Biología molecular y citogenética PDF

1. Caracterización de los procesos que se realizan en los laboratorios de citogenética… 1. C  aracterización de los procesos que se realizan en los laboratorios de citogenética y biología molecular El hallazgo de la estructura del ADN (1953, Watson y Crick, basada en los estu...

1. Caracterización de los procesos que se realizan en los laboratorios de citogenética… 1. C  aracterización de los procesos que se realizan en los laboratorios de citogenética y biología molecular El hallazgo de la estructura del ADN (1953, Watson y Crick, basada en los estudios de difracción de rayos X de Rosalind Franklin), uno de los descubrimientos esenciales en las ciencias de la vida, marcó el inicio de la moderna Biología Molecular. La Biología Molecular se puede definir, entonces, como aquella rama de la Biología que estudia la composi- ción, estructura y función de moléculas biológicamente importantes, así como los procesos en que están implicadas. Planteada, así, esta definición, es lógico inferir que, tal estudio, abarca —de forma preferen- te— a dos grandes grupos de macromoléculas: los ácidos nucleicos y las proteínas. El desarrollo de nuevas técnicas y, sobre todo, de nuevas metodologías de trabajo para el manejo o la investigación de ambos grupos ha provo- cado, no sólo la inevitable especialización de los laboratorios, sino ―y de manera paradigmática― una separación conceptual en áreas dife- renciadas, aunque relacionadas inextricablemente, de estudio. De esta manera, el campo de aplicación de la Biología Molecular ha quedado reservado para desentrañar el comportamiento y/o alteraciones de los ácidos nucleicos. Por su parte, el trabajo a gran escala sobre las proteí- nas ha generado, desde mediados de los años 90 del siglo pasado, la aparición de la proteómica (stricto sensu, habría que definirla como el área de la Biología cuyo objetivo es el estudio de los proteomas, siendo estos el conjunto de proteínas expresadas por un genoma, una célula o un tejido) que tiene su lugar en laboratorios específicos para dicha disciplina. El auge experimentado por la aplicación de técnicas de Biología Molecular en beneficio de la salud (diagnóstico molecular) se ha hecho transversal, alcanzando de tal modo a la Citogenética, hasta el punto de producir una subespecialización en la misma. Esta rama de la genética, encargada ―en lo que podríamos denominar citogenética convencional― del estudio, estructura, función y comportamiento de los cromosomas en metafase mediante bandeo G (ver más adelan- te) ha visto ampliada su actividad original con la implementación de 5 Biología molecular y citogenética técnicas más sofisticadas de análisis, como la hibridación in situ fluo- rescente (FISH), que aportan información complementaria o única. El estudio convencional requiere un número adecuado de metafases de buena calidad y no puede detectar cambios submicroscópicos ni re- organizaciones cromosómicas que impliquen zonas del cromosoma con un análisis de bandas similar. Mientras que, la aplicación de las técnicas de Biología Molecular, permite descartar anomalías crípticas o submicroscópicas en cariotipos normales, identificar cromosomas marcadores y refinar las anomalías presentes en cariotipos complejos; es lo que se ha dado en llamar Citogenética Molecular. En consecuencia, aquellos laboratorios en los que se realizan técnicas que van más allá de la citogenética clásica, así como los dedicados a la Biología Molecular, podrían considerarse, desde un punto de vista conceptual, como pilares de la Medicina Genómica, campo basado en la aplicación del conocimiento del genoma humano1 a la práctica de la Medicina (también conocido como medicina personalizada pos- genómica, porque adapta la atención médica a la estructura genética única de cada individuo, con la información que resulta de secuenciar el genoma). No obstante, y desde el punto de vista legislativo, no se contempla a ninguno de estos laboratorios como unidades independientes, sino que el RD 1277/2003, de 10 de octubre, por el que se establecen las bases generales sobre autorización de centros, servicios y estable- cimientos sanitarios (última modificación de 29 de julio de 2020), en el anexo II dedicado a las definiciones de centros, unidades asistenciales y establecimientos sanitarios, sobreentiende que quedan encuadrados en la que denomina Unidad de Genética (unidad asistencial que, bajo la responsabilidad de un facultativo con formación adecuada, está dedi- cada a la realización de pruebas genéticas y emisión de los dictámenes correspondientes con fines diagnósticos). En este sentido, y hasta la promulgación del RD 639/2014, de 25 de julio, España era uno de los 1 La decodificación del genoma humano se anunció el 14 de abril de 2003. Un Consorcio internacional, formado por científicos de 6 países (EEUU, Reino Unido, Francia, Alemania, Japón y China), descifró la secuencia casi completa del genoma humano (99,9%). Desde entonces los científicos han trabajado para comprender cómo funciona cada gen y cómo se coordina con los otros genes. En la actualidad se atraviesa la segunda fase de este proyecto, con el propósito de completar lagunas en el mapa genético hasta hoy desarrollado y poder así acabar la secuencia del genoma humano. 6  1. Caracterización de los procesos que se realizan en los laboratorios de citogenética… pocos países de la Unión Europea que no contaba con la especialidad de Genética Clínica y que, salvo iniciativas puntuales, el desarrollo de la Medicina Genómica todavía es una asignatura pendiente. Organización del laboratorio de 1.1. Citogenética y Biología Molecular 1. Los estándares y directrices del American College of Medical Genetics (ACMG) para laboratorios de genética clínica, la Cystic Fibrosis Network, la Red Europea de Calidad de Genética Molecular y el Observatorio Europeo de Ciencia y Tecnología constituyen la base para la supervisión, la prevención de errores clínicos y administrativos y la implementación de programas de gestión y mejora de la calidad que buscan minimizar los fallos en la interacción del laboratorio con los mé- dicos remitentes y sus pacientes. Algunos de los aspectos contemplados son aplicables a cualquier tipo de laboratorio mientras que, otros, son específicos para las pruebas que se realizan en un laboratorio de citogenética. Un programa de calidad adecuado requiere que existan políticas para la validación de protocolos, capacitación y formación de las personas que realizan los análisis, identificación de muestras, seguridad para el personal y otros aspectos. Para apoyar a los laboratorios que trabajan hacia la acredi- tación y mejorar la comprensión del aseguramiento de la calidad, se desarrollaron talleres interactivos, en el marco de la Red de Excelencia EuroGentest, que proporcionan un foro único para que los laboratorios compartan experiencias y aprendan sobre el desarrollo y la mejora de un sistema de gestión de la calidad (SGC). Además, contribuye a la armonización del SGC y los enfoques para la acreditación en toda Europa. Existen muchos pasos entre la obtención de una muestra para análisis cromosómico y la generación del informe final. Un elemento central de cualquier programa son los Procedimientos normalizados de trabajo (PNT) del laboratorio. Este documento, contiene los procedimientos que deben seguirse para que el laboratorio pueda realizar el análisis de los cromosomas. Incluye materiales, reactivos y equipos empleados, 7 Biología molecular y citogenética así como requisitos de manipulación de las muestras. Todos los protocolos técnicos y PNT deben ser autorizados por el director del laboratorio y el jefe de sección correspondiente y han de ponerse en conocimiento de todo el personal. Se reevaluarán anualmente y los cambios que se realicen, si los hubiere, se notificarán a los usuarios. Con el gran incremento del conocimiento y la generalización de las pruebas genéticas, el laboratorio se ha involucrado cada vez más en garantizar que los aspectos preanalíticos y postanalíticos de las prue- bas también estén diseñados para garantizar un uso apropiado de las muestras y sus resultados. 1.1.1. Instalaciones en un laboratorio de Citogenética Área técnica: corresponde a la zona de procesado de muestras y culti- vos. Todo el equipo y suministros utilizados para recolección y cultivo de células, preparación de portaobjetos y bandeo y tinción de cromo- somas deben ser monitorizados para proporcionar un análisis de alta calidad. Trabajar con muestras en el área del laboratorio asignada para el pro- cesado de cultivos usando una técnica estéril, en cabinas de clase II con panel frontal, luz UV durante los períodos de inactividad (un máximo de 30 minutos) y flujo laminar a través de filtros HEPA (High Efficiency Particle Arresting)2 reducirá ―en gran medida― el riesgo de contaminación de la muestra y la exposición del personal a peligros biológicos. Adicionalmente, se recomienda tomar precauciones cuan- do se agrega una muestra al medio de cultivo, se transfiere un cultivo entre contenedores o se añaden reactivos; así como el lavado frecuente de manos, el uso de guantes desechables, mascarillas, batas, etc. o la limpieza de superficies de trabajo antes y después de su uso. Ha de contarse con una sala de cultivos cuyas condiciones ambien- tales estén controladas, para preservar las preparaciones. Siempre 2 En realidad, existen dos filtros de este tipo, uno que forma el techo de la cabina y genera el flujo laminar estable; y un segundo, más pequeño, situado encima del anterior, por el que se elimina al exterior el resto del aire. 8  1. Caracterización de los procesos que se realizan en los laboratorios de citogenética… que sea posible, se deben hacer cultivos duplicados, y colocarse en incubadoras separadas, cada una equipada con su propia energía, fuente de CO2 (proporciona condiciones ambientales óptimas para el crecimiento de células en medio de cultivo) y alarma de emergencia. También debe crearse un procedimiento de respaldo que asegure que los cultivos se mantendrán en caso de falla de energía o CO2. Esta sala de cultivos debe estar alejada de las vías de paso habituales para evitar turbulencias. Lo ideal sería dotarla de un sistema de suministro de aire filtrado a presión positiva, para que el ambiente se encuentre, dentro de lo posible, libre de microorganismos. Las zonas de seguridad biológica deben revisarse anualmente para detectar el flujo de aire y la contaminación bacteriana. Zona de bandeo. El paso del cultivo de células o tejidos a cromosomas analizables microscópicamente se logra seleccionando células en divi- sión, colocación en portaobjetos y tinción con uno de los métodos que producen un patrón de bandas apropiado. Al examinar la calidad de un bandeo G, es importante identificar las intensidades de tinción que producen Muchos laboratorios de citogenética utilizan procedimientos de reco- lección de muestras automatizados como forma de aumentar la pro- ductividad y mejorar la consistencia. Estos laboratorios deben seguir estrictamente las pautas recomendadas por el proveedor y monitorizar el rendimiento del equipo de forma continua. Se debe preparar un pro- tocolo para el uso de equipos automatizados que detalle los pasos del procedimiento, reactivos apropiados, requisitos de calibración y limpie- za y mantenimiento. También es importante que el personal que opera el equipo reciba la capacitación adecuada. Área de análisis. Cualquier análisis de cromosomas comienza identi- ficando los requisitos específicos para cada tipo de muestra que se examina. A continuación, se siguen una serie de pasos básicos: análisis microscópico, convencional y de fluorescencia (permite la ubicación adecuada de las extensiones en metafase, recuento de cromoso- mas y análisis del patrón de bandas de cada cromosoma individual), obtención de imágenes de las extensiones de metafase (básico para 9 Biología molecular y citogenética documentar y analizar metafases; formado por una cámara digital3 montada en el microscopio y un software específico para el análisis de las metafases4), preparación de cariotipos, y documentación e informe de resultados. Encontrar metafases aceptables para su análisis es una parte esencial de la Citogenética. En muchas muestras abundan metafases de buena calidad. Sin embargo, en algunas, como en la citogenética del cáncer, las células suelen ser de mala calidad y las extensiones aceptables para el análisis son pocas y difíciles de encontrar. Las tecnologías más ac- tuales permiten, a los técnicos que buscan metafases, seleccionar ―de forma automática― aquellas que resulten mejores tras la búsqueda y capturarlas con gran resolución. 1.1.2. Instalaciones en un laboratorio de Biología Molecular Debido al tipo de técnica básica que utiliza, la reacción en cadena de la polimerasa (PCR), en la que se obtiene un gran número de copias (am- plificación) de una región específica de ADN partiendo de una mínima cantidad de material genético, la estructuración y forma de trabajar en el laboratorio se organizan en torno a dicha técnica. Así, generalmente, un laboratorio de Biología Molecular debe dividirse en tres áreas (pre-PCR, termociclador, post-PCR). En el área pre-PCR son necesarias, al menos, tres salas físicamente separadas: una para el registro de la muestra; otra para extracción de ADN (si se esperan muestras con contenido infeccioso, debe haber flujo laminar); la tercera es para la preparación de la PCR y debería subdivi- dirse en 2 zonas, una para la preparación de los reactivos, incluyendo 3 La cámara más utilizada en los sistemas de imágenes automatizados para laboratorio citogenético es una cámara CCD (charge coupled device, dispositivo de carga acoplada) en blanco y negro. 4 El software para sistemas de imágenes automatizados en citogenética consta de dos partes (independientes o integradas): captura de la imagen y análisis. Después de la captura y mejora de la imagen, el usuario puede analizarla utilizando el software especialmente desarrollado. 10  1. Caracterización de los procesos que se realizan en los laboratorios de citogenética… la mezcla de la reacción de PCR (imprescindible contar con cabina de bioseguridad de flujo laminar vertical de clase II) y, la otra, para agre- gar el ADN. Es fundamental que los reactivos no se contaminen con el ADN, por ello debería tener 1 ligera presión positiva. Para la cuantifica- ción de los ácidos nucleicos se cuenta con la espectrofotometría, que, además de la medir la concentración de una muestra da una indicación sobre la pureza de la misma. Los ácidos nucleicos absorben la luz UV en un patrón específico. Si en un espectrofotómetro, una muestra es expuesta a la luz UV a 260 nm, cuanta más luz absorbe, mayor será la concentración de ácido nucleico en ella. Otra instrumentación que puede encontrarse son los incubadores (si el trabajo se realiza sobre cultivos celulares es preciso que cuenten con una fuente de CO2 y control de la humedad), placas calefactoras, cen- trífugas y microcentrífugas, balanzas, vórtex o neveras y congeladores para conservar reactivos y muestras. En el área de PCR (termociclador) se disponen los termocicladores necesarios para llevar a cabo la PCR. No se deben transferir materiales plásticos o soluciones desde ella a la de pre-PCR. En el área post-PCR, se manipulan los productos de la PCR mediante electroforesis en gel de agarosa, electroforesis capilar y otros pro- cedimientos. Constituye una fuente importante de contaminación por productos amplificados, por lo que debería tener una ligera presión negativa. La electroforesis se utiliza para analizar los productos ampli- ficados en una PCR o purificar y obtener fragmentos de tamaño deter- minado de ADN. Se obtiene, así, la separación de moléculas de ácidos nucleicos a través de una matriz tamponada de agarosa que funciona a modo de tamiz molecular, separando las moléculas bajo la acción de un campo eléctrico, de acuerdo al tamaño y la carga neta que poseen. En el caso de los ácidos nucleicos, los grupos fosfato son responsables de la carga negativa (en condiciones de pH > 5), haciendo que los frag- mentos migren hacia el polo positivo (ánodo) durante la electroforesis. La resolución y velocidad de separación dependen de la concentración de agarosa en el gel y el voltaje aplicado. 11 Biología molecular y citogenética Los ácidos nucleicos separados en geles de agarosa pueden visua- lizarse mediante adición de colorantes fluorescentes, lo que permite evaluar su integridad, estimar su tamaño e incluso su concentración mediante análisis comparativo con patrones de tamaño o concentra- ción conocidas, respectivamente. Los colorantes fluorescentes se aña- den a la disolución de agarosa y actúan mediante inserción entre los pares de bases de los ácidos nucleicos. El bromuro de etidio es uno de los ampliamente utilizados. Sin embargo, es altamente tóxico, con pro- piedades mutagénicas, por lo que debe manejarse con extremo cuida- do. En la actualidad existen colorantes alternativos desarrollados para reducir estos riesgos. Tras la electroforesis, se coloca el gel sobre un transiluminador de luz UV para poder visualizar las bandas correspon- dientes a las moléculas de ADN presentes en las muestras, así como los marcadores de peso molecular. Suele llevar acoplado una cámara o sistema de captación de imágenes, adecuado para el trabajo con luz UV y controlado por software específico. Esta estructura de compartimentación del laboratorio, no obstante, no es condición suficiente para garantizar que los resultados de la PCR 12  1. Caracterización de los procesos que se realizan en los laboratorios de citogenética… sean fiables. Para ello, es preciso determinar un flujo de trabajo que, de manera unidireccional, marque un sentido único de los procesos dentro del circuito (desde el área pre-PCR al área de PCR, para finalizar en la zona post-PCR). Seguridad en los laboratorios de 1.2. Citogenética y Biología Molecular Las normas de seguridad son equivalentes a las que rigen a los la- boratorios clínicos, sin embargo, y de manera adicional, en este tipo de instituciones y al efecto de evitar contaminaciones del material genético (los contaminantes más peligrosos son los ácidos nucleicos extraños a la muestra y las enzimas que degradan ácidos nucleicos o nucleasas) que alterarían los resultados obtenidos, se pauta ―como ya hemos comentado (vid. supr.)― una circulación unidireccional para el procesamiento, evitando fenómenos de transferencia y contamina- ción cruzada. Esta última puede ocurrir por la presencia de material no amplificado del medio o de microorganismos ambientales; por conta- minantes que proceden del propio personal técnico o que se acumulan sobre las superficies de trabajo. Otro tipo de contaminación es la que se produce por productos ampli- ficados generados por las PCR realizadas en el propio laboratorio (se conoce como carryover) y que resulta un serio inconveniente para los laboratorios de diagnóstico que amplifican de forma continua las mis- mas secuencias en un número elevado de muestras (la contaminación de estos productos puede causar falsos positivos). La forma de evitar el carryover es no revertir nunca el flujo de trabajo. En general, para trabajar en el laboratorio se debe realizar un lavado de manos, al comenzar y al finalizar los procedimientos, antes de dejar el laboratorio y en cualquier momento tras la manipulación de materiales sospechosos de contaminación; utilizar bata, guantes desechables, gafas y máscaras de protección (para evitar el impacto de objetos, sustancias perjudiciales y luz UV) y calzado adecuado, con suela an- tideslizante; los anillos, pulseras y demás accesorios que interfieran con el trabajo, deben retirarse antes de iniciar el procedimiento; no 13 Biología molecular y citogenética comer, beber o fumar en la zona de trabajo; las personas con cabello largo deben recogerlo; para la manipulación de reactivos peligrosos, solventes orgánicos y patógenos se debe estipular el uso obligatorio de una cabina de bioseguridad tipo II, que será desinfectada con etanol al 70% y posterior exposición a luz UV; para prevenir la contaminación ambiental se usarán puntas de micropipeta con un filtro en su interior que impide que posibles aerosoles alcancen el cuerpo de la pipeta; las embarazadas deben informar de su situación y evitar exponerse a vibraciones, radiaciones, reactivos peligrosos o la manipulación inade- cuada del material biológico para la realización del procedimiento. El correcto manejo y eliminación de material desechable y residuos contaminados se debe realizar según la normativa vigente y, de acuer- do al manual de procedimientos. En lo que respecta a las condiciones de trabajo en las zonas asép- ticas del laboratorio de Citogenética, se ha de tener en cuenta el es- tablecimiento de normas básicas, como que la puerta de la sala debe estar siempre cerrada; usar de forma exclusiva material y reactivos estériles (el material desechable estéril no es intercambiable con el de otras salas); no introducir mecheros en la cabina de bioseguridad, ya que generan turbulencias y alteran el flujo laminar y disponer, en el inte- rior de la misma, exclusivamente aquél material que se vaya a usar en la sesión de trabajo. También es imprescindible la restricción de acce- so a la sala de cultivos exclusivamente al personal que esté realizando algún procedimiento. 1.3. Uso eficiente de recursos El laboratorio de Biología Molecular como el de Citogenética, desde el punto de vista de la economía de la salud, presentan un elevado grado de complejidad, fundamentado en el desarrollo y la diferenciación con respecto a otro tipo de laboratorios; es decir, el grado de especializa- ción de las pruebas, exámenes y procedimientos que se realizan, así como los recursos humanos y administrativos, o la infraestructura físi- ca y tecnológica que precisan.Esta realidad determina, necesariamente, 14  1. Caracterización de los procesos que se realizan en los laboratorios de citogenética… la implementación de una gestión eficiente de los recursos y, para ello, resulta imprescindible dotarse de unos estándares de calidad que lleven aparejados el desarrollo de instrumentos, como los indicadores de calidad, que permitan comprobar el correcto funcionamiento. Para contar con un sistema de gestión de calidad funcional, la estruc- tura y dirección del laboratorio deben estar organizadas de tal forma que permitan la creación y puesta en marcha de políticas de calidad. Dicho de otra manera, es precisa una fuerte estructura organizativa de apoyo hacia los indicadores antes mencionados. El recurso más impor- tante del laboratorio lo constituye un personal competente y motivado, obviamente; pero, en el mismo se utilizan muchas clases de equipos y cada uno de ellos debe funcionar correctamente. La elección correcta de tales equipos, su instalación y funcionamiento, así como el hecho de contar con un sistema de mantenimiento, son elementos que están integrados en el sistema de gestión de la calidad. De esta forma, se in- fiere que para un uso eficiente de los recursos se debe contar, al menos, con los siguientes elementos: En lo referente al equipamiento e infraestructuras, resulta re- comendable crear un mantenimiento programado que incluya tareas diarias, semanales y mensuales. Por otra parte, sólo debe autorizarse como operador al personal que haya recibido forma- ción específica en el uso adecuado de los equipos. Para verificar que los equipos están funcionando según las especificaciones del fabricante, es necesario supervisar los parámetros del instrumento realizando comprobaciones periódicas del funcionamiento. Este proceso debe tener lugar antes de utilizar el equipo por primera vez y, posteriormente, con la frecuencia recomendada por el fabricante. Estas comprobaciones también han de llevarse a la práctica, des- pués de cualquier tipo de reparación de los instrumentos. Reactivos. Un laboratorio bien gestionado dispondrá de un siste- ma de mantenimiento y adquisición de inventario. Este sistema requiere planificación y seguimiento para garantizar que siempre se dispone de la cantidad adecuada de suministros y reactivos. Se deben analizar las necesidades y establecer las existencias míni- mas necesarias durante un periodo de tiempo adecuado. También se necesitará de un procedimiento para recibir, inspeccionar y alma- cenar los suministros. 15 Biología molecular y citogenética Gestión de muestras. Su correcto desarrollo es primordial para la exactitud y fiabilidad de los análisis y, por consiguiente, para la con- fianza en el diagnóstico del laboratorio. Los resultados influyen en las decisiones de tratamiento y pueden tener un efecto significativo en la asistencia al paciente. Es importante, por ello, proporcionar re- sultados analíticos lo más exactos posible, ya que los errores en los análisis no sólo influyen en la deficiente atención de la patología que sufre el paciente, sino en la eficiencia del laboratorio, provocando la repetición de análisis con el consiguiente despilfarro de tiempo del personal, suministros y reactivos. Recursos humanos. El personal, como ya hemos dicho, es el recur- so más importante del laboratorio. Para la implementación de un uso eficiente de los recursos son fundamentales las personas con integridad que conocen la importancia de su trabajo y participan en la mejora continua. Los técnicos de laboratorio son «socios» esenciales en la asistencia sanitaria. Todo personal de nueva incorporación debe ser receptor, al menos, de una adecuada orien- tación y formación continuada. La orientación es el proceso de presentar el entorno de trabajo y sus tareas o deberes específicos al nuevo miembro del equipo y, es importante destacar que orien- tación no es sinónimo de formación. La formación continuada es un programa que actualiza a los empleados en un área particular de conocimientos o habilidades. Puesto que las técnicas analíticas están cambiando y evolucionando constantemente, mantenerse al día supone un esfuerzo por parte tanto del empleado como de la dirección. Procedimientos Normalizados de Trabajo (PNT). Documentos que describen la secuencia específica de operaciones y métodos que deben aplicarse en el laboratorio para una finalidad determina- da. Proporcionan una manera única según la cual deberá realizarse la operación cada vez que se repita en el laboratorio. Han de incluir todos los aspectos de una técnica determinada, desde la recep- ción de muestras hasta la emisión de informes, si procede, con especificación de los controles necesarios. Son complementarios al Manual de Calidad cuya finalidad es establecer cómo, quién, y cuándo debe realizarse una actividad prevista. En laboratorios de diagnóstico, además, es imprescindible la colaboración con los clínicos solicitantes. Esta interacción y feedback entre laboratorio 16  1. Caracterización de los procesos que se realizan en los laboratorios de citogenética… y solicitante es clave para la construcción de un sistema de utili- zación del laboratorio de mayor calidad y una atención al paciente más eficaz. Gestión medioambiental. El laboratorio debería contar con un có- digo de buenas prácticas medioambientales. 17  1. Caracterización de los procesos que se realizan en los laboratorios de citogenética… Autoevaluación 1. ¿Qué Ley define las funciones de la Unidad de Gené- tica? a. RD 639/2014, de 25 de julio, en su Anexo II b. La Constitución Española en su Anexo II c. Una PNL de las Cortes Valencianas d. RD 1277/2003, de 10 de octubre, en su Anexo II 2. Las incubadoras ¿Dónde están localizadas en un labora- torio de Citogenética? a. En la Zona de Bandeo b. No hay incubadoras en este tipo de laboratorios c. En la Sala de Cultivos d. En el Área de Análisis. 3. En el laboratorio de Biología Molecular, el Área post- PCR, está destinada a: a. Examinar la calidad de un bandeo G b. Encontrar metafases aceptables para su análisis usando bromuro de etidio. c. Manipulación de productos amplificados mediante electroforesis d. Extracción de ADN mediante electroforesis. 19 Biología molecular y citogenética 4. ¿Qué es el carryover? a. La contaminación por material no amplificado del medio b. La contaminación por productos amplificados generados en la PCR c. La contaminación por microorganismos ambienta- les d. La contaminación por nucleasas. 5. ¿Cómo define la ISO un sistema de gestión de calidad? a. El correcto desarrollo de la gestión de las muestras b. La secuencia específica de operaciones y métodos que deben aplicarse en el laboratorio para una fina- lidad determinada. c. El sistema de mantenimiento y adquisición de inventario. d. Actividades coordinadas para dirigir y controlar una organización con respecto a la calidad. 6. Un programa de calidad adecuado requiere: a. Políticas para la validación de protocolos. b. Formación de las personas que realizan los análisis. c. Seguridad del personal d. Todas son correctas 7. ¿Cuál es el recurso más importante de un laboratorio? a. El personal competente y motivado b. Los equipos y su correcto funcionamiento c. El mantenimiento programado d. Ninguna es correcta 20  1. Caracterización de los procesos que se realizan en los laboratorios de citogenética… 8. ¿Cómo se define un Procedimiento Normalizado de Trabajo o PNT? a. Programa que actualiza a los empleados en un área particular de conocimientos o habilidades b. Documentos que describen la secuencia específica de operaciones y métodos que deben aplicarse en el laboratorio. c. El correcto manejo y eliminación del material des- echable y los residuos contaminados. d. A) y b) son correctas. 9. ¿Qué representa el concepto de medicina personali- zada posgenómica? a. La aplicación del conocimiento del genoma humano a la práctica médica. b. La implementación de técnicas sofisticadas de aná- lisis, como la hibridación in situ fluorescente. c. La adaptación de la atención médica a la estructura genética única de cada individuo. d. A) y c) son correctas 10. El diagnóstico molecular se basa en: a. El estudio de los proteomas b. El estudio de la composición, estructura y función de moléculas biológicamente importantes. c. El estudio del comportamiento y/o alteraciones de los ácidos nucleicos. d. La aplicación de las técnicas de Biología Molecular en beneficio de la salud 21  1. Caracterización de los procesos que se realizan en los laboratorios de citogenética… Soluciones 1. d 2. c 3. c 4. b 5. d 6. d 7. a 8. b 9. d 10. d 23