Southern Blotting Quiz
90 Questions
2 Views

Choose a study mode

Play Quiz
Study Flashcards
Spaced Repetition
Chat to Lesson

Podcast

Play an AI-generated podcast conversation about this lesson

Questions and Answers

Wat is de definitie van genetische manipulatie?

  • Het beïnvloeden van de groei van genetisch gemodificeerde gewassen
  • Het produceren van recombinante geneesmiddelen in het laboratorium
  • Het bestuderen van genetisch gemodificeerde proefdieren als diermodel
  • Het veranderen van de nucleotidesequentie van het genoom van een organisme (correct)

Wat is een voorbeeld van een GGO dat uitsluitend gebruikt wordt in het laboratorium?

  • Genetisch gemodificeerde gewassen in de landbouw
  • Gisten voor de productie van recombinante geneesmiddelen
  • Genetisch gemodificeerde proefdieren als diermodel voor een menselijke ziekte
  • Bacteriën voor de productie van recombinante geneesmiddelen (correct)

Wat is een ander woord voor recombinant DNA technologie?

  • Microbiële veredeling
  • Genexpressie
  • Mutagene analyse
  • Genetische manipulatie (correct)

Wat houdt de techniek DNA-fingerprinting in?

<p>Het identificeren van individuen aan de hand van hun unieke DNA-patroon (D)</p> Signup and view all the answers

Wat zijn plasmiden in het kader van recombinant DNA technologie?

<p>Kloneringsvectoren (B)</p> Signup and view all the answers

Wat is een belangrijke toepassing van recombinant DNA technologie?

<p>Medische toepassingen (B)</p> Signup and view all the answers

Wat is de rol van restrictie-enzymen bij de ontwikkeling van recombinant DNA?

<p>Herkenning en knippen van het vreemde DNA (A)</p> Signup and view all the answers

Wat is de functie van elektroforese bij DNA-fingerprinting?

<p>Moleculen scheiden op basis van grootte en lading (C)</p> Signup and view all the answers

Wat zijn de poriën in de gel bij gelelectroforese?

<p>Grootte bepaalt snelheid van migratie (A)</p> Signup and view all the answers

Wat is de rol van plasmiden bij recombinant DNA-technologie?

<p>Verbinding van DNA-fragmenten met behulp van restrictie-enzymen (B)</p> Signup and view all the answers

Wat is de rol van gistcellen in recombinant DNA-technologie?

<p>Voorkomen dat zij restrictie-enzymen hebben (B)</p> Signup and view all the answers

Wat is het doel van een controleladder bij gelelectroforese?

<p>Fragmenten van gekende lengten bevatten (B)</p> Signup and view all the answers

Wat is het enzym dat X-gal kan omzetten in een stabiel blauw product?

<p>β-galactosidase (C)</p> Signup and view all the answers

Welk type kolonies kunnen worden gevormd door bacteriën met een lege vector (zonder insert)?

<p>Blauwe kolonies (B)</p> Signup and view all the answers

Wat kan gebruikt worden om vectoren terugsluiten zonder insert te omzeilen?

<p>Het gebruik van 2 verschillende restrictie-enzymen (B)</p> Signup and view all the answers

Wat kan efficiënter zijn bij het infectieproces van fagen?

<p>Verpakking van het recombinant faag-DNA in virale capsides en injectie in de bacterie (A)</p> Signup and view all the answers

Welk type DNA bevatten M13-fagen?

<p>Enkelstrengig DNA (A)</p> Signup and view all the answers

Waarom worden pBS-vectoren gebruikt bij de RNA-transcriptie?

<p>Aanwezigheid van promotors T3 en T7 (D)</p> Signup and view all the answers

Wat wordt gebruikt voor het binden van complementair DNA in Southern blotting?

<p>Radio-actieve probes (C)</p> Signup and view all the answers

Wat wordt gebruikt voor het maken van complementair DNA (cDNA) in klonering?

<p>Eukaryoot mRNA (D)</p> Signup and view all the answers

Wat is een vector in het kloneren?

<p>Een schakelstuk om het gen in de gastheercel te brengen en zich ervan te vermenigvuldigen (A)</p> Signup and view all the answers

Welk type vectoren is gebruikelijk omdat ze gemakkelijk te isoleren zijn en zich autonoom kunnen repliceren?

<p>Plasmiden (B)</p> Signup and view all the answers

Wat wordt veel gebruikt vanwege de hoog copy number waardoor het gen sneller en efficiënter wordt opgezuiverd?

<p>pUC-plasmide (C)</p> Signup and view all the answers

Wat wordt gebruikt voor het selecteren van de gewenste kloon met de insertie van het gen in de multiple cloning site?

<p>X-gal screening (B)</p> Signup and view all the answers

Wat is het doel van het lacI-gen in relatie tot het lac-operon?

<p>Het voorkomen van lekkage van het lacZ-gen (B)</p> Signup and view all the answers

Welke chromosoomconstructen werden gebruikt bij het Humane Genoom Project voor het bevatten van grote inserts?

<p>YAC, BAC, PAC (A)</p> Signup and view all the answers

Wat zijn de belangrijkste componenten van een YAC waardoor ze geschikt zijn voor grote inserts?

<p>TEL, CEN, ARS, URA3 (C)</p> Signup and view all the answers

Waarom zijn BACs ontwikkeld ter vervanging van YACs voor het bevatten van kleinere inserts?

<p>YACs zijn instabiel en recombineren vaak met gistchromosomen (A)</p> Signup and view all the answers

Welk element moeten expressievectoren bezitten om genen effectief in de gastheercel te brengen?

<p>Een sterke promotor en een goede ribosoom-bindingsplaats (B)</p> Signup and view all the answers

Wat is een belangrijke reden waarom expressie van eukaryote eiwitten in bacteriën zorgvuldig moet worden gecontroleerd en gereguleerd?

<p>Vanwege toxische effecten voor bacteriën (C)</p> Signup and view all the answers

Wat is een belangrijke reden waarom BACs zijn ontwikkeld ter vervanging van YACs?

<p>BACs hebben een grotere stabiliteit dan YACs. (A)</p> Signup and view all the answers

Waarom moeten expressievectoren in het bezit zijn van de juiste promotoren?

<p>Om door bacteriële enzymen herkend en gebonden te kunnen worden (C)</p> Signup and view all the answers

Wat is een kenmerkende eigenschap van pUC en pBS-vectoren voor expressie?

<p>Ze bevatten een sterke promotor (D)</p> Signup and view all the answers

Waarom moeten eukaryote eiwitten zorgvuldig worden gereguleerd bij expressie in bacteriën?

<p>Om de bacteriën te beschermen tegen toxische effecten (B)</p> Signup and view all the answers

Welk element is essentieel voor expressievectoren om genen effectief in de gastheercel te brengen?

<p>Een sterke promotor (A)</p> Signup and view all the answers

Wat is een specifieke eigenschap van de T7-faag promotor?

<p>Het bevat een sterke T7-RNAP-promotor (C)</p> Signup and view all the answers

Wat is de rol van radioactieve probes bij Southern blotting?

<p>Ze worden gebruikt om complementair DNA te binden (D)</p> Signup and view all the answers

Wat is de rol van restrictie-enzymen bij het ontwikkelen van recombinant DNA?

<p>Ze knippen DNA op specifieke restrictieplaatsen om fragmenten te produceren (A)</p> Signup and view all the answers

Wat is een belangrijke eigenschap van plasmiden die ze geschikt maakt als vectoren in recombinant DNA-technologie?

<p>Ze kunnen zich autonoom repliceren in de gastheercel (A)</p> Signup and view all the answers

Wat is een belangrijke toepassing van recombinant DNA-technologie?

<p>Het produceren van genetisch gemodificeerde gewassen (C)</p> Signup and view all the answers

Wat is het doel van replica-plating bij het kloneren van genen?

<p>Om bacteriën te selecteren met het gewenste genotype (C)</p> Signup and view all the answers

Wat is een vector in het kloneren?

<p>Een stukje DNA dat wordt gebruikt om genen te vervoeren en te vermenigvuldigen (B)</p> Signup and view all the answers

Wat is een replicatiestartpunt in een vector?

<p>Een punt waar de replicatie van DNA begint in de gastheercel (C)</p> Signup and view all the answers

Wat is een voorbeeld van een GGO dat uitsluitend gebruikt wordt in het laboratorium?

<p>Genetisch gemodificeerde bacteriën voor laboratoriumonderzoek (D)</p> Signup and view all the answers

Wat is X-gal screening in het kader van recombinant DNA-technologie?

<p>Een techniek om vectoren te selecteren met een lege multiple cloning site (B)</p> Signup and view all the answers

Wat is de functie van elektroforese bij DNA-fingerprinting?

<p>Het scheiden van DNA-moleculen op basis van grootte en lading (A)</p> Signup and view all the answers

Wat is de rol van reverse transcriptase bij het kloneren van eukaryoot genen in prokaryoten?

<p>Het maakt complementair DNA (cDNA) van eukaryoot mRNA (D)</p> Signup and view all the answers

Wat wordt gebruikt voor het maken van complementair DNA (cDNA) in klonering?

<p>Reverse transcriptase (D)</p> Signup and view all the answers

Wat is het doel van recombinant DNA technologie?

<p>Het veranderen van de genetische informatie van een organisme door de nucleotidesequentie van zijn genoom te wijzigen (B)</p> Signup and view all the answers

Wat zijn GGO's in het kader van recombinant DNA technologie?

<p>Alle genetisch gemodificeerde organismen, inclusief proefdieren en bacteriën voor medicinale doeleinden (A)</p> Signup and view all the answers

Wat is een belangrijke toepassing van recombinant DNA technologie?

<p>Productie van natuurlijke geneesmiddelen (A)</p> Signup and view all the answers

Wat wordt bedoeld met genetische manipulatie in relatie tot recombinant DNA technologie?

<p>Het gericht aanpassen van de genetische informatie van een organisme (B)</p> Signup and view all the answers

Wat zijn de meeste GGO's die uitsluitend in laboratoria worden gebruikt?

<p>Genetisch gemodificeerde proefdieren als diermodel voor menselijke ziekten (D)</p> Signup and view all the answers

Wat is het doel van het proces van site-directed mutagenese binnen recombinant DNA technologie?

<p>Het willekeurig veranderen van genetische informatie in een organisme (C)</p> Signup and view all the answers

Wat is een voordeel van het gebruik van fagen als vectoren in vergelijking met plasmidevectoren?

<p>Efficiënter infectieproces door verpakking van het recombinant faag-DNA in virale capsides en injectie in de bacterie. (C)</p> Signup and view all the answers

Wat is een kenmerkende eigenschap van pBluescript (pBS)-vectoren?

<p>Bevat het lacZ’-gen met een MCS en een tweede ori-segment afkomstig van de ssDNA faag f1. (A)</p> Signup and view all the answers

Hoe kunnen vectoren terugsluiten zonder insert omzeild worden?

<p>Door behandeling met alkalisch fosfatase of het gebruik van 2 verschillende restrictie-enzymen. (D)</p> Signup and view all the answers

Hoe worden gewenste kolonies (+vector +insert) geselecteerd op basis van de aanwezigheid van het lacZ’ gen?

<p>Door toevoeging van IPTG als inducer om de gewenste kolonies te selecteren. (C)</p> Signup and view all the answers

Wat is een belangrijke eigenschap van M13-fagen als basis voor een vector?

<p>Enkelstrengig DNA dat het β-galactosidase gen en een MCS bevat. (B)</p> Signup and view all the answers

Wat is kenmerkend voor cosmiden in vergelijking met andere vectoren?

<p>Grote inserts kunnen bevatten omdat bijna al het DNA van de faag verwijderd is, behalve de cos-sites. (C)</p> Signup and view all the answers

Wat is het doel van replica-plating bij het kloneren van genen?

<p>Het selecteren van de gewenste kloon met de insertie van het gen in de multiple cloning site (A)</p> Signup and view all the answers

Wat wordt bedoeld met genetische manipulatie in relatie tot recombinant DNA-technologie?

<p>Het aanpassen van genetisch materiaal om gewenste eigenschappen te verkrijgen (C)</p> Signup and view all the answers

Wat is een belangrijke toepassing van recombinant DNA-technologie?

<p>Het kloneren van eukaryote genen in prokaryoten (D)</p> Signup and view all the answers

Wat is een voorbeeld van een GGO dat uitsluitend gebruikt wordt in het laboratorium?

<p>Cosmiden (A)</p> Signup and view all the answers

Welk enzym kan het kleurloze X-gal omzetten in een stabiel blauw product?

<p>β-galactosidase (D)</p> Signup and view all the answers

Hoe worden gewenste kolonies (+vector +insert) geselecteerd op basis van de aanwezigheid van het lacZ’ gen?

<p>Met behulp van X-gal screening (A)</p> Signup and view all the answers

Wat is een specifieke eigenschap van M13-fagen als vectoren?

<p>Enkelstrengige DNA-fagen (C)</p> Signup and view all the answers

Wat is de rol van radioactieve probes bij Southern blotting?

<p>Het detecteren van specifieke DNA-fragmenten op de membranaan (D)</p> Signup and view all the answers

Wat is een kenmerkend voordeel van het gebruik van fagen als vectoren in vergelijking met plasmidevectoren?

<p>Kunnen grote inserts bevatten (C)</p> Signup and view all the answers

Wat is een belangrijke functie van cosmiden als vectoren?

<p>Kan grote inserts bevatten door bijna al het DNA van de faag te verwijderen (B)</p> Signup and view all the answers

Wat is het doel van het lacZ’-gen met een MCS in pBluescript (pBS)-vectoren?

<p>Selecteren van gewenste kolonies door toevoeging van IPTG als inducer (B)</p> Signup and view all the answers

Hoe kunnen vectoren terugsluiten zonder insert omzeild worden?

<p>Gebruik van 2 verschillende restrictie-enzymen (C)</p> Signup and view all the answers

Wat voor een sequentie wordt afgesneden door restriction endonucleases (RE) van de sticky ends van EcoRI en BamHI?

<p>Palindroomsequenties (A)</p> Signup and view all the answers

Welke promotor bevat de -35 box van de trp-promotor en de -10 box van de lac-promotor, alsook de lac-operator?

<p>trc-promotor (D)</p> Signup and view all the answers

Wat wordt gebruikt bij het behandelen van DNA om de vector en de insert te knippen en gemakkelijk te verbinden?

<p>Restriction endonucleases (RE) (C)</p> Signup and view all the answers

Wat is een belangrijke eigenschap van YACs waardoor ze geschikt zijn voor grote inserts?

<p>Bevatten autonomously replicating sequence (ARS) (D)</p> Signup and view all the answers

Wat wordt gebruikt om de expressie van somatostatine te blokkeren of juist te stimuleren?

<p>LacI-gen (A)</p> Signup and view all the answers

Welk element moeten expressievectoren bezitten om genen effectief in het gastheercel te brengen?

<p>Juiste promotoren (C)</p> Signup and view all the answers

Wat is een belangrijk kenmerk van de T7-faag promotor bij het gebruik van recombinante DNA technologie?

<p>Het kan een hoge mate van genexpressie veroorzaken. (B)</p> Signup and view all the answers

Wat is een specifieke eigenschap van cosmiden in vergelijking met andere vectoren bij recombinante DNA technologie?

<p>Ze kunnen grote DNA-fragmenten bevatten en repliceren als een plasmide. (C)</p> Signup and view all the answers

Wat wordt veel gebruikt vanwege de hoge copy number, waardoor het gen sneller en efficiënter wordt opgezuiverd in recombinante DNA technologie?

<p>Plasmiden als vectoren (D)</p> Signup and view all the answers

Wat is de rol van reverse transcriptase bij het kloneren van eukaryote genen in prokaryoten?

<p>Het zet mRNA om in cDNA voor klonering. (C)</p> Signup and view all the answers

Wat is het doel van replica-plating bij het kloneren van genen?

<p>Om kolonies met het gekloonde gen te identificeren. (A)</p> Signup and view all the answers

Wat is een belangrijke toepassing van DNA-microarrays bij recombinante DNA technologie?

<p>Het opsporen van single nucleotide polymorfismen (SNP's). (D)</p> Signup and view all the answers

Wat is een belangrijk kenmerk van plasmiden bij het overbrengen van vreemd DNA in bacteriën?

<p>Ze kunnen zich autonoom repliceren in de bacteriële cel. (C)</p> Signup and view all the answers

Waarom hebben sommige restrictie-enzymen de mogelijkheid om stompe uiteinden te produceren?

<p>Om de integriteit van het vreemde DNA te behouden. (C)</p> Signup and view all the answers

Wat is een belangrijke eigenschap van minisatellieten of microsatellieten bij DNA-fingerprinting?

<p>Ze zorgen voor individuele identificatie op basis van variabele herhalingen. (A)</p> Signup and view all the answers

Wat is het doel van gelelectroforese bij het scheiden van DNA-moleculen?

<p>Om DNA-moleculen te scheiden op basis van grootte en lading. (A)</p> Signup and view all the answers

Wat bepaalt de snelheid van migratie van DNA tijdens gelelectroforese?

<p>De grootte van de poriën in de gel. (C)</p> Signup and view all the answers

Wat is het gebruik van een controleladder bij gelelectroforese van DNA-fragmenten?

<p>Om fragmenten van gekende lengten als referentie te gebruiken. (B)</p> Signup and view all the answers

Flashcards

IPTG

A molecule that binds and inactivates the lac operon repressor, allowing gene transcription.

lac operon

A genetic mechanism that regulates the metabolism of lactose in bacteria.

Artificial Chromosomes

Genetic constructs like YAC, BAC, and PAC that can carry large DNA inserts.

YAC

Yeast artificial chromosome for large inserts, up to 1000 kb.

Signup and view all the flashcards

BAC

Bacterial artificial chromosome that supports inserts up to 300 kb; more stable than YAC.

Signup and view all the flashcards

Expression Vectors

Tools utilized to introduce and express genes in host cells.

Signup and view all the flashcards

lac Promoter

A promoter used to drive expression in vectors, potentially leading to transcription issues.

Signup and view all the flashcards

trc Promoter

A strong promoter combining elements of the trp and lac promoters for enhanced expression.

Signup and view all the flashcards

T7 Promoter

A strong promoter used in specific host cells for precise gene regulation.

Signup and view all the flashcards

MCS

Multi-cloning site in vectors that allows the insertion of foreign DNA.

Signup and view all the flashcards

β-galactosidase

An enzyme that converts X-gal into a blue product, used for colony screening.

Signup and view all the flashcards

Restriction Endonucleases

Enzymes that cut DNA at specified sequences, essential for cloning.

Signup and view all the flashcards

EcoRI

A specific restriction enzyme that cuts DNA at a defined recognition site.

Signup and view all the flashcards

DNA Fingerprinting

A technique using DNA variations for individual identification.

Signup and view all the flashcards

Electrophoresis

A method to separate molecules based on size and charge using an electric field.

Signup and view all the flashcards

Gels in Electrophoresis

A medium through which DNA fragments migrate based on size.

Signup and view all the flashcards

Control Ladder

A set of DNA fragments of known lengths used in electrophoresis for comparison.

Signup and view all the flashcards

Alkaline Phosphatase

An enzyme used to prevent vector self-ligation after cuts.

Signup and view all the flashcards

Cosmids

Hybrid vectors that combine plasmids and phage, capable of carrying large inserts.

Signup and view all the flashcards

M13 Phage

A single-stranded DNA phage used as a cloning vector.

Signup and view all the flashcards

pBluescript Vector

A cloning vector that allows RNA transcription via T3 and T7 promoters.

Signup and view all the flashcards

Lacking Insert Colony Color

Colony with an empty vector producing blue; a result of active lacZ'.

Signup and view all the flashcards

Transcription Regulation

The control of gene expression levels in response to cellular conditions.

Signup and view all the flashcards

Gene Library

A collection of cloned DNA fragments used for studying genes.

Signup and view all the flashcards

Recombination

The process of combining different DNA segments to form new genetic configurations.

Signup and view all the flashcards

Toxic Effects in Bacteria

Potential harmful impacts of eukaryotic proteins expressed in bacterial systems.

Signup and view all the flashcards

Host Cells

Cells that harbor recombinant DNA for expression or cloning.

Signup and view all the flashcards

RecA protein

A protein involved in DNA repair and recombination; absent in engineered yeast.

Signup and view all the flashcards

Eukaryotic Protein Expression

The process of producing proteins from eukaryotic genes within bacteria.

Signup and view all the flashcards

Gene Manipulation Techniques

Methods developed to introduce foreign DNA into host organisms.

Signup and view all the flashcards

Study Notes

  • IPTG bindt en inactureert de lac-operon repressor, zodat transcriptie van het lacZ-gen (of het insert) kan plaatsvinden. Er wordt ook nog een lacI-gen aanwezig gehouden om lekkage te voorkomen.
  • Artificiele chromosomen zoals YAC, BAC en PAC kunnen grote inserts bevatten en werden gebruikt bij het Humane Genoom Project. Ze repliceren zich slechts één keer per celcyclus.
  • YACs zijn ontwikkeld voor grote inserts (tot 1000kb) en bevatten gist telomeren (TEL), een centromeer (CEN), een autonomously replicating sequence (ARS), een markering-gen (zoals URA3) en een multicloning site (MCS).
  • YACs zijn instabiel en recombineren vaak met de chromosomen van de gistcel. Om dit te voorkomen, zijn BACs met kleinere inserts (tot 300kb) ontwikkeld. BACs zijn stabieler en gebaseerd op de F-factor van E.coli.
  • Expressievectoren zijn geschikt om genen effectief te brengen in het gastheercel. Ze moeten in het bezit zijn van de juiste promotoren die door bacteriële enzymen geherkend en gebonden kunnen worden.
  • Men kan pUC en pBS-vectoren gebruiken voor expressie omwille van de aanwezigheid van de lac-promotor. Specialisierte expressievectoren bevatten echter een sterke promotor en een goede ribosoom-bindingsplaats.
  • Expressie van eukaryote eiwitten in een bacterie moet gestureerd en gecontroleerd gebeuren vanwege toxische effecten voor bacteriën. Continu expressie kan ook de eigen groei en vermenigvuldiging onderdrukken.
  • Expressievectoren worden gebruikt bij de productie van recombinant eiwitten, zoals bij de productie van het geneesmiddel menselijk groeihormoon somatostatine.
  • Voor het behandelen van DNA moet men gebruikmaken van restriction endonucleases (RE) om de vector en de insert te knippen en gemakkelijk te verbinden. De RE snijdt complementaire sequenties van de sticky ends van EcoRI en BamHI af.
  • De expressie van somatostatine kan gereguleerd worden door het lac-promotor. Een probleem bij het gebruik van de lac-promotor is de lichte expressie van de repressor, zelfs in afwezigheid van IPTG. Om de expressie te blokkeren (of juist te stimuleren) wordt een vector gebruikt met een lacI-gen, dat het repressor codeert.
  • De trc-promotor is een sterke promotor die combinatie maakt van de sterke trp-promotor en de induceerbaarheid van de lac-promotor. Deze promotor bevat de -35 box van de trp-promotor en de -10 box van de lac-promotor, alsook de lac- operator.
  • De λ-faag promotor kan gebruikt worden in gastheercellen met temperatuurgevoelige λrepressorgen. Bij lage temperaturen (32°C) is de repressor actief en is er geen expressie. Bij hoge temperaturen (42°C) is de repressor inactief en is er wel expressie.
  • De T7-faag promotor wordt gebruikt in gastheercellen met een strikt gereguleerd gen. Deze promotor bevat een sterke T7-RNAP-promotor.

(Note: A few adjustments to the points were made for proper understanding and flow of the information in Dutch. The numbers in the Dutch text were not included in the original request. Also, the Dutch translation was done using Google Translate, so it might not be 100% accurate.)

  • De MCS (multi-cloning site) van het β-galactosidase zich middenin het open reading frame.

  • Insertie 15 onderbreekt het open reading frame en de transcriptie en translatie van het alternatieve ORF zorgt zelden voor een functioneel β-galactosidase.

  • β-galactosidase is een enzym dat het kleurloze X-gal kan omzetten in een stabiel blauw product.

  • Bacteriën met een lege vector (zonder insert) hebben een intact lacZ’ en zullen in staat zijn deze omzetting uit te voeren en te kunnen zien als blauwe kolonies op antibiotica en X-gal bevattende platen.

  • Kolonies met een vector+insert zullen wit zijn, kolonies met een vector zonder insert blauw.

  • Veelsneller en eenvoudiger dan de replica-plating techniek.

  • Men moet zijn werkzame materiaal van nucleases vrij houden, daarom in zuiver milieu werken.

  • Probleem: vectoren terugsluiten zonder insert, dat kan door behandeling met alkalisch fosfatase of het gebruik van 2 verschillende restrictie-enzymen omzeild worden.

  • Fagen (bacteriofaag) kunnen vectoren zijn: het infectieproces is efficiënter door verpakking van het recombinanter faag-DNA in virale capsides en injectie in de bacterie.

  • Grote inserts kunnen bevatten en van grotere genen bijeengehouden worden voor een genenbibliotheek.

  • Een voorbeeld van een veelgebruikte faag is de λ-faag, die met EcoRI geknipt kan worden om twee armen te verkrijgen.

  • M13-fagen kunnen ook gebruikt worden als basis voor een vector. Deze enkelstrengige DNA-fagen bevatten het β-galactosidase gen en een MCS.

  • Cosmiden: samengestelde vectoren (niet in natuur voorkomen)/combinatie van plasmiden en fagen. Heel grote inserts kunnen bevatten omdat bijna al het DNA van de faag verwijderd is, behalve de cos-sites.

  • pBluescript (pBS)-vector: combinatie van plasmiden en fagen. Bevat het lacZ’-gen met een MCS en een tweede ori-segment afkomstig van de ssDNA faag f1.

  • pBS-vectoren gebruikt bij de RNA-transcriptie door de aanwezigheid van promotors T3 en T7.

  • De MCS wordt geflankeerd door 2 verschillende promoters die faag-RNA-polymerase kunnen binden en de gewenste kolonies (+vector +insert) selecteren.

  • Door het aanwezigheid van het lacZ’ gen, kan men de gewenste kolonies selecteren door toevoeging van IPTG als inducer.

  • Ontwikkeling van recombinant DNA stelt problemen: cellen nemen vreemd DNA niet spontaan op.

  • Technieken ontwikkeld om het vreemde DNA binnen te smokkelen: plasmiden, gistcellen.

  • Bacteriën: prokaryoten, vreemd DNA vermomd in recombinant plasmide.

  • Gistcellen: eukaryoot, manipuleerd om te voorkomen dat zij restricte-enzymen heeft en RecA.

  • Restrictie-enzymen: bacteriële enzymen, DNA knippen, bescherming tegen vreemd DNA.

  • 5 types restrictie-enzymen: I, II, III, IV.

  • Type II restrictie-enzymen: herkennen en knippen op de restrictieplaats.

  • DNA-fragmenten van verschillende organismen: verbinden met behulp van restrictie-enzymen.

  • Sommige restrictie-enzymen leveren stompe uiteinden op.

  • DNA-fingerprinting: gebruik van minisatellieten of microsatellieten voor individuele identificatie.

  • Elektroforese: moleculen scheiden op basis van grootte en lading.

  • Gelelectroforese: DNA migreren naar positieve pool.

  • DNA negatief geladen, gel als medium.

  • Poriën in de gel: grootte bepaalt snelheid van migratie.

  • Hoge concentratie agarose: fijne poriën, hoge naauwkeurigheid.

  • Twee of meer stalen kunnen op één gel staan.

  • Controleladder: fragmenten van gekende lengten.

Studying That Suits You

Use AI to generate personalized quizzes and flashcards to suit your learning preferences.

Quiz Team

Related Documents

Recombinant DNA Technologie PDF

Description

Test je kennis over de techniek van Southern blotting waarmee specifieke DNA-fragmenten worden gedetecteerd en gescheiden. Kom erachter hoe lengte van gescheiden fragmenten kan worden bepaald en meer!

More Like This

Use Quizgecko on...
Browser
Open
Browser
Browser