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Questions and Answers
Quel paramètre augmente lorsque la polarité du mélange de solvants en HPLC augmente ?
Quel paramètre augmente lorsque la polarité du mélange de solvants en HPLC augmente ?
- Le temps de rétention des solutés moins polaires
- La force éluante (correct)
- Le facteur de capacité (k’)
- Le pouvoir d’élution de la phase stationnaire
Comment le temps de rétention (tR) des solutés polaires se compare-t-il à celui des solutés moins polaires en HPLC ?
Comment le temps de rétention (tR) des solutés polaires se compare-t-il à celui des solutés moins polaires en HPLC ?
- Il est identique
- Il varie en fonction du mix de solvants utilisés
- Il est toujours plus élevé (correct)
- Il est toujours plus faible
Quel effet a un solvant apolaire sur l'éluabilité des composés polaires en chromatographie de partage ?
Quel effet a un solvant apolaire sur l'éluabilité des composés polaires en chromatographie de partage ?
- Il augmente leur temps de rétention
- Il n'a pas d'effet sur leur élution
- Il les retarde dans le processus d'élution
- Il les fait éluer en premier (correct)
Quel est le lien entre la polarité d'un soluté et son facteur de capacité (k’) en HPLC ?
Quel est le lien entre la polarité d'un soluté et son facteur de capacité (k’) en HPLC ?
Quel type de phase stationnaire est utilisé dans la phase normale de la chromatographie HPLC ?
Quel type de phase stationnaire est utilisé dans la phase normale de la chromatographie HPLC ?
Quel est le temps de rétention (tR) dans la chromatographie?
Quel est le temps de rétention (tR) dans la chromatographie?
Quel facteur décrit la vitesse à laquelle un analyte migre dans une colonne?
Quel facteur décrit la vitesse à laquelle un analyte migre dans une colonne?
Que représente un facteur de rétention (k') supérieur à 20?
Que représente un facteur de rétention (k') supérieur à 20?
Quelle est la formule pour calculer le facteur de rétention (k')?
Quelle est la formule pour calculer le facteur de rétention (k')?
Que signifie un facteur de sélectivité (α) supérieur à 1?
Que signifie un facteur de sélectivité (α) supérieur à 1?
Que décrit le temps mort (tM) dans une colonne chromatographique?
Que décrit le temps mort (tM) dans une colonne chromatographique?
Quel est le rôle du facteur de résolution dans un chromatogramme?
Quel est le rôle du facteur de résolution dans un chromatogramme?
Quel type de composé sort de la colonne au temps tM?
Quel type de composé sort de la colonne au temps tM?
Quel facteur influence directement le temps de rétention dans une chromatographie en phase liquide?
Quel facteur influence directement le temps de rétention dans une chromatographie en phase liquide?
Comment peut-on réduire H dans une chromatographie HPLC?
Comment peut-on réduire H dans une chromatographie HPLC?
Quelle est la formule de l'efficacité de la colonne en chromatographie?
Quelle est la formule de l'efficacité de la colonne en chromatographie?
Quel type de chromatographie utilise un liquide comme phase mobile et une phase stationnaire solide?
Quel type de chromatographie utilise un liquide comme phase mobile et une phase stationnaire solide?
Quel impact a une vitesse d'écoulement trop rapide sur la séparation chromatographique?
Quel impact a une vitesse d'écoulement trop rapide sur la séparation chromatographique?
Quel est l'effet de l'augmentation de la température sur le coefficient de capacité?
Quel est l'effet de l'augmentation de la température sur le coefficient de capacité?
Quelle solution est employée pour optimiser la performance de la colonne chromatographique?
Quelle solution est employée pour optimiser la performance de la colonne chromatographique?
Quels types de phases stationnaires sont utilisés dans la chromatographie en phase gazeuse?
Quels types de phases stationnaires sont utilisés dans la chromatographie en phase gazeuse?
Quel est l'effet d'une épaisseur trop importante du film liquide sur HPLC?
Quel est l'effet d'une épaisseur trop importante du film liquide sur HPLC?
Qu'est-ce qui peut affecter le coefficient de capacité en chromatographie?
Qu'est-ce qui peut affecter le coefficient de capacité en chromatographie?
Quel est le rôle du temps de rétention (tR) dans la chromatographie?
Quel est le rôle du temps de rétention (tR) dans la chromatographie?
Quels facteurs influencent l'efficacité d'une colonne chromatographique?
Quels facteurs influencent l'efficacité d'une colonne chromatographique?
Quel est le coefficient de capacité pour qu'une substance soit considérée comme bien séparée en chromatographie?
Quel est le coefficient de capacité pour qu'une substance soit considérée comme bien séparée en chromatographie?
Comment peut-on réduire la hauteur équivalente à un plateau théorique (H) dans une colonne?
Comment peut-on réduire la hauteur équivalente à un plateau théorique (H) dans une colonne?
Quelle formule représente le nombre de plateaux théoriques dans une colonne?
Quelle formule représente le nombre de plateaux théoriques dans une colonne?
Que se passe-t-il lorsque la largeur du pic à la mi-hauteur (Wh) augmente?
Que se passe-t-il lorsque la largeur du pic à la mi-hauteur (Wh) augmente?
Qu'est-ce qui constitue les différentes sections d'une colonne chromatographique?
Qu'est-ce qui constitue les différentes sections d'une colonne chromatographique?
Quelle est l'importance de la longueur de la colonne (L) dans la chromatographie?
Quelle est l'importance de la longueur de la colonne (L) dans la chromatographie?
La modification de quelle variable joue un rôle clé dans la chromatographie en phase gazeuse?
La modification de quelle variable joue un rôle clé dans la chromatographie en phase gazeuse?
Quel est le temps de rétention (RT) pour l'acide caféique dans l'extrême phénolique?
Quel est le temps de rétention (RT) pour l'acide caféique dans l'extrême phénolique?
Quel détecteur est utilisé pour analyser l'acide caféique?
Quel détecteur est utilisé pour analyser l'acide caféique?
Qu'est-ce que le mode gradient utilisé dans la chromatographie implique?
Qu'est-ce que le mode gradient utilisé dans la chromatographie implique?
À quelle longueur d'onde est mesurée l'absorbance maximale de l'acide caféique?
À quelle longueur d'onde est mesurée l'absorbance maximale de l'acide caféique?
Que représente le terme 'NL' dans le chromatogramme?
Que représente le terme 'NL' dans le chromatogramme?
Quel rôle joue le solvant acétonitrile dans la séparation chromatique?
Quel rôle joue le solvant acétonitrile dans la séparation chromatique?
Quel est l'objectif principal de l'utilisation d'un chromatogramme?
Quel est l'objectif principal de l'utilisation d'un chromatogramme?
Quel est un facteur important pour déterminer le coefficient de capacité dans une analyse chromatographique?
Quel est un facteur important pour déterminer le coefficient de capacité dans une analyse chromatographique?
Quel est le signe de l'absorbance pour l'acide caféique dans le chromatogramme?
Quel est le signe de l'absorbance pour l'acide caféique dans le chromatogramme?
Lors de l'analyse DAD, quelle propriété est principalement étudiée?
Lors de l'analyse DAD, quelle propriété est principalement étudiée?
Flashcards
Élution
Élution
Le processus par lequel la phase mobile traverse la colonne, entraînant avec elle les composants séparés.
Éluant
Éluant
Le solvant ou le mélange de solvants qui composent la phase mobile.
Chromatogramme
Chromatogramme
Un graphique qui représente la concentration des composants élués en fonction du temps ou du volume de la phase mobile passée à travers la colonne.
Pic chromatographique
Pic chromatographique
La représentation graphique de la détection d'un composé lorsqu'il est élué de la colonne. C'est la variation de la concentration en sortie de colonne en fonction du temps.
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Temps de rétention (tR)
Temps de rétention (tR)
Le temps écoulé entre l'injection de l'échantillon et l'apparition d'un pic sur le chromatogramme.
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Temps mort (tM)
Temps mort (tM)
Le temps que la phase mobile prend pour traverser la colonne.
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Facteur de capacité ou de rétention (k')
Facteur de capacité ou de rétention (k')
Un facteur utilisé pour décrire le taux de migration de l'analyte dans une colonne. Il est défini comme : k'A = (tR - tM) / tM.
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Facteur de sélectivité (α)
Facteur de sélectivité (α)
Un facteur qui décrit la séparation de deux espèces (A et B) sur la colonne. Il indique la capacité de la phase stationnaire à préférer un composé par rapport à un autre.
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Phase normale en HPLC
Phase normale en HPLC
En HPLC, la phase normale utilise une phase stationnaire polaire et une phase mobile apolaire pour séparer les composés polaires et moyennement polaires.
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Temps de rétention en phase normale
Temps de rétention en phase normale
En HPLC, la phase stationnaire polaire retient les solutés polaires pendant plus longtemps, ce qui augmente leur temps de rétention (tR).
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Phase mobile en phase normale
Phase mobile en phase normale
En HPLC, la phase mobile est généralement un mélange d’un solvant apolaire (hexane, heptane) et d’un solvant peu polaire (dichlorométhane, trichlorométhane) appelé modificateur polaire (MP).
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Force éluante en phase normale
Force éluante en phase normale
L’augmentation de la polarité de la phase mobile en phase normale augmente sa force éluante, ce qui diminue le temps de rétention (tR) des solutés.
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Phase inverse en HPLC
Phase inverse en HPLC
En HPLC, la phase inverse utilise une phase stationnaire apolaire et une phase mobile polaire pour séparer les composés apolaires et moyennement apolaires.
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Largeur du Pic à la Base (Wb)
Largeur du Pic à la Base (Wb)
La largeur du pic à la base (Wb) est la largeur du pic chromatographique mesurée à la base du pic.
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Largeur du Pic à Mi-Hauteur (Wh)
Largeur du Pic à Mi-Hauteur (Wh)
La largeur du pic à mi-hauteur (Wh) est la largeur du pic chromatographique mesurée à mi-hauteur du pic.
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Efficacité de la Colonne
Efficacité de la Colonne
L'efficacité d'une colonne chromatographique est mesurée par le nombre de plateaux théoriques (N). Plus N est grand, plus la colonne est efficace.
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Hauteur Équivalente à un Plateau Théorique (H)
Hauteur Équivalente à un Plateau Théorique (H)
La Hauteur Équivalente à un Plateau Théorique (H) est une mesure de l'efficacité de la colonne chromatographique. Plus H est petit, plus la séparation des composés est efficace.
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Minimisation de H
Minimisation de H
Pour améliorer l'efficacité d'une colonne chromatographique, il faut minimiser la valeur de H. Utiliser des particules de support plus petites est une méthode courante pour cela.
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Température en CPG
Température en CPG
La température joue un rôle important en chromatographie en phase gazeuse (CPG). Elle influence l'efficacité de la colonne.
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Résolution (Rs)
Résolution (Rs)
La résolution (Rs) d'une colonne chromatographique est la capacité de la colonne à séparer deux composés distincts. Une résolution supérieure à 1,5 est considérée comme acceptable.
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Colonne Efficace
Colonne Efficace
Une colonne efficace est caractérisée par un nombre de plateaux théoriques (N) élevé et une hauteur équivalente à un plateau théorique (H) faible.
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Efficacité de la Colonne : N = L/H
Efficacité de la Colonne : N = L/H
La relation entre la hauteur équivalente d'un plateau théorique (H) et la longueur de la colonne (L).
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Chromatographie en phase liquide (CL)
Chromatographie en phase liquide (CL)
Une technique de séparation analytique basée sur la migration différentielle des analytes entre une phase mobile liquide et une phase stationnaire.
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Chromatographie liquide-solide (CLS)
Chromatographie liquide-solide (CLS)
Une technique de CL où la phase stationnaire est un solide poreux, séparant les analytes en fonction de leur polarité.
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Chromatographie liquide-liquide (CLL)
Chromatographie liquide-liquide (CLL)
Une technique de CL où la phase stationnaire est un liquide immobilisé, séparant les analytes en fonction de leur solubilité.
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Chromatographie en phase gazeuse (CG)
Chromatographie en phase gazeuse (CG)
Une technique de séparation analytique basée sur la migration différentielle des analytes entre une phase mobile gazeuse et une phase stationnaire.
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Chromatographie gaz-solide (CGS)
Chromatographie gaz-solide (CGS)
Une technique de CG où la phase stationnaire est un solide, séparant les analytes en fonction de leur adsorptivité.
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Chromatographie gaz-liquide (CGL)
Chromatographie gaz-liquide (CGL)
Une technique de CG où la phase stationnaire est un liquide immobilisé, séparant les analytes en fonction de leur coefficient de partage.
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Température et H en chromatographie
Température et H en chromatographie
La relation entre la température et la hauteur équivalente d'un plateau théorique (H) n'est pas linéaire et dépend de la nature de l'analyte et de la phase stationnaire.
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Réduction de l'Épaisseur du Film Liquide en HPLC
Réduction de l'Épaisseur du Film Liquide en HPLC
Diminuer l'épaisseur du film de la phase stationnaire liquide en HPLC permet de réduire H et ainsi d'améliorer la résolution.
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Qu'est-ce qu'un détecteur à barrette de diodes (DAD) ?
Qu'est-ce qu'un détecteur à barrette de diodes (DAD) ?
Un détecteur à barrette de diodes (DAD) est un type de détecteur utilisé en chromatographie liquide haute performance (HPLC) pour détecter et identifier les composés. Il utilise une barrette de diodes pour mesurer l'absorbance de la lumière à différentes longueurs d'onde simultanément, générant ainsi un spectre UV-visible du composé élué.
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Qu'est-ce que la chromatographie liquide haute performance (HPLC) ?
Qu'est-ce que la chromatographie liquide haute performance (HPLC) ?
La chromatographie liquide haute performance (HPLC) est une technique de séparation et d'analyse utilisée pour identifier et quantifier les composants d'un mélange. Elle utilise une colonne remplie de matériau stationnaire et un solvant mobile pour séparer les composés en fonction de leurs propriétés physico-chimiques.
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Qu'est-ce que le temps de rétention (RT) ?
Qu'est-ce que le temps de rétention (RT) ?
Le temps de rétention (RT) est le temps nécessaire à un composé pour traverser la colonne chromatographique et atteindre le détecteur. Il est spécifique à chaque composé et dépend de ses interactions avec la phase stationnaire et mobile.
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Qu'est-ce qu'un spectre UV-visible ?
Qu'est-ce qu'un spectre UV-visible ?
Le spectre UV-visible est un graphique représentant l'absorbance d'une substance en fonction de la longueur d'onde de la lumière UV-visible. Il permet d'identifier les composants d'un mélange en fonction de leurs spectres caractéristiques.
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Qu'est-ce que la chromatographie en phase inverse ?
Qu'est-ce que la chromatographie en phase inverse ?
La chromatographie en phase inverse est une technique HPLC où la phase stationnaire est hydrophobe et la phase mobile est polaire. Cette méthode est utilisée pour séparer les composés polaires des composés apolaires.
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Qu'est-ce qu'un gradient en HPLC ?
Qu'est-ce qu'un gradient en HPLC ?
Un gradient est une variation progressive de la composition de la phase mobile au cours d'une analyse HPLC. Il permet d'améliorer la résolution et la séparation des composés en modifiant progressivement leur affinité pour la phase stationnaire.
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Qu'est-ce que l'acide caféique ?
Qu'est-ce que l'acide caféique ?
L'acide caféique est un composé phénolique présent dans les plantes. Il possède des propriétés antioxydantes et anti-inflammatoires.
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Qu'est-ce qu'un extrait phénolique ?
Qu'est-ce qu'un extrait phénolique ?
L'extrait phénolique est un mélange de composés phénoliques extraits d'une source végétale. Il est souvent utilisé dans la recherche pour étudier les propriétés biologiques des plantes.
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Qu'est-ce que la margine ?
Qu'est-ce que la margine ?
La margine est une partie de la plante qui peut être utilisée pour extraire des composés phénoliques.
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Qu'est-ce qu'une colonne C18 ?
Qu'est-ce qu'une colonne C18 ?
La colonne C18 est un type de colonne utilisée en HPLC qui contient une phase stationnaire à base de silice modifiée avec des chaînes alkyles en C18. Cette colonne est souvent utilisée pour séparer les composés organiques.
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Partie 2 : Techniques chromatographiques
- La chromatographie est une méthode de séparation et d'analyse des composants d'un mélange, basée sur leur distribution différentielle entre une phase stationnaire et une phase mobile.
1- Principes de Base et Théorie
- La chromatographie est une méthode de séparation et d'analyse des composants d'un mélange, basée sur leur distribution différentielle entre une phase stationnaire (solide ou liquide fixe) et une phase mobile (liquide ou gaz).
- La chromatographie sur colonne est une technique utilisant des colonnes en verre pour séparer les composants d'un mélange.
- La séparation des constituants est due aux interactions variées avec la phase stationnaire sous l'influence de la gravité.
- La chromatographie haute pression (HPLC) améliore l'efficacité et le débit de séparation en utilisant des pressions plus élevées et des colonnes plus petites.
2- Chromatographie en phase gazeuse (CPG ou CG)
- Le principe de la CPG implique la vaporisation de l'échantillon et son injection au sommet de la colonne.
- Un courant de gaz inerte (gaz vecteur) transporte l'échantillon à travers la colonne.
- La séparation est basée sur la répartition différentielle des composants entre une phase stationnaire et une phase gazeuse.
- Les instruments de la CPG incluent l'injecteur, le gaz vecteur, la colonne, le four et le détecteur (comme le détecteur à ionisation de flamme (FID)).
- Des types de colonnes incluent les colonnes remplies (plus anciennes) et les colonnes capillaires (faibles débits), avec des types d'injection tels que split et splitless.
- L'alimentation en gaz vecteur utilise des gaz inertes (Hélium, Azote, Hydrogène ou Argon) en pureté, avec des régulations de débit spécifiques pour les colonnes remplies ou capillaires.
3- Chromatographie en phase liquide (HPLC)
- La HPLC utilise un liquide comme phase mobile.
- La séparation est basée sur la répartition différentielle des composants entre une phase stationnaire et une phase liquide.
- L'instrumentation HPLC comprend les réservoirs de phase mobile, le dégazeur, la pompe, l'injecteur, la colonne thermostatée, le détecteur et le micro-ordinateur.
- Les détecteurs d'absorption UV-Visible sont fréquemment utilisés en HPLC.
- Les types de détecteurs comprennent les détecteurs à longueur d'onde fixe, à longueurs d'ondes variables et à barrette de diodes.
- La colonne est généralement placée dans un four ou une chambre thermostatée pour régler la température souhaitée.
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