Control Microbiológico de Superficies y Ambientes PDF

## Objetivo - Minimizar los riesgos de contaminación por partículas y/o microorganismos de productos o materiales que se están manipulando. ## Supervivencia de bacterias en el ambiente | Ruta de Infección | Bacterias | Virus | Protozoarios y Helmintos | |---|---|---|---| | Ingestión (Toma) | Campyl...

## Objetivo - Minimizar los riesgos de contaminación por partículas y/o microorganismos de productos o materiales que se están manipulando. ## Supervivencia de bacterias en el ambiente | Ruta de Infección | Bacterias | Virus | Protozoarios y Helmintos | |---|---|---|---| | Ingestión (Toma) | Campylobacter spp, E. coli, Salmonella spp, Shigella spp, Vibrio cholerae, Yersinia spp | Adenovirus, Astrovirus, Enterovirus, Hepatitis A virus, Hepatitis E virus, Noroviruses, Rotavirus, Sapoviruses | Cryptosporidium parvum, Dracunculus medinensis, Entamoeba histolytica, Giardia intestinalis, Toxoplasma gondii | | Inhalación y aspiración | Legionella pneumophila, Mycobacteria (no-tuberculosa) | Muchos otros agentes en situaciones alta exposición | Acanthamoeba spp, Aeromonas spp, Burkhalderia Pseudomallei, Mycobacteria (no-tuberculosa), Naegleria fowleri, Leptospira spp., Pseudomonas aeruginosa, Schistosoma mansoni | | Contacto (Baño) | Diversas infecciones | | | | Piel (especialmente lacerada), membranas mucosas, ojos | | | | ## Bibliografía de referencia - Métodos microbiológicos. - FDA Food and Drug Administration - USP United States Pharmacopeia -     CFTA The cosmetic Toiletry and Fragance Association - APHA - Normas nacionales ## Clasificación de las áreas - **AREA CLASE 100** el numero de partículas no debe exceder de 100/pie³ - **AREA CLASE 10 000** el numero de partículas no debe exceder de 10 000/pie³ - **AREA CLASE 100 000** el numero de partículas no debe exceder de 100 000/pie³ ## Procedimiento de análisis microbiológicos Se realizarán utilizando métodos normalizados por organismos internacionales como la ISO, AOAC, FDA/BAM, ICMSF, APHA, entre otros. ## Control de calidad microbiológica del aire ### Fuentes de contaminación del aire - Polvaredas - Insectos - Productos en mal estado - Las esporas de bacterias y hongos son más numerosas como contaminantes del aire que las células vegetativas ## La GMP clasifica las zonas limpias en grados que establecen parámetros de la calidad microbiológica del aire. - **Zona A**: Zona específica para operaciones de alto riesgo como por ejemplo, llenado, bandejas de tapones, ampollas, viales abiertos y realización de conexiones asépticas. El límite de microorganismos es <1 ufc/m³ de aire según GMP4 y 3 ufc/m³ según USP 209 E3. - **Zona B**: Entorno para la zona de grado A en el caso de preparación y llenado aséptico. El límite de microorganismos por m³ de aire es 10 ufc según GMP4 y 3 ufc según USP 209 E3. - **Zona C y D**: Zonas limpias para realizar fases menos críticas de la fabricación de medicamentos estériles. Los límites de microorganismos por m³ de aire para ambas zonas son 100 ufc/m³ y 200 ufc/m³ según GMP4; y 20 y 100 ufc/m³ según USP 209 E, respectivamente. | Zona | GMP Europea | USP 24 209 E (1992) | ISO 14644-1 | |---|---|---|---| | A | <1 | M 3.5 | 3 | | B | 10 | M 3.5 | 3 | | C | 100 | M 5.5 | 20 | | D | 200 | M 6.5 | 8 | ## Producción estéril ### Clasificación del sistema de aire | Grado | Enreposo | Enoperación | Número máximo de particulas permitidas in³ igual o mayor de 0.5 µm | Número máximo de particulas permitidas in³ igual o mayor de 5µ | |---|---|---|---|---| | A | 3 500 | 0 | 3 500 | 2 000 | | B | 3 500 | 3 500 | 350 000 | 20 000 | | C | 350 000 | 350 000 | 3 500 000 | 200 000 | | D | 3 500 000 | 3 500 000 | No definido | No definido | ### Comparación de varios códigos | BPF | US 209E | US 209 | ISO/TC | CEE | OMS | Castomary | |---|---|---|---|---|---|---| | A | M3.5 | 100 | ISO 5 | A | | | | B | M3.5 | 100 | ISO 5 | B | | | | C | M5.5 | 10000 | ISO 7 | C | | | | D | M6.5 | 100 000 | ISO 8 | D | | | ## Establecimiento de niveles de alerta e intervención - **NIVEL DE ALERTA**: Es el que muestra una desviación potencial de las condiciones operativas normales - **NIVEL DE ACCION**: Es cuando se exceden los niveles y es necesaria una medida correctiva ## Monitoreo ambiental ### La calidad microbiológica del aire y las superficies del laboratorio en microbiología es un indicador de la efectividad de las tareas realizadas según el: - Plan de limpieza, desinfección y mantenimiento - Plan de higiene ### Procedimiento: Monitoreo ambiental - Establece: - Metodología para la toma de muestra - Lugares de toma de muestra - Límites de tolerancia o criterios de aceptación o rechazo - Frecuencia de monitoreo - Acciones correctivas a tomar en caso de desvíos de los límites establecidos - Esto se aplica tanto a control ambiental del área analítica del laboratorio como para la campana de flujo laminar. ## Ejemplo de distribución de áreas ### Laboratorio de microbiología | Area | Cantidad| |---|---| | Droguero | 1 | | Oficina | 2 | | Área de acceso restringido | 3 | | Sala de siembra| 4 | | Sala de preparación de muestras | 5 | | Sala de preparación de material | 6 | | Sala de lavado | 7 | | Área de recepción | 8 | | Sala de autoclave | 9 | | Sala de lavado | 10 | ## Monitoreo ambiental - El programa de muestreo para monitoreo ambiental puede incluir (dependiendo del ensayo que realiza el laboratorio): - Determinación cuantitativa de microorganismos presentes en el ambiente (recuento total o recuento de determinados tipos de microorganismos como por ejemplo hongos) - Determinación cualitativa de algunos patógenos y/o indicadores dependiendo de los ensayos que realiza el laboratorio (Ejemplo: Enterobacterias, Coliformes, Salmonella spp, Listeria monocytogenes Listeria spp, Staphylococcus aureus). ## Condiciones Ambientales - **REQUISITO**: El laboratorio debe asegurarse que las condiciones ambientales, bajo las cuales se realizan los ensayos microbiológicos, no invaliden los resultados de ensayo ni comprometan la calidad requerida de los resultados. Cuando los muestreos o ensayos se realicen fuera de la instalación permanente del laboratorio se deben tomar precauciones especiales. ## Métodos para control calidad del aire: Se proponen dos métodos de para el recuento de microorganismos en el aire. - **Método pasivo, por sedimentación**: Se realiza el recuento de microorganismos viables que se posan sobre una superficie de medio de cultivo (técnica cualitativa). No existe relación entre la cantidad de colonias encontradas en por placa y el volumen de aire. - **Método activo, por impacto**: Se realiza el recuento de microorganismos viables retenidos sobre una superficie de medio de cultivo forzando un determinado volumen de aire. ## Métodos para control calidad del aire: **MÉTODO PASIVO Y ACTIVO** - Los resultados de ambos métodos no son comparables (el principio de muestreo y las unidades en las cuales se expresan son diferentes). - SE RECOMIENDA INTERPRETAR TENDENCIAS Y NO OBSERVACIONES AISLADAS.(tomar siempre la muestra en un mismo lugar). ## Análisis microbiológico de superficies ### Normas legales: #### **RESOLUCIÓN MINISTERIAL N 461-2007/MINSA** - Aprueban "Guia Técnica para el Análisis Microbiológico de Superficies en contacto con Alimentos y Bebidas" - La Oficina General de Comunicaciones publicará la mencionada Gula Técnica en el Portal del Internet del Ministerio de Salud #### **RESOLUCIÓN MINISTERIAL N° 463-2007/MINSA** - Aprueban Documento Técnico: Plan Nacional de Prevención y Control de la Transmisión Madre Niño del VIH y Sífilis - La Dirección General de Salud Ambiental es la encargada de control sanitario de alimentos y bebidas ### Superficies vivas e inertes a seleccionar - **En establecimientos de elaboración y expendio:** - **Superficies inertes**: - Se seleccionaron aquellas superficies que están en contacto con los alimentos destinados al consumo directo, como utensilios, vajilla, superficies de corte, menaje, equipos, entre otros. - **Superficies vivas**: - Se seleccionarán a los manipuladores de alimentos, con o sin guantes, que estén en contacto directo con los alimentos que no serán sometidos a un proceso térmico posterior u otro tratamiento que disminuya la carga microbiana - **En establecimientos de elaboración y expendio:** - **Superficies vivas**: - Se seleccionarán las manos de los manipuladores, con o sin guantes, que estén en contacto con los alimentos destinados al consumo directo ### Selección del método de muestreo - La selección del método de muestreo debe estar en función de las características de la superficie a muestrear. | Método de muestreo | Superficies a muestrear | |---|---| | Método del Hisopo | Se utiliza para superficies inertes regulares e irregulares, tales como tabla de picar, bandejas, mesas de trabajo, utensilios, cuchillas de equipos, cortadora de embutidos, cortadora de pan de molde, fajas transportadoras, tolvas, mezcladoras, pisos, paredes y otros | | Método de la esponja | El método de la esponja se utiliza preferentemente para muestrear superficies de mayor área. | | Método del enjuague  | Se utiliza para superficies vivas (manos) y para objetos pequeños o para el muestreo de superficies interiores de envases, botellas, bolsas de plástico, etc. | ### Métodos para control calidad del aire: #### **Normas IRAM 14071-1:2002** - **EXPOSICIÓN DE PLACAS**: - Toma de muestra: durante un tiempo estipulado, se exponen placas de Petri (o sea se abren las placas) con medio de cultivo no selectivo, en el área de trabajo y durante el proceso de siembra. - Áreas a monitorear o zonas de toma de la muestra: sala de siembra y sala de preparación de muestras. - Medio de cultivo usado. Ejemplo PCA. - Tiempo y temperatura de incubación: Luego de la exposición al aire, las placas se cierran e incuban durante Ejemplo 72 horas a 30° C. - Frecuencia de realización de los controles. Ejemplo mensual. - Criterio de conformidad: número máximo de colonias por tiempo de exposición de las placas. Ejemplo durante 15 minutos se permite hasta 15 colonias - Los resultados se expresan como unidades de colonias (ufc) por placa #### **Métodos para control calidad de superficies: ISO 18593** | Método | Recolección | Tipo de superficie | Siembra | |---|---|---|---| | Hisopado | Hisopo estéril | Delimitada | Siembra directa | | Esponja-trapeado | Esponja embebida en medio específico | Irregular | Siembra de volumen conocido | | Caja de contacto o Petrifilm | Contacto, presión y tiempo standard | Plana ≥100cm² | Incubación directa | ## Toma de muestra superficies técnica del hisopo - Control superficies ## Placas RODAC - **Replicate organism direct agar contact**: Esta placa que contiene un medio de cultivo adecuado, en ligero exceso, se coloca sobre la superficie a muestrear, presionando sobre la misma y manteniéndola inmóvil durante el contacto. - **La base de la placa se halla reticulada y presenta una superficie de dimensiones conocidas.** ## Contacto directo: Placas RODAC®, Laminocultivos, Petrifilm ### RODAC®= Replicate Organisms Direct Agar Contact - Permiten solo hacer recuentos en superficies lisas, no porosas que no tengan recuentos superiores a 100 UFC/cm². ### Laminocultivos: - Laminas para control de superficies con dos superficies c/agar. - Poseen un soporte flexible (puede doblarse en ángulo de 90° respecto al tapón). - Múltiples medios de cultivo ### Petrifilm: - Hidratar la placa estándar con 1 mL de solución estéril. - Dejar gelificar, tomar impronta - Superficie de 20cm² - Diversos medios de cultivo ## Medios de cultivo - **LÍQUIDOS:** - Agua peptonada - Solución salina - Caldo casoy - Solución buffereada - **SOLIDOS:** - Agar TSA - Agar SDA - Agar lecitina - Agar nutritivo ## Control de manipuladores de alimentos - Imprimir los cinco dedos - Agar TS- Placa de Contacto Tipo Rodac - Incubar de 30 a 35 °C de temperatura - 48 a 72 horas de tiempo - Contar las UFC por guantes ## ATP bioluminiscencia - El ATP (Adenosín trifosfato) está presente en todas las células vivas tanto animales como vegetales, así como en bacterias, levaduras y mohos. - El ATP es medido por bioluminiscencia. - ATP + LUCIFERIN/LUCIFERASA = LUZ ### Zonas de muestreo para la monitorización ambiental - **ZONA 1**: superficies de contacto con el producto - **ZONA 2**: superficies sin contacto con los alimentos pero en proximidad cercana a ellos y/o a superficies en contacto con alimentos  - **ZONA 3**: superficies sin contacto con los alimenros más remotas, ubicadas.in o cerca de las áreas de procesamiento - **ZONA 4**: superficies sin contacto con los alimentos fuera de las áreas de procesamiento ## Capacitación del personal - Se requiere de un programa formal de capacitación. - El adiestramiento debe documentarse - Incluir: instrucción sobre Bioseguridad, BPM, BPL principios básicos en microbiología, desinfección y sanitización ## TAREA: Revision: BPM BPL.(DIGESA-DIREMID) - **TEMA**: ΑΤP BIOLUMINISCENCIA PARA MONITOREO DE HIGIENE DE AMBIENTES