Técnicas de extracción de ADN en tejidos vegetales

Homogeneización del tejido vegetal

• La homogeneización busca romper la estructura celular para liberar componentes internos, facilitando el análisis biológico.
• Se utiliza comúnmente un mortero y pistilo o una licuadora para pulverizar el material vegetal.

Inhibidores en soluciones de lisis

• Se agregan inhibidores para prevenir la degradación del ADN por enzimas que puedan liberarse durante la lisis celular.
• El EDTA es un quelante que se une a iones metálicos, inhibiendo así la actividad de nucleasas que rompen el ADN.

Separación de componentes celulares

• Los componentes celulares no solubles se separan del ADN mediante centrifugación; el ADN queda en la fase líquida tras la lisis.

Enzimas que destruyen el ADN

• Las células contienen enzimas, como las ADNasas, que eliminan ADN extraño para protegerse de posibles infecciones virales.

Eliminación de lípidos y proteínas

• Se utiliza un proceso de precipitación y lavado para eliminar lípidos y proteínas, asegurando una mejor pureza del ADN extraído.

Objetivo de la extracción de ADN

• El objetivo principal es obtener ADN en una forma pura y funcional para análisis genéticos, clonación o secuenciación.

Desnaturalización de enzimas ADNasas

• La temperatura necesaria para desnaturalizar las enzimas ADNasas es generalmente elevada, alrededor de 65-70 °C, dependiendo del tipo de enzima.

Papel del EDTA en ADNasas

• EDTA inhibe enzimas ADNasas al quelar iones metálicos que son cofactores esenciales para su actividad.

Precauciones al manipular ADN

• Es importante evitar el pipeteo y la agitación agresiva al redisolver el ADN, ya que puede provocar la fragmentación del material genético.

Función del isopropanol en la precipitación del ADN

• El isopropanol se utiliza para precipitar el ADN, ya que reduce la solubilidad del ADN en solución, permitiendo su recuperación en forma sólida.