Técnicas de Microscopia em Biologia

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Questions and Answers

Qual é o principal objetivo da colheita de tecido para análise microscópica?

Obter uma amostra representativa do tecido e da zona periférica. (correct)

Analisar apenas a área afetada.

Recolher tecidos sem necessidade de sinalização.

Selecionar tecidos exclusivamente dos órgãos pares.

Qual dos seguintes fixadores é adequado para tecidos animais?

Ácido acético.

Ácido pícrico.

Formaldeído de 4-10%. (correct)

Ethanol absoluto.

Qual é a temperatura e o tempo recomendados para a fixação de tecidos na maioria dos casos?

Temperatura ambiente durante 16 horas ou 4ºC durante 24 horas. (correct)

Temperatura ambiente durante 24 horas.

0ºC durante 12 horas.

24ºC durante 16 horas.

Qual destas opções NÃO é uma classe de fixadores mencionada para tecidos?

Agentes polares. Signup and view all the answers

Durante o processo de desidratação, qual é a sequência recomendada de etanol para as amostras?

50%, 75%, 90%, 95% e etanol absoluto. Signup and view all the answers

Qual é o principal componente utilizado na inclusão após a desidratação das amostras?

Parafina. Signup and view all the answers

Qual é a razão para a utilização de xilol na preparação de amostras?

Facilitar a imersão em parafina. Signup and view all the answers

Qual processo utiliza micro-ondas para a fixação de tecidos?

Fixação. Signup and view all the answers

Qual é a função do banho de água a temperatura ambiente durante o corte no micrótomo?

Colar os cortes na lâmina Signup and view all the answers

Quais são os benefícios do corte no vibratomo em comparação aos métodos tradicionais?

Menor perda de constituintes celulares Signup and view all the answers

Qual das alternativas não é uma desvantagem do corte no criostato?

Utilização de altas temperaturas Signup and view all the answers

Qual é um dos métodos para garantir cortes com estabilidade no vibratomo?

Incorporação em agarose Signup and view all the answers

Qual tipo de corte é necessário para a orientação adequada do órgão durante a análise?

Cortes transversais ou oblíquos Signup and view all the answers

Por que é desvantajoso não desidratar o tecido antes do corte no criostato?

Dificulta a penetração de anticorpos Signup and view all the answers

Qual é uma consequência da alta temperatura utilizada na histologia tradicional?

Aumento da autofluorescência Signup and view all the answers

Qual é o impacto da fixação por formaldeído em relação ao tempo?

Diminui a autofluorescência Signup and view all the answers

Qual é a sequência correta dos processos para a remoção da parafina?

Xilol, etanol absoluto, etanol 95%, água Signup and view all the answers

Qual é o papel do hemalumen na coloração?

Corar núcleos celulares basofílicos Signup and view all the answers

Qual a finalidade da desidratação na preparação de amostras?

Garantir a compatibilidade com resinas de montagem Signup and view all the answers

Quais são os corantes usados no método de coloração H&E?

Hemalumen e eosina Signup and view all the answers

O que se entende por diafanização?

Colocar a amostra em xilol para compatibilidade Signup and view all the answers

Qual é a função da rotulagem na preparação de amostras?

Identificar a origem e detalhes da amostra Signup and view all the answers

Qual é uma vantagem do microarray na análise de tecido?

Facilita a análise de múltiplas amostras em um único bloco Signup and view all the answers

O que é necessário após a diafanização para completar a preparação da amostra?

Incluir resinas naturais ou sintéticas Signup and view all the answers

Quais são as principais características das amostras visualizadas em campo escuro?

Permitem visualizar partículas pequenas e células em suspensão com baixo contraste. Signup and view all the answers

Qual foi a contribuição de Fritz Zernike para a microscopia?

Criação do método de contraste de fase. Signup and view all the answers

Qual é a principal vantagem da microscopia de contraste de fase em relação à microscopia de campo claro?

Melhora a visualização de organelos celulares que são invisíveis em campo claro. Signup and view all the answers

O que caracteriza a iluminação em microscopia de contraste de fase?

Apenas os raios refratados chegam à amostra. Signup and view all the answers

Qual é a finalidade do método DIC (Differential interference contrast)?

Obter informações sobre a densidade ótica da amostra. Signup and view all the answers

Em que ano Fritz Zernike recebeu o Nobel da Física?

1953 Signup and view all the answers

Qual é a característica da imagem gerada pelo método DIC em comparação com a microscopia de contraste de fase?

Fica livre de halos de difração distrativos. Signup and view all the answers

Quais tipos de amostras são mais adequados para visualização com microscopia de campo escuro?

Amostras líquidas, resíduos e partículas pequenas. Signup and view all the answers

Qual é a função do DIC na microscopia?

Separar uma fonte de luz polarizada em partes ortogonais. Signup and view all the answers

Qual das características não é associada ao DIC?

Halo distrativo na imagem. Signup and view all the answers

Qual a função do prisma no ajuste de Wollaston na microscopia DIC?

Melhorar a definição da imagem. Signup and view all the answers

Quais tipos de iluminação são utilizados na microscopia citada?

Campo claro, campo escuro, contraste de fase e contraste de interferência. Signup and view all the answers

Como a microscopia eletrónica diferencia-se da fluorescência?

As imagens são em preto e branco. Signup and view all the answers

Qual é a voltagem necessária para a microscopia eletrónica de transmissão (TEM)?

50-60 kV. Signup and view all the answers

Qual é a função principal do SEM na microscopia eletrónica?

Visualizar a superfície da amostra. Signup and view all the answers

Qual é um dos principais benefícios da microscopia eletrónica em relação a outras técnicas?

Aumento da gama de pixels nas imagens. Signup and view all the answers

Qual foi a principal contribuição de Antonie Van Leeuwenhoek para a microscopía?

Desenhos de microorganismos realizados em 1683. Signup and view all the answers

O que causou a aberração esférica nas lentes dos microscópios?

Formas esféricas das lentes produzem diferentes pontos de foco. Signup and view all the answers

Qual foi um dos avanços na fabricação de microscópios no século XIX?

Uso de espelhos curvos para melhorar o foco. Signup and view all the answers

Qual a resolução alcançada pelos microscópios óticos em 1880?

0,2 μm. Signup and view all the answers

Quem resolveu matematicamente o problema da aberração esférica em 1830?

Jackson Lister. Signup and view all the answers

Qual das seguintes opções não descreve uma função inicial dos microscópios no século XVIII?

Uso principal em pesquisas científicas. Signup and view all the answers

Qual foi a contribuição de Charles Sédillot ao estudo dos micróbios?

Definiu a palavra micróbio. Signup and view all the answers

Quais tipos de organismos Leeuwenhoek foi capaz de observar com seu microscópio?

Células de esperma e protistas livres. Signup and view all the answers

Study Notes

Métodos de Investigação em Microscopia

Este documento descreve os métodos de investigação em microscopia.
Abrange a história, técnicas e princípios relacionados com a microscopia.
Inclui diferentes tipos de microscopia, como óptica, eletrónica e crio-eletrónica.
Descreve os procedimentos usados para processar amostras biológicas para análise microscópica.

Enquadramento Histórico

O microscópio foi inventado em 1624.
A microscopia permitiu contestar alguns paradigmas, como a geração espontânea.
A pedra de leitura (1000 A.C.), foi um cristal de rocha usado como lente.
Zacharias Janssen e seu filho fabricaram os primeiros microscópios em 1500.
Marcello Malpighi estudou os capilares em 1660.
Robert Hooke descreveu células em 1665 (Micrografia).
Anton van Leeuwenhoek utilizou microscópios simples para observar microorganismos (1683).
Avanços no século XVII tornaram os microscópios mais estáveis e precisos, incluindo a estabilidade e precisão do foco.
O século XIX trouxe novas tecnologias de fabricação de lentes para melhorar a resolução dos microscópios, chegando a uma resolução de 0,2µm que se mantém até hoje.
O século XX trouxe novos tipos de microscópios, como microscopia de contraste de fase e contraste diferencial de interferência.
Os microscópios eletrônicos permitiram aumentar a magnificação para o nível atômico.
A microscopia crio-eletrônica de 2017 permitiu a determinação da estrutura de biomoléculas em solução com alta resolução.

Técnicas de Investigação em Microscopia

Microscópio: Instrumento para tornar detalhes pequenos visíveis.
Resolução: Distância mínima entre dois pontos que podem ser distinguidos pelo observador.
Magnificação: Aumento do tamanho aparente de um objeto.
Microscópios compostos: Possuem lentes múltiplas para aumentar o aumento.
Funciona como as lentes dos nossos olhos. O microscópio tem duas lentes, uma com uma distância focal curta, perto do objeto que se quer observar. O foco do microscópio é perto, ao contrário da distância focal do telescópio, que é maior.
Microscópios vs Telescópios: O microscópio tem várias lentes direcionadas para pequenos objetos próximos. O telescópio usa longas distâncias focais para observar objetos distantes.
Aberração Esférica: Um problema com lentes que causam uma imagem desfocada devido aos feixes de luz não focados no mesmo ponto.
Microscopia eletrônica: Utiliza feixes de elétrons e lentes eletromagnéticas em vez de luz e lentes de vidro.
Microscopia crio-eletrônica: Constroi a imagem congelando a amostra em nitrogênio líquido, mantendo as estruturas naturais.
Microscopia de fluorescência: Utiliza a fluorescência de moléculas para destacar certas estruturas dentro das células.

Processamento de Amostras

Recolha: Coleção da amostra biológica.
Fixação: Preserva o material biológico, evitando a degradação.
Lavagem: Remover resíduos de fixadores.
Desidratação: Remoção da água da amostra.
Impregnação e inclusão: Incorporação do material em uma matriz que permita cortes finos (parafina/resina).
Corte: Preparação de cortes finos do material, utilizando micrótomo/criostato/ vibratomo.
Remoção da resina/parafina: Dissolução da resina para tornar a amostra em solução aquosa para corantes.
Reidratação: Reintrodução da água.
Coloração: Uso de corantes para destacar estruturas específicas.
Montagem: Montagem da amostra para observação microscópica (resina/parafina).
Microscopia Ótica: Técnicas baseadas na análise da transmissão da luz através de componentes específicos, como corantes, com diferentes comportamentos para avaliar tecidos/materiais transparentes.
Microscopia de Fluorescência: Investigação de tecidos transparentes com uso de corantes específicos para observar certas estruturas/características.

Limitações da Microscopia de Fluorescência

Autofluorescência: Fluorescência natural de tecidos, que pode interferir com a fluorescência do corante.
Bleed-through: Sobreposição de diferentes fluorocromos quando há utilização de corantes múltiplos, obscurecendo uma parte das imagens.
Fotobleaching: Desvanecimento do fluorocromo com a exposição à luz.
Fototoxicidade: Efeitos nocivos do fluorocromo nas células/materiais biológicos.

Microscopia Crio-eletrônica

O material biológico é congelado em nitrogênio líquido para preservar a estrutura original.
Permite melhor resolução em comparação com outros métodos de microscopia de elétrons.

Fluoreocromos

Moléculas que emitem luz.
Podem ser usados como marcadores para destacar certas estruturas dentro da célula.
Apresentam características diferentes em função de sua composição química, que afetam sua fluorescência em função do pH, potencial redox ou força iônica.
Corantes para ácidos nucleicos (DAPI), organelos (MitoTracker) e proteínas (anticorpos).

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Description

Teste seus conhecimentos sobre técnicas de colheita e preparação de tecidos para análise microscópica. Questões incluem fixação, desidratação e cortes em diferentes métodos. Ideal para estudantes de biologia e profissionais da área de histologia.