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Definición de Histología

• Es la ciencia que estudia los tejidos biológicos a nivel microscópico, analizando su estructura, organización y funciones.
• Es fundamental para la biología y la medicina.
• Se basa en técnicas de microscopía y tinción para observar células y matrices extracelulares.

Definición de Ingeniería Tisular

• También conocida como ingeniería de tejidos.
• Es una rama de la bioingeniería.
• Combina la biología y la ingeniería para desarrollar tejidos biológicos que restauran o mejoran la función de tejidos dañados.
• Utiliza células madre, andamios tridimensionales biocompatibles y moléculas bioactivas.

Aplicación Clínica de la Ingeniería Tisular

• Regeneración de Tejidos y Órganos: Crea tejidos y órganos para reemplazar partes dañadas.
• Mejora la disponibilidad de órganos para trasplantes.
• Cirugía Pediátrica: Repara defectos congénitos y reconstruye tejidos.
• Medicina Regenerativa: Promueve la reparación de tejidos en enfermedades degenerativas y lesiones.
• Investigación Biomédica: Permite estudiar enfermedades y desarrollar terapias creando modelos de tejidos.

Microscopio Fotónico

• También conocido como microscopio óptico.
• Utiliza luz visible para ampliar imágenes de objetos pequeños.

Componentes del Microscopio Fotónico

• Sistema Óptico:
• Oculares: Lentes para observar la imagen.
• Objetivos: Lentes cercanas a la muestra que amplifican la imagen.
• Condensador: Lente que concentra la luz sobre la muestra.
• Sistema de Iluminación:
• Fuente Luminosa: Proporciona la luz necesaria para la observación.
• Diafragma de Iris: Regula la cantidad de luz que llega a la muestra.
• Diafragma de Campo: Controla el área iluminada de la muestra.
• Sistema Mecánico:
• Base: Soporte del microscopio.
• Brazo: Conecta la base con el tubo óptico.
• Platina: Superficie donde se coloca la muestra.
• Tornillos de Enfoque: Ajustan la nitidez de la imagen.

Técnicas de Microscopía

• Campo Claro: La luz pasa directamente a través de la muestra, ideal para muestras teñidas.
• Campo Oscuro: La luz se dirige en un ángulo, iluminando solo las partes que desvían la luz, útil para muestras transparentes.
• Contraste de Fases: Aumenta el contraste de muestras transparentes sin teñir, ideal para observar células vivas.

Unidades de Medición

• Micrómetro (µm): Equivale a 10^-6 metros, usado para medir células y organelos.
• Nanómetro (nm): Equivale a 10^-9 metros, usado para medir estructuras aún más pequeñas, como moléculas.

Preparación de Muestras para Microscopía Fotónica

• Selección de la Muestra: El primer paso es seleccionar el material adecuado, como células, tejidos, minerales, etc.
• Fijación: Preserva la estructura y composición de la muestra utilizando productos químicos como formaldehído o glutaraldehído.
• Inclusión: La muestra se incluye en un medio como parafina para facilitar su manipulación.
• Corte: Se corta en secciones delgadas utilizando un microtomo.

Procesamiento de Muestras

• Desparafinado: Eliminación de la parafina de las secciones.
• Hidratación: Rehidratación de las secciones en alcohol de concentración decreciente.
• Tinción: Aplicación de colorantes para resaltar diferentes componentes de la muestra.
• Montaje: Colocación de la muestra en un portaobjetos y cubreobjetos con un medio de montaje adecuado.

Tinciones de Rutina

• Hematoxilina y Eosina (H&E):
• Hematoxilina: Tiñe los núcleos celulares de azul oscuro o púrpura.
• Eosina: Tiñe el citoplasma y otros componentes celulares de rosado.

Tinciones Especiales

• PAS (Ácido Periódico de Schiff):
• Detecta polisacáridos como glucógeno y mucinas en tejidos.
• Tiñe los componentes positivos de color magenta.
• Azul de Toluidina:
• Utilizada para tinciones rápidas en histología vegetal y animal.
• Produce una reacción metacromática, tiñendo diferentes estructuras en colores que van desde verde brillante hasta púrpura.
• Tricrómica de Masson:
• Utiliza hematoxilina, fucsina y verde luz.
• Diferencia fibras de colágeno (azul o verde) y tejido muscular (rojo).

Microscopía Electrónica de Transmisión (TEM)

• Utiliza electrones para observar detalles muy pequeños de una muestra.
• Proporciona imágenes de alta resolución.
• Se utiliza en diversas áreas científicas.

Manejo de TEM

• Preparación de la Muestra: Las muestras deben ser muy delgadas (nanómetros), usando ultramicrotomos.
• Montaje de la Muestra: Las muestras se colocan en rejillas de cobre o conductoras.
• Ajuste de Parámetros: Se selecciona el voltaje de aceleración, típicamente entre 80 kV y 300 kV.

Procesamiento de Muestras para TEM

• Fijación: Se usan fijadores como glutaraldehído y tetróxido de osmio.
• Deshidratación: Se utilizan soluciones de etanol de concentración creciente.
• Inclusión en Resina: Se usa resinas epoxídicas para estabilidad mecánica.
• Corte Ultradelgado: Se realizan cortes ultrafinos (60-90 nanómetros) con un ultramicrotomo.
• Contraste: Se usan sales pesadas como acetato de uranilo y citrato de plomo.

Microscopía Electrónica de Barrido (SEM)

• Utiliza electrones para obtener imágenes detalladas de la superficie de la muestra.
• Es ampliamente utilizada en ciencia de materiales, biología y otras disciplinas.

Manejo de SEM

• Preparación de la Muestra: Las muestras deben estar secas y ser conductivas, recubriéndose con oro o carbono si no lo son.
• Montaje de la Muestra: Las muestras se fijan en portaobjetos adecuados.
• Ajuste de Parámetros: Se ajusta el voltaje de aceleración de los electrones y la distancia de trabajo.

Procesamiento de Muestras para SEM

• Fijación: Se utilizan fijadores como glutaraldehído y tetróxido de osmio.
• Deshidratación: Se deshidrata progresivamente con soluciones de etanol o acetona.
• Secado Crítico: Se utiliza un aparato de secado crítico para evitar la distorsión por la eliminación de líquidos.
• Recubrimiento: Las muestras no conductivas se recubren con un material conductor utilizando un recubridor de sputter.

Observación con SEM

• Inserción de la Muestra: Las muestras se colocan en la cámara del microscopio y se crea un vacío.
• Escaneo de Superficie: Un haz de electrones enfoca y escanea la superficie.
• Detección de Señales: Los electrones secundarios y retrodispersados son detectados para formar la imagen. Captura de Imágenes: Las imágenes se capturan y analizan utilizando software especializado.