Techniques de génie génétique: Clonage moléculaire

Le clonage moléculaire est un processus qui consiste à insérer un fragment d'ADN (appelé insert) dans un vecteur d'ADN, puis à introduire ce vecteur dans une cellule hôte afin de produire de nombreuses copies de l'insert.

Le clonage reproductif est un processus qui consiste à créer un individu génétiquement identique à un autre.

Le clonage thérapeutique est un processus qui consiste à créer des tissus ou des organes à partir de cellules souches pour les greffer, en utilisant des cellules compatibles avec celui du receveur.

Le fragment d'ADN que l'on souhaite cloner, c'est le gène ou la séquence d'ADN d'intérêt.

Un vecteur de clonage est une molécule d'ADN qui porte l'insert et qui permet de le multiplier dans la cellule hôte. Il est comparable à un véhicule pour l'ADN.

Les enzymes de restriction sont des protéines qui coupent l'ADN à des endroits spécifiques, permettant de découper l'ADN à cloner et le vecteur pour les assembler.

La ligase est une enzyme qui permet de joindre les extrémités coupées par les enzymes de restriction. Elle colle l'insert à l'intérieur du vecteur.

Une cellule hôte est une cellule qui va accueillir le vecteur recombiné et qui va permettre sa multiplication. Il s'agit d'une cellule qui va multiplier le vecteur contenant l'insert.

Escherichia coli est une bactérie qui est souvent utilisée comme cellule hôte car elle se reproduit rapidement.

Saccharomyces cerevisiae est une levure qui est aussi souvent utilisée comme cellule hôte.

Un vecteur est une molécule d'ADN qui permet de multiplier et protéger un fragment d'ADN étranger.

L'insert est le fragment d'ADN que l'on souhaite cloner et qui est inséré dans le vecteur.

Les vecteurs permettent de transporter, d'exprimer et de multiplier un ADN étranger dans une cellule hôte.

Un vecteur de clonage permet de multiplier un fragment d'ADN ou un gène intégré dans sa séquence.

Un vecteur d’expression est destiné à introduire un gène dans une cellule hôte et activer son expression.

Un vecteur doit se multiplier de manière autonome et indépendante de l'ADN de la cellule hôte.

Un vecteur doit être de petite taille pour pouvoir accueillir un grand fragment d'ADN étranger.

Un vecteur doit contenir des gènes de sélection qui permettent de sélectionner les cellules qui ont intégré le vecteur.

Un vecteur doit posséder des sites de restriction qui permettent de couper le vecteur à des endroits précis pour insérer l'ADN étranger.

Les plasmides sont des molécules d'ADN circulaires, extra-chromosomiques, qui sont présentes dans le cytoplasme des bactéries.

Les plasmides possèdent une origine de réplication qui leur permet de se multiplier de manière autonome.

Les plasmides possèdent un gène de résistance à un antibiotique, qui permet de sélectionner les cellules qui ont intégré le plasmide.

Les plasmides possèdent un site de restriction, qui permet d'insérer l'ADN étranger dans le plasmide.

Les phages sont des virus bactériens qui peuvent être utilisés comme vecteurs de clonage.

Le phage lambda est un phage qui est fréquemment utilisé comme vecteur de clonage.

Le phage M13 est un phage qui peut être utilisé pour cloner de l'ADN et qui peut être utile pour le séquençage.

Les cosmides sont des vecteurs hybrides de vecteurs phage lambda et de plasmides.

Les YAC (Yeast Artificial Chromosome) sont des chromosomes artificiels de levure qui peuvent être utilisés pour cloner de très grands fragments d'ADN.

Les BAC (Bacterial Artificial Chromosome) sont des chromosomes artificiels bactériens qui peuvent cloner de grands fragments d'ADN, jusqu'à 300 kb.