Técnicas Básicas de Microbiología: Observación de Microorganismos

Técnicas Básicas de Microbiología: Observación de Microorganismos

Poder de Resolución

• Capacidad de distinguir como separados dos puntos adyacentes

Tipos de Microscopios

• Microscopio de campo claro
• Microscopio de campo oscuro
• Microscopio de contraste de fase
• Microscopio de luz ultravioleta
• Microscopio de fluorescencia

Técnicas Básicas de Observación de Microorganismos

• Observación directa de preparaciones en fresco: sin teñir, utilizando un porta y cubreobjetos, observando directamente en el microscopio
• La observación en el microscopio de campos claro es difícil debido a la falta de contraste de los m.o.
• La observación es más fácil en el microscopio de campo oscuro o de contraste de fases

Observación de Preparaciones Teñidas

• Son más fáciles de observar debido al aumento del contraste al teñirlas
• Se emplean colorantes que tengan afinidad por un componente celular, lo que mata a los m.o.
• Mayor resolución y poder de amplificación

Tinciones

• Tinción simple: solo un colorante, se ve toda la morfología y agrupaciones
• Tinción diferencial: sirve para observar diferencias entre m.o., empleando diferentes colorantes y decolorantes
• Tinción GRAM: Divide bacterias gram + y gram -; gram + son de color violeta y gram - son de color rojo/rosa
• Tinción de ácido-alcohol resistencia (AAR): sirve para identificar bacterias AAR (patógenos), resistentes a la tinción

Composición Química de las Bacterias

• El peso total de las bacterias es un 75% agua y un 35% peso seco.
• El peso seco está compuesto por:
  • 3-4% ADN
  • 10-20% ARN
  • 10% lípidos
  • 20% polisacáridos
  • 50% proteínas

Pared Celular

• La pared celular de las bacterias Gram-positivas es más gruesa y uniforme.
• La pared celular de las bacterias Gram-negativas es más fina y compleja.
• Micobacterias: tienen una pared celular gram-positiva con elevado contenido en lípidos.
• Micoplasmas: bacterias sin pared celular, tienen una membrana plasmática estabilizada por su contenido en esteroles.
• La pared celular de las arqueas es propia de cada especie y no contiene mureína o peptidoglucano.

Funciones de la Pared Celular

• Función morfológica: da forma a la bacteria.
• Función protectora: protege físicamente a la bacteria.
• La pared celular realiza ambas funciones gracias a la mureína o peptidoglucano.

Efecto en Soluciones de Distinta Concentración

• Solución isotónica: igual concentración de solutos a ambos lados de la membrana.
• Solución hipotónica: menor concentración de solutos fuera que dentro de la célula.
• Solución hipertónica: mayor concentración fuera que dentro de la célula.

Peptidoglucano o Mureína

• Está formado por una parte polisacárida y otra peptídica.
• La parte polisacárida está formada por la repetición de dos subunidades de azúcares derivados de la glucosa.
• La parte peptídica está formada por un tetrapéptido.
• La unión entre tetrapéptidos en las Gram-negativas es directa, mientras que en las Gram-positivas es indirecta.

Estructuras Extraceulares

• Son estructuras extracelulares, formadas por material secretado por la bacteria.
• Cápsula: estructura consistente con límites bien definidos.
• Capa mucosa: estructuras más finas y difusas de bordes poco definidos.

Estructuras Bacterianas Extraceulares

• Fimbrias: estructuras filamentosas cortas y muy numerosas.
• Fimbrias permiten a la bacteria adherirse a los tejidos y mucosas para favorecer la colonización.
• Pelos (pili): filamentos de tamaño intermedio entre las fimbrias y los flagelos.
• Pelos sirven como receptores de los bacteriófagos y se desarrollan como pelo sexual para procesos de conjugación bacteriana.
• Flagelos: estructuras filamentosas responsables del movimiento bacteriano.
• Flagelos están formados por tres partes: filamento, gancho y cuerpo basal.