Χρήση Απορρυπαντικών στις Βιοχημικές Διαδικασίες

Podcast

Play an AI-generated podcast conversation about this lesson

Questions and Answers

Ποιό είναι το σύστημα που χρησιμοποιείται για να απομακρύνει τις ιστόνες από τα μόρια του DNA;

CTAB (correct)

Tris-HCl pH 8

SDS

NaCl

Ποια ουσία χρησιμοποιείται για να ρυθμίσει την ιοντική ισχύ του διαλύματος;

EDTA

NaCl (correct)

CTAB

SDS

Ποια είναι η χρήση της Tris-HCl pH 8;

Χηλικός παράγοντας

Πρωτεάση

Απορρυπαντικό

Ρυθμιστικό διάλυμα (correct)

Ποια είναι η χρήση της πρωτεϊνάσας Κ;

Πρωτεάση Signup and view all the answers

Ποια είναι η χρήση της EDTA;

Παρεμποδίζει τη δράση νουκλεασών Signup and view all the answers

Ποιό είναι το αποτέλεσμα της χαμηλής ιοντικής ισχύος στο διάλυμα CTAB;

Κατακρήμνισε τα νουκλεϊκά οξέα Signup and view all the answers

Ποια είναι η χρήση της β-μερκαπτοαιθανόλης;

Ισχυρός αναγωγικός παράγοντας Signup and view all the answers

Ποιό είναι το αποτέλεσμα της πιο υψηλής συγκέντρωσης αλατιού στο διάλυμα CTAB;

Σαλτ-ιν Signup and view all the answers

Ποια είναι η χρήση της RNάσης;

Απομακρύνει το RNA Signup and view all the answers

Ποια είναι η χρήση του NaCl;

Προκαλεί πλασμόλυση και καταστροφή του κυτταρικού τοιχώματος Signup and view all the answers

Πόσο υψηλή πρέπει να είναι η συγκέντρωση του NaCl για να απομακρυνθεί το τετραμερές H3-H4;

1,4 έως 2Μ Signup and view all the answers

Ποια είναι η λειτουργία του EDTA;

Παρεμποδίζει τη δράση νουκλεασών που διασπούν το DNA Signup and view all the answers

Ποια είναι η δράση της πρωτεϊνάσας Κ;

Σπάει πεπτιδικούς δεσμούς بين αρωματικών ή αλειφατικών αμινοξέων Signup and view all the answers

Ποια είναι η δράση της β-μερκαπτοαιθανόλης;

Αναγει δισουλφιδικούς δεσμούς Signup and view all the answers

Ποια είναι η μεθοδος διαχωρισμού που χρησιμοποιείται με πρόσδεση σε μεμβράνη SiO2;

Με πρόσδεση σε μεμβράνη SiO2 Signup and view all the answers

Ποιο είναι το αποτέλεσμα όταν η φαινόλη αναμειγνύεται με το προϊόν κυτταρικής λύσης;

Διαχωρίζεται το DNA στηνάνω υδατική φάση Signup and view all the answers

Ποια είναι η λειτουργία της ισοαμυλικής αλκοόλης;

Σταθεροποιεί τη μεσόφαση Signup and view all the answers

Ποια είναι η δράση του χλωροφόρμιο;

Μετουσιώνουν και διαλυτοποιούν τις πρωτεΐνες Signup and view all the answers

Ποια είναι η λειτουργία της πρωτεϊνάσας Κ σε θερμοκρασία 50–60°C;

Αυξάνεται η δραστικότητά της Signup and view all the answers

Ποια είναι η λειτουργία του EDTA στην πρωτεϊνάσας Κ;

Δεν επηρεάζει η δράση της Signup and view all the answers

Study Notes

Χρήση Απορρυπαντικών (Αμφιπαθή Μόρια)

Το CTAB ή SDS διασπούν τη συνοχή των φωσφολιπιδίων της μεμβράνης και αποδιατάσσουν τις πρωτεΐνες, καταστέλλοντας τη λειτουργικότητά τους.
Δημιουργούν σύμπλοκα με τις πρωτεΐνες, οδηγώντας σε απώλεια τριτοταγής δομής και λειτουργικότητας.

Ρύθμιστικό Διάλυμα (Buffer)

Το Tris-HCl pH 8 ρυθμίζει το pH στο διάλυμα, διατηώντας το σε ουδέτερη περιοχή.
Πιθανώς αλληλεπιδρά με τους λιποπολυσακχαρίτες στη μεμβράνη, συμβάλλοντας στην περαιτέρω αποσταθεροποίηση της μεμβράνης.

Απομάκρυνση συστατικών Κυττάρου

Το EDTA παρεμποδίζει τη δράση νουκλεασών, δεσμεύοντας δισθενή κατιόντα όπως Mg2+ και Ca2+ που είναι απαραίτητα για τη δράση τους.
Η πρωτεϊνάση Κ δρα ως πρωτεάση και απενεργοποιεί τις ενδογενείς νουκλεάσες.
Η β-μερκαπτοαιθανόλη ανάγει δισουλφιδικούς δεσμούς, καταστρέφοντας την τριτοταγή/τεταρτοταγή δομή των πρωτεϊνών και άρα τη λειτουργία τους.

Διαφορετική Συμπεριφορά του CTAB

Σε χαμηλές συγκεντρώσεις, το CTAB δεσμεύεται στο DNA και οδηγεί στην κατακρήμνισή του.
Σε διαλύματα με χαμηλή ιοντική ισχύ, η διαλυτότητα των πρωτεϊνών στο διάλυμα συνήθως αυξάνεται μερικώς (salting-in), ενώ το DNA κατακρημνίζεται.

Μέθοδοι Διαχωρισμού

Εκχύλιση με οργανικούς διαλύτες (organic extraction).
Με πρόσδεση σε μεμβράνη SiO2 (silica), κυτταρίνης (cellulose) ή ιοντοανταλλαγής (ion exchange).
Με πρόσδεση σε μαγνητικά σφαιρίδια.

Διαχωρισμός με Οργανικούς Διαλύτες

Χρήση διαλύματος φαινόλης: χλωροφορμίου: ισοαμυλικής αλκοόλης ή χλωροφόρμιο: ισοαμυλική αλκοόλη.
Δημιουργούνται δύο φάσεις, जहάν το DNA διαχωρίζεται στην (άνω) υδατική φάση και οι μετουσιωμένες πρωτεΐνες, λιπίδια και λοιπά κυτταρικά θραύσματα στην (κατώτερη) οργανική φάση.

Studying That Suits You

Use AI to generate personalized quizzes and flashcards to suit your learning preferences.

Description

Ο ρόλος των απορρυπαντικών όπως το CTAB και το SDS στις βιοχημικές διαδικασίες, όπως η διασποнь της μεμβράνης και η καταστολή της λειτουργικότητας των πρωτεϊνών.