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Questions and Answers
¿Cuál es el vector que posee dos genes de resistencia y LacZ?
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¿Cuál es el nombre del vector que posee el gen LacZ en el sitio de clonación múltiple?
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¿Cuál es el sistema de transcripción in vitro que posee tres promotores en tándem?
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¿Qué tipo de células se usan comúnmente para la síntesis de proteínas in vitro?
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¿Cuál es el nombre del sistema de transcripción in vitro que utiliza dos promotores de los fagos?
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¿Cuál es el propósito de utilizar un gen reportero en el análisis de secuencias reguladoras?
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¿Cuál es el nombre del sistema de transcripción in vitro que utiliza la RNA polimerasa del bacteriófago SP6?
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¿Qué es una aplicación de la expresión de secuencias en la que se generan proteínas de fusión para facilitar su purificación?
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¿Qué tipo de expresión génica se utiliza cuando se requiere una producción temporal de una proteína en una célula?
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¿Cuál es el nombre de la serie de vectores que contienen el sistema de transcripción in vitro SP6 y T7?
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Study Notes
Requerimientos de la Expresión Génica
- La expresión de secuencias génicas se utiliza para analizar señales reguladoras con genes reporteros
- Los fenotipos cambian las características físicas de la célula y les dan nuevas propiedades, como la proteína GFP o la enzima Beta-Gal
Aplicaciones de la Expresión de Secuencias
- Localización: se pueden marcar las proteínas para seguir su localización en la célula
- Producción (purificación): se puede producir RNA, proteínas o péptidos de interés industrial o científico
- Aislamiento: se generan proteínas de fusión que facilitan su purificación
- Análisis: se estudia el producto de expresión para comprender sus mecanismos
Expresión in vitro e in vivo
- Expresión in vitro: se utiliza extractos celulares crudos
- Expresión in vivo: se utiliza expresión transitoria (plásmido, multicopia) o expresión permanente (monocopia, inserción)
Transcripción in vitro
- Se sintetiza RNA mediante la incubación de un DNA clonado bajo un promotor y una RNA polimerasa capaz de reconocerlo
- Usos:
- Generación de sondas para northern o ISH
- Síntesis de RNA antisentido
- Producción de pre-mRNA para estudio de maduración
- Traducción in vitro o in vivo
Sistemas de Transcripción in vitro
- Sistema SP6: utiliza RNA polimerasa y promotor, y vectores como pSP64, pSP65 y pSP64PolyA
- Sistema SP6 y T7: utiliza dos promotores, y vectores como pGEM, pGEMZ, pGEM-Zf y pCRII-TOPO
- Sistema T3 y T7: utiliza dos promotores, y vectores como pBluescript y pTS1
- Sistema pTRIPLEscript: posee 3 promotores en tándem (SP6, T7 y T3) para la expresión
Traducción in vitro
- Se utiliza mRNA aislado de células o tejidos o sintetizado in vitro para la síntesis de proteínas in vitro
- Se utilizan extractos de células de diferentes tipos, como E. coli, germen de trigo, reticulocitos de conejo, levadura, Drosophila y células tumorales
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Description
Descubre los conceptos clave de la expresión génica, incluyendo señales reguladoras, análisis de secuencias reguladoras y aplicaciones en la producción de proteínas y péptidos.
