Técnicas de Microscopia em Biologia

Um processo onde um bloco de tecido é cortado em fatias finas usando um instrumento chamado micrótomo. O bloco é primeiramente recortado para encontrar a zona que contém o espécime e depois cortado em fatias que são colocadas numa lâmina.

Um método que consiste em congelar o tecido a temperaturas baixas e depois cortá-lo num criostato. Este procedimento permite obter fatias finas de tecido congelado.

Semelhante ao micrótomo, mas usa uma lâmina vibratória para cortar o tecido. Este procedimento é menos contundente, preservando estruturas delicadas. É útil para cortes de tecidos delicados com menor danos.

Um método de corte que usa uma lâmina que vibra para seccionar o tecido, garantindo precisão e minimizando danos.

Cortes realizados perpendicularmente ao comprimento do órgão, resultando em uma visão transversal do tecido.

Cortes angulares realizados através do tecido, fornecendo uma visão inclinada do órgão.

Cortes realizados paralelamente ao comprimento do órgão, resultando em uma visão longitudinal do tecido.

A orientação do tecido a ser cortado em relação ao plano de corte. Pode ser transversal, oblíquo ou longitudinal, dependendo do objetivo da análise.

Um método de preparação de amostras para microscopia ótica que envolve a remoção da parafina ou resina da amostra para permitir a coloração.

Processo de reidratação da amostra após a remoção da resina/parafina, passando por uma série de soluções de álcool em concentrações decrescentes.

Processo de tingimento da amostra para aumentar o contraste e permitir a visualização de estruturas diferentes.

Corante básico que colora os núcleos das células, pois os ácidos nucleicos têm afinidade para bases.

Corante ácido que colora as proteínas (elementos básicos), como o citoplasma.

Processo de remoção da água da amostra, utilizando uma série de soluções de álcool em concentrações crescentes.

Processo de tornar a amostra transparente, utilizando xilol, para permitir a montagem em resina.

Colocação de resina natural ou sintética sobre a amostra para preservá-la e permitir a visualização.

A observação mais famosa de Antonie van Leeuwenhoek foi a de fatias de madeira às quais chamou células.

Antonie van Leeuwenhoek criou um microscópio simples que ampliava 275%, permitindo a visualização e desenho de microorganismos.

Leeuwenhoek foi erroneamente chamado de inventor do microscópio, pois já existiam microscópios compostos antes de seu tempo.

O microscópio de Leeuwenhoek permitiu a descoberta de diversos microorganismos, como bactérias, protozoários, células de esperma, células sanguíneas e nematoides.

Antonie van Leeuwenhoek se comunicou com a Royal Society de Londres, enviando cartas e sendo eleito membro em 1680.

A aberração esférica é um problema em lentes que causa um foco irregular dos raios de luz, resultando em imagens desfocadas.

Jackson Lister, em 1830, resolveu matematicamente o problema da aberração esférica, comprovando que a forma esférica das lentes causava a distorção.

Charles Sédillot, em 1878, definiu a palavra micróbio, derivada do grego 'mikrobios', que significa 'vida curta'.

A coleta de tecido para análise microscópica deve considerar a área afetada e a área ao redor. Se houver órgãos aos pares, o lado esquerdo ou direito deve ser identificado e a orientação no corpo deve ser anotada.

A fixação preserva a estrutura dos tecidos, evitando sua decomposição. É realizada mergulhando o tecido em um fixador por um determinado tempo.

O formol ou formaldeído a 4-10% e o Bouin (ácido pícrico, formol e ácido acético) são usados para fixar tecidos animais.

O FAA (etanol, ácido acético, formol e água destilada) e o Carnoy (etanol absoluto, clorofórmio e ácido acético) são usados para fixar tecidos vegetais.

A desidratação é o processo de remoção da água da amostra, preparando-a para a inclusão em parafina.

O processo de desidratação envolve a imersão da amostra em soluções de etanol com concentrações crescentes, terminando com etanol absoluto, e depois em xilol (ou uma mistura de etanol-xilol).

A impregnação e inclusão são realizadas para tornar a amostra rígida e resistente o suficiente para ser cortada em fatias finas para observação microscópica.

A amostra é colocada em parafina, começando com banhos em uma mistura de parafina e xilol, e finalmente em parafina pura. O processo leva cerca de uma hora para tecidos animais e mais tempo para plantas.

A técnica de microscopia de campo escuro usa luz difratada para iluminar a amostra, resultando em um fundo escuro com a amostra brilhante.

A microscopia de campo escuro é ideal para observar amostras pequenas, transparentes ou muito finas, criando alto contraste e destacando detalhes finos.

Em contraste com a microscopia de campo escuro, a de campo claro utiliza luz não difratada para iluminar a amostra, resultando em um fundo claro com a amostra escura.

Microscopia de contraste de fase utiliza a interferência da luz para visualizar estruturas transparentes e finas, como células vivas.

A microscopia de contraste de fase aumenta o contraste de amostras transparentes sem o uso de corantes, possibilitando a visualização de detalhes e organelas celulares.

A microscopia DIC (Diferencial Interference Contrast) utiliza um sistema de polarização complexo para criar sombras que realçam a estrutura tridimensional da amostra, oferecendo um contraste de alta 3D.

A técnica DIC é aplicada para observar amostras transparentes, como células e tecidos, e se destaca pela sua capacidade de criar imagens 3D de alta qualidade.

O contraste de fase permite a visualização de detalhes finos que não são detectáveis por métodos tradicionais, como microscopia de campo claro, devido à sua capacidade de criar imagens de alta resolução e contraste.

O microscópio de contraste de interferência diferencial (DIC) divide a luz polarizada em duas partes que percorrem caminhos óticos diferentes e são recombinadas antes da observação. A interferência entre as duas partes é sensível à diferença de caminho ótico, revelando detalhes da estrutura da amostra.

O DIC é especialmente útil para amostras espessas, pois pode evitar o halo difrativo que é comum na microscopia de contraste de fase.

A microscopia eletrónica utiliza eletrões em vez de luz para formar imagens, o que permite uma resolução muito maior e a observação de estruturas minúsculas.

A microscopia eletrónica de varrimento (SEM) produz imagens da superfície da amostra, enquanto a microscopia eletrónica de transmissão (TEM) observa através da amostra, revelando a sua estrutura interna.

No Microscópio Eletrónico de Varrimento (SEM), a amostra é varrida com um feixe de eletrões que interagem com a superfície, gerando um sinal que é usado para formar a imagem.

No Microscópio Eletrónico de Transmissão (TEM), um feixe de eletrões atravessa a amostra e gera uma imagem com base nos eletrões que a atravessam.

Em Microscopia Eletrónica, a imagem é a preto e branco, o que aumenta o número de pixels e possibilita um maior detalhe da imagem.

O comprimento de onda dos eletrões pode ser diminuído com o aumento da voltagem, o que leva a imagens com maior resolução.