Introduction à la biochimie clinique PDF

Université de Tizi Ouzou/Faculté de médecine/3ème année médecine/cour de biochimie clinique/Dr BELKAID.N 1 Introduction à la biochimie clinique Prélèvement I. INTRODUCTION A LA BIOCHIMIE CLINIQUE...

Université de Tizi Ouzou/Faculté de médecine/3ème année médecine/cour de biochimie clinique/Dr BELKAID.N 1 Introduction à la biochimie clinique Prélèvement I. INTRODUCTION A LA BIOCHIMIE CLINIQUE La biologie médicale évolue en ce moment à tous les niveaux : structure et fonctionnement du laboratoire, automatisation, exploration biologique des états physiopathologiques chez l’homme, qui s’enrichissent d’année en année de la découverte des mécanismes biologiques jusqu’alors méconnus. Simultanément, les outils analytiques nouveaux facilitent l’accès à la recherche ou au dosage de biomolécules auparavant inaccessibles. Les praticiens de santé doivent mettre à jour les données récentes des marqueurs biologiques afin de mieux encore les utiliser dans la pratique quotidienne de la biologie médicale. 1. Intérêt des biomarqueurs biologique dans l’exploration des pathologies humaines - Dépistage Exp : dosage de la TSH chez le nouveau né à la naissance pour le dépistage de l’hypothyroïdie congénitale. - Diagnostic Exp : glycémie veineuse à jeun pour le diagnostic du diabète. - Pronostic et réponse aux protocoles de prise en charge Exp : HbA1C pour l’équilibre glycémique chez le diabète. - Suivi thérapeutique Exp : dosage de la ciclosporine « immunosuppresseur » pour l’adaptation posologique 2. Exemples de marqueurs biochimiques d’exploration de certaines pathologies Pathologie Marqueurs biochimiques « protéomiques et métabolomiques » de diagnostic, pronostic, suivi thérapeutique Fonction rénale Urée, créatinine, mesure et/ou estimation du DFG … Diabète Glycémie, HbA1c, fructosamines, insuline, peptide C ….. Fonction hépatique BT,BD, ASAT,ALAT, GGT , PAL ….. Dyslipidémies CHOL, TG, HDLc , LDLc …. Dysprotéinémies EPP, TP, Alb …. Fertilité FSH, LH, E2, Progestérone, testostérone, Prolactine ….. Anémie Fer sérique, transferrine, ferritine, vit B12 Tumeurs Marqueurs tumoraux Malabsorption digestive TP, ALB… Pancréatite Lipasémie, amylasémie Ischémie cardiaque Troponine, CKMB, myoglobine… Insuffisance cardiaque BNP, NT-pro BNP Pathologies musculaires CK, LDH….. Maladies de surcharge Enzymes lysosomiales ….. Dysthyroidie TSH, FT3, FT4, ATPO, ATG ….. Croissance GH, IGF1 …. Déshydratations Urée, créatinine, ionogramme, TP …. La corticosurrénale Cortisol, ACTH, Aldostérone… La médullosurrénale catécholamines Inflammation EPP, CRP…. Carences vitaminiques Dosage des vitamines…  Université de Tizi Ouzou/Faculté de médecine/3ème année médecine/cour de biochimie clinique/Dr BELKAID.N 2 3. Valeurs de référence Le concept de « valeurs de référence » vient se substituer au terme très répondu il y a quelques années de « valeurs normales ». Elles visent à décrire les différentes valeurs que peuvent prendre les résultats des tests biologiques chez le sujet présumé sain. NB. A différencier des seuils de décision clinique. 4. Variations physiologiques des valeurs de référence Les valeurs de référence peuvent varier d’une population à une autre selon : - Sexe - Age - Ethnie - Grossesse - Etc.. II. Le prélèvement L'examen biologique est un ensemble complexe d'étapes qui, de la prescription (ordonnance) au compte rendu final (résultats), exige une surveillance permanente avec des contrôles contribuant à une assurance qualité. Pourquoi demande-t-on une analyse biologique ? Car résultats fournis au médecin par l’analyse d'un échantillon SONT PRÉCIS ET PLUS OBJECTIFS QUE Ce qu’il peut recueillir à travers Les symptômes L’examen clinique Les dires du patient Les étapes de l’analyse biologique : phase pré analytique, phase analytique et phase post analytique. Phase post analytique Phase analytique Phase pré analytique Le prélèvement : C’est le premier stade de toute analyse et l’un des plus importants. Les différents types de prélèvement Sang veineux Sang artériel Sang capillaire  Université de Tizi Ouzou/Faculté de médecine/3ème année médecine/cour de biochimie clinique/Dr BELKAID.N 3 1. Sang Les étapes de prélèvement 1. Prise de contact et Préparation du malade Durée de jeune et respect du rythme circadien - A jeun « 12 h entre le dernier repas et la prise de sang » Exp : glycémie, bilan lipidique - A jeun / le matin 08h Exp : cortisol « entre 8 h et 10h » ACTH à 8 H - à distance des repas « 2 à 3h après » : FNS, marqueurs tumoraux, TP, INR …. - Urgence, Pédiatrie : le jeune est non recommandé. Régimes spéciaux nécessaires avant certaines analyses - Dosage de l’aldostérone et de la rénine : normosodé de 24 heures - Dosage de la phénylalanine et du pyruvate : régime lacté du nouveau-né - VMA : proscrire les aliments aromatisés (contenant la vanille Eviter : Alcool : acide urique ; Tg ; GGT; lactates le Tabac: carboxyHb... le Stress et anxiété: Le stress entrainant l’augmentation : -de la probabilité de malaises (par réaction vasomotrices) -de la concentration plasmatique : en hormone (aldostérone, angiotensine, rénine, vasopressine, catécholamine, cortisol, prolactine, GH, hormones thyroïdiennes TSH et insuline) Autres mesures : Notant en plus, l’heure du prélèvement pour certaines analyses :  si des molécules mises en jeu dans l’analyse sont rapidement labiles ou, inversement, activées in vitro, comme c’est le cas dans la coagulation  le dosage de médicaments Position  Le prélèvement doit toujours se faire en position assise ou couchée. En effet, chez le patient debout, on observe une hémoconcentration relative (diminution du volume plasmatique 10% de 5 à 15%). Lors du prélèvement, maintenir le bras incliné vers le bas. Le tube doit toujours se trouver en dessous du point de ponction.  Position debout pour le dosage de l’aldostérone 2. Matériels Choix des tubes: Plasma, Sérum ou sang total ?  Université de Tizi Ouzou/Faculté de médecine/3ème année médecine/cour de biochimie clinique/Dr BELKAID.N 4 Liste des anticoagulants et additifs  Université de Tizi Ouzou/Faculté de médecine/3ème année médecine/cour de biochimie clinique/Dr BELKAID.N 5 Autres : oxalates 1. Modalité du prélèvement Le prélèvement du sang veineux se fait au niveau du pli du coude Garrot : La position idéale du garrot se situe à une distance au moins 10 cm du pli du coude. Le garrot trop serré provoque une hémoconcentration. Choix des veines. Antisepsie Introduction de l’aiguille Remplissage des tubes étiquetés (ordre). Retrait de l’aiguille Gestion des déchets Ordre de prélèvement en fonction des examens demandés Les tubes secs prélevés en premier éliminant ainsi les éventuels facteurs tissulaires provenant de la lésion. Tubes contenant un anticoagulant en commençant par ceux destinés aux tests d’hémostase (tubes citratés ) afin d’éviter la contamination par d’autres anticoagulants (héparine) mais: Le prélèvement destiné à l’hémostase et l’ionogramme doit se faire sans garrot donc on les laisse en dernier mais il faut être prudent pour ne pas les contaminer par les premiers tubes contenant l’anticoagulant En dernier ceux contenant de la thrombine (agitation immédiate et prolongée nécessaire afin d’obtenir un caillot de bonne qualité). Si une hémoculture est prescrite Prélever les échantillons lui correspondant en premier (dans l’ordre préconisé par le protocole fourni par le fabricant) 3. Précautions : éviter les interférences provoquées par des erreurs préanalytique telles que :  Hémolyse : l’hémolyse peut libérer des substances intra-érythrocytaires dont la concentration est supérieure à la concentration plasmatique (exp: potassium)  Université de Tizi Ouzou/Faculté de médecine/3ème année médecine/cour de biochimie clinique/Dr BELKAID.N 6 - L’absorption propre de l’hémoglobine à 415 nm peut perturber certains dosages - L’hémoglobine, par sa présence, peut inhiber les réactions de diazotation ou la mesure de certaines activités enzymatiques (par exp activité lipasique. Causes d’hémolyse – Volume du 1er tube, souvent 10 ml. – Prélèvement au cathéter ; – Application prolongée ou serrée du garrot. – Manipulation de l’aiguille pendant le flux. – Tps de conservation et de transport non appropriée. – Transport des échantillons (pneumatiques, vibrations, chocs) – Absence de mélange. – Prélèvement au niveau d’un hématome ; – Présence d’alcool sur site de prélèvement  Coprs gras  Médicaments B. URINES : « Paradoxalement c’est le prélèvement le plus difficile à pratiquer» Urines fraiches du matin Les urines de 24 heures ♦ Recueil des urines de 24 h: Pour une réalisation correcte des analyses; un recueil complet et précis est fondamental. - S’il est réalisé par le patient lui-même, une information détaillée, orale ou écrite lui sera donnée lors de chaque prélèvement. des urines de 24h ♦ Procédure de recueil des « urines de 24 heures » 1. Vider la vessie le matin au lever. 2. Jeter ces urines et noter la date et l'heure. 3. À partir de ce moment-là, collecter les urines de chaque miction, tout au long de la journée. 4. Faites le dernier recueil, le jour suivant, au lever, à la même heure que la veille. 5. Apporter le récipient au laboratoire le plus vite possible. ♦ Les récipients - Des récipients gradués et propres; préparés et remis par le laboratoire - A défaut: Bouteilles d'eau minéral vidées (non rincées par l'eau du robinet). ♦ Nécessité de récipients particuliers: - Décalcifiés par EDTA, citrate ou HCL : calciurie - Acidifiée : dérivés méthoxylés, porphyrines - Avec conservateur (Ac Borique) : Aa urinaires Les liquides de ponction sont représentés par  Le liquide céphalo-rachidien (LCR).  Liquide pleural.  Liquide d’ascite.  Liquide synovial.  Liquide péricardique  Liquide gastrique  La bile  Liquide duodénal  La salive …etc Avant toute analyse, on doit marquer l’aspect de liquide et puis on effectue une centrifugation après homogénéisation  Université de Tizi Ouzou/Faculté de médecine/3ème année médecine/cour de biochimie clinique/Dr BELKAID.N 7 Réception et identification ♦ Vérifier les erreurs de transcription : entre étiquetage et prescription. ♦ vérification de la conformité de l’échantillon ♦ maître un n° d’identification, date et horaire de la réception (fiche de suivi). ♦ Signaler toutes anomalies (fiche de suivi). Conditionnement au moment de l’analyse -S’assurer d’avoir le bon échantillon. -Ramener à température ambiante: 20 à 25° C (si l’échantillon est conservé au réfrigérateur). -Homogénéiser par inversion, tout en évitant la formation de mousse. Conservation des échantillons Analyser le plus rapidement possible après réception Si non il faut respecter les conditions spécifiques de conservation - Protection de la lumière par une feuille de papier aluminium. (bili, vitC, la Ck et les folates). - Boucher les flacons pour éviter l’évaporation ou contamination. -Stocker toujours les récipients contenant du sang verticalement ; le processus de coagulation est accéléré. Conclusion Maitrise de la phase pré analytique démarche d’amélioration de la qualité Bénéfice pour tous les acteurs: - - patients - Services de soins: médecins et infirmiers - Direction: réduction des couts de non qualité Laboratoire: exigence majeure de l’accréditation des laboratoires norme ISO 15189 Objectif de tous: qualité et compétences