SBA/PE **Durée:** 2 heures **Note/20** ### Questions: (Répondre avec des phrases courtes et succinctes) 1. Quelle est la classification des milieux de culture en fonction de leur utilisation? 2. Quels sont les microorganismes les plus recherchés en microbiologie? Expliquer? 3. Citer les méthodes de prélèvement en surface 4. Citer les voies de bio-contamination 5. Quel est le principe d'utilisation du milieu gélosé de Mac Conkey? Donner son mode de lecture des résultats 6. Quelles sont les méthodes de conservation d'une culture bactérienne? **Bon courage** ## E. Est réalisée après la coloration ## 7. Lors de la préparation d'échantillons pour la microscopie photonique, l'étape d'inclusion de l'échantillon: A. Utilise de la paraffine chaude qui polymérise à froid pour former un bloc. B. Facilite la microtomisation. ✓ C. Implique une hydratation préalable de l'échantillon. D. Implique la déshydratation préalable de l'échantillon. E. Nécessite un passage de l'échantillon dans un bain d'alcool. ## 8. Contrairement au microscope photonique classique, le microscope à fluorescence possède: A. Une lampe blanche classique et une lampe à fluorescence. B. Un système qui filtre la lumière avant qu'elle n'atteigne l'échantillon. C. Un système qui filtre la lumière qui provient de l'échantillon. D. Un miroir dichroïque qui réfléchit la lumière issue de la source lumineuse vers l'échantillon. E. Des lentilles électromagnétiques. ## 9. Le microscope électronique à balayage MEB A. Utilise les électrons qui traversent l'échantillon. B. Utilise les électrons qui sont émis à partir de la surface de l'échantillon. C. Produit une image de la structure tridimensionnelle de la surface de l'échantillon. D. Utilise un rayon laser fin qui balaye la surface de l'échantillon. E. Nécessite des coupes plus fines qu'en microscope à transmission. ## 10. La microscopie électronique à transmission MET: A. Récupère les électrons secondaires renvoyés par la surface de l'échantillon. B. Récupère les électrons primaires qui traversent l'échantillon. ✓ C. L'image produite apparait en relief D. L'image produite apparait en tridimensionnelle E. Nécessite des coupes plus fines qu'en microscope à balayage. ## 11. La coloration négative : A. Est particulièrement utilisée pour observer les virus, les ribosomes, les protéines filamenteuses. B. Les structures observées apparaissent sombres sur fond clair./ C. Les structures observées apparaissent claires sur fond sombre. D. Les structures observées arrêtent les électrons qui sont réfléchis vers un écran fluorescent. E. Les structures observées sont traversées par les électrons. ## 12. Pour la coloration positive: A. Est particulièrement utilisée pour observer les virus, les ribosomes, les protéines filamenteuses. B. Incubation de l'échantillon biologiques intactes dans les métaux lourd C. Incubation de l'échantillon biologique en fines tranches D. Les structures observées apparaissent sombres sur fond clair. E. Les structures observées apparaissent claires sur fond sombre. ✓ ## 13. Pour préparer une réplique par cryofracture, plusieurs étapes sont nécessaires. Classer les étapes suivantes: a. L'échantillon est découpé avec une lame dans une enceinte sous vide b. Film de carbone évaporé à la surface de l'échantillon. c. Détruire le matériau biologique avec un acide d. L'échantillon est congelé dans de l'azote liquide Répondre par: VA.d-a-b-c. B. b-d-c-a. C.d-b-c-a. D. c-b-d-a. E.a-d-b-c. ## 14. Classer les étapes suivantes qui concernent la préparation d'un échantillon pour la microscopie électronique par cryodécapage: a. Congélation de l'échantillon b. Sublimation de la glace (cryodécapage). c. Ombrage métallique. d. Echantillon soumis à une lame de couteau (cryofracture). Répondre par A.a-c-d-b. B.a-d-c-b. C.a-b-d-с. D.a-b-c-d. E.a-d-b-C. ## QUESTIONS: Techniques de fractionnement 1. La filtration consiste à séparer les constituants d'un mélange liquide-solide par passage à travers un milieu filtrant a. Citer les différentes techniques de filtration b. Quelles sont les principales différences entre ces différentes techniques? 2. L'extraction par solvant est une technique qui permet d'extraire une espèce chimique d'un milieu solide ou liquide par solubilisation dans un solvant. Il existe plusieurs types d'extraction par solvant: Extraction solide-liquide et extraction liquide-liquide. a. Quel est le principe de l'extraction liquide-liquide. b. Comment choisir le solvant? 3. La sédimentation est une technique de fractionnement permettant de séparer une dispersion d'un solide ou d'un liquide au sein d'un autre liquide. a. Quelle est la définition de la centrifugation b. Quelle est la différence entre décantation et centrifugation ## EXERCICES: Solutions, chromatographie et électrophorèse ### Exercice 1: préparation des Solutions → Un flacon contient des cristaux solides de chioure d'ammonium: NH4Cl. Données : M(NH.CI)=53.5 g/mol On veut préparer 500 ml d'une solution de chlorure d'ammonium (NH** + Cl) de concentration C= 0.10 mol/l. 1- Décrire, brièvement le mode de préparation de la solution de chlorure d'ammonium ### Exercice 2: solutions et pictogrammes L'étiquette d'une bouteille d'acide chloridrique qu'il s'agit d'une solution ayant un pourcentage massique de 34% en HCl, une masse volumique de 1,17 Kg/l et une masse molaire de 36,47 g/mol. 1. Calculer la concentration molaire volumique de la solution. 2. On veut diluer 10 fois cette solution commerciale. Quelle est la concentration obtenue ? 3. Quel volume de solution mère faut-il prélever pour préparer 150 ml de solution à 1,5 mol/l? 4. Sur l'étiquette, sont mentionnés les pictogrammes et les codes joints, que signifient ces informations? 5. Quelles sont les principales règles de sécurité au laboratoire de biologie (citer 4 règles) ? # Université Sultan Moulay Slimane ## Faculté des Sciences et Techniques Béni Mellal ### Licence des Sciences Techniques (55): PE-SBA-TQPA **Année universitaire 2018/2019** ## EXAMEN DE METHODES D'ANALYSES BIOCHIMIQUES **Durée de l'examen : 2h** ## QCM: Techniques microscopiques **Cocher la (ou les) proposition(s) vraie(s)** ## 1. La limite de résolution d'un microscope optique: A. Est la distance à laquelle deux objets séparés peuvent être clairement distingués. /B. Dépend de la longueur d'onde de la lumière visible. C. Dépend de l'ouverture numérique du système de lentille utilisé. D. Dépend de l'angle du faisceau d'électrons par rapport à l'objet. E. Est égale au produit des grossissements des lentilles objectif et oculaire. ## 2. La limite de résolution du microscope optique est : A. 2 nm B. 2 nm C. 0,2 nm/ D. 20 nm E. 200 nm ## 3. Le microscope optique permet généralement de discerner clairement la forme des : A. Cellules animales et végétales. B. Mitochondries et chloroplastes. C. Bactéries et noyaux des eucaryotes. D. Virus et ribosomes. E. Atomes et molécules. ## 4. Le microscope à contraste de phase: A. Est un microscope optique. B. Est un microscope électronique. C. Permet l'observation de cellules vivantes. D. Permet de régler les problèmes de décalage de phase de la lumière, liés à la structure des cellules vivantes observées. E. Permet d'apprécier les mouvements cytoplasmiques lors de la migration cellulaire. ## 5. Quel est le chemin optique dans le microscope photonique ? Répondre en indiquant l'ordre exact: a. Lentille oculaire. b. Lentille du condenseur. c. Lentille d'objectif. d. Echantillon. e. Source lumineuse. Répondre par: A.d-e-b-с-а B.e-d-b-c-a. C.e-b-d-c-a. D.e-b-d-a-c. Ed-e-c-b-a. ## 6. Lors de la préparation d'échantillons pour la microscopie photonique, l'étape de fixation: A. peut utiliser des aldehydes comme le formaldehyde et le glutaraldehyde. B. Rend les cellules perméables aux colorants. C. Permet d'hydrater l'échantillon. D. Peut se faire par congélation. ### Exercice 3: Electrophorèse et chromatographie On veut séparer 3 acides aminés: l'Acide Glutamique, la Leucine et la Lysine par électrophorèse et par chromatographie échangeuse d'ion (sur une résine polystyrénique substituée par des groupements sulfonate (-SO³). Les pH isoélectriques de l'acide L- glutamique, de la L-leucine et de la L-lysine sont respectivement: 3,22 : 5,98; 9,74, à 25 °C. ➤ Ce mélange des acides aminés est soumis à une électrophorèse sur papier à un pH de 6,5. 1. Rappeler le principe de l'électrophorèses 2. Quelle est la fonction du SDS ? du ẞ-mercaptoéthanol? 3. Indiquer la position des 3 acides aminés à la fin de l'expérience ➤ On dépose ces 3 acides aminés sur la colonne, à pH 2, puis on élue en amenant progressivement le pH à 7 4. Quel est le principe d'une échangeuse d'ion 5. Lequel de ces acides aminés sera retenu par une résine échangeuse de cation (- SO) à pH = 7? #### Exercice 4: Dosage spectrophotométrique de la vanilline contenue dans un extrait de vanille du commerce La vanilline contenue dans un échantillon du commerce (solution aqueuse sucrée) est extraite par du dichloromethane. **Données** Dichlorométhane CH₂Cl₂: densité d = 1,33; non miscible à l'eau. Vanilline CaHO: • Solubilité: soluble dans la plupart des solvants organiques, très peu soluble dans l'eau. Masse molaire moléculaire: Muentina = 152 g/mol. 1. Indiquer le nom de la verrerie nécessaire pour réaliser l'extraction de la vanilline par le dichorométhane. 2. Lors de cette extraction, indiquer sur un schéma (on aura représenté cette verrerie) la position de la phase dans laquelle se trouve la vanilline en fin d'extraction. Un traitement basique à l'aide d'une solution aqueuse d'hydroxyde de sodium (Na+(aq) + HO(aq)) permet ensuite de faire repasser la vanilline en solution aqueuse sous forme d'ion phénolate. On réalise ensuite un dosage par étalonnage de cet ion par spectrophotométrie UV visible afin de déterminer la concentration en vanilline de l'échantillon du commerce. La mesure de l'absorbance de la solution à doser donne A = 0,90. À partir d'une solution mère de vanilline, on prépare par dilution dans une solution aqueuse d'hydroxyde de sodium de concentration 0,10 mol/l des solutions filles et on mesure leur absorbance. Les résultats sont rassemblés dans le tableau ci-dessous: | Solution fille | Concentration en vanilline mol/l | Absorbence | |---|---|---| | S₁ | 4,00x10⁻⁵ | 1,36 | | S₂ | 3,00x10⁻⁵ | 1,08 | | S₃ | 2,00x10⁻⁵ | 0,81 | | S₄ | 1,00x10⁻⁵ | 0,54 | | S₅ | 0,50x10⁻⁵ | 0,27 | 3. Tracer sur papier la courbe d'étalonnage A = f(c). A en fonction de la concentration avec comme échelle: 1 cm pour 0,10 en absorbance et 1 cm pour 0,50x10⁻⁵ mol/l en concentration. 4. La loi de Beer-Lambert est-elle vérifiée ? 5. Déterminer en détaillant sur le graphique la concentration en vanilline dans la solution à doser. (On précise que la concentration en vanilline est égale à celle de l'ion phénolate.)