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Questions and Answers
Qual é o objetivo principal do método de Southern-blotting?
O que ocorre quando o DNA é desnaturado?
Por que a renaturação é menos completa quando os indivíduos são filogeneticamente mais afastados?
Qual é o resultado da hibridação quando os indivíduos são filogeneticamente próximos?
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Como é possível comparar a proximidade genética dos vários organismos?
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Qual é o resultado da hibridação quando a complementaridade é maior?
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Study Notes
Hibridação por Desnaturação
- O método de Southern-blotting consiste em hibridar cadeias de DNA separadas por desnaturação e colocação num suporte sólido (filtro).
- A molécula marcada (com 32P) é colocada em contato com o filtro para verificar se hibrida com a cadeia que está no suporte sólido.
Aplicação da Desnaturação do DNA
- A desnaturação do DNA é usada em processos de hibridação para efeitos taroméricos e filogenéticos.
- Dupla-hélices de organismos diferentes são utilizadas.
Processo de Hibridação
- Uma das dupla-hélices é desnaturada pelo calor e colocada num filtro.
- O filtro é adicionado a uma solução com o DNA do segundo organismo também desnaturado.
- Se existem sequências complementares na solução, elas se ligam formando uma dupla-hélice.
- A compleição da dupla-hélice é mais estável quanto mais próximos filogeneticamente são os indivíduos.
Complementaridade e Estabilidade
- Quanto mais próximos filogeneticamente os indivíduos, maior a Tmáx, pois maior a complementaridade.
- A renaturação é menos completa e ocorre a Tmáx mais baixas quanto mais afastados filogeneticamente são os indivíduos.
- O híbrido formado a temperaturas superiores tem maior complementaridade do que um híbrido que só se consegue manter a temperaturas mais baixas.
Quantificação da Hibridação
- A quantificação da hibridação pode comparar a proximidade genética dos vários organismos.
- A leitura de absorvâncias é usada para quantificar a hibridação.
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Description
Southern blotting é um método que envolve a hibridação por desnaturação e a colocação de cadeias separadas num suporte sólido. Este método é usado em processos de hibridação para efeitos taroméricos e filogenéticos.
