Química: Curva de Calibración y Ley de Lambert-Beer

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Questions and Answers

¿Cuál es el propósito de la Curva de Calibración en el método Lambert-Beer?

  • Medir la temperatura de la solución
  • Establecer la relación entre absorbancia y concentración (correct)
  • Determinar la longitud de onda adecuada
  • Evaluar el pH de la solución

El intercepto de la curva de calibración debe ser distinto de cero para que la ley de Lambert-Beer se cumpla.

False (B)

¿Qué relación se utiliza para determinar la concentración de una solución desconocida?

Relación de tres

La Absorbancia se mide a una longitud de onda de _______ nm en el ejemplo dado.

<p>570</p> Signup and view all the answers

Relaciona los siguientes términos con sus descripciones:

<p>Patrón = Solución de concentración conocida Curva de Calibración = Gráfico de absorbancia vs. concentración Absorbancia = Medida de la cantidad de luz absorbida Estándar = Referencia para la medición de otras soluciones</p> Signup and view all the answers

¿Cuál de las siguientes condiciones debe cumplir una sustancia para ser cuantificada mediante Absorciometría?

<p>Debe absorber luz en la región visible. (C)</p> Signup and view all the answers

La ley de Lambert-Beer indica que la absorbancia es proporcional a la concentración de la sustancia medida.

<p>True (A)</p> Signup and view all the answers

¿Qué método se utiliza para obtener la concentración de una solución problema?

<p>Usar la ley de Lambert-Beer.</p> Signup and view all the answers

Para cuantificar una sustancia, generalmente se escogen cromógenos cuyo coeficiente de __________ molar sea alto.

<p>absortividad</p> Signup and view all the answers

Empareja los términos con su definición:

<p>Absorbancia = Medida de la cantidad de luz absorbida por una solución Cromógeno = Sustancia que produce color en una reacción Coeficiente de extinción molar = Valor que indica cuánto se absorbe la luz en una solución Curva de calibración = Gráfica que relaciona absorbancia y concentración</p> Signup and view all the answers

¿Qué se debe hacer si una sustancia no tiene color para su cuantificación?

<p>Acoplar una reacción química que produzca un cromógeno. (A)</p> Signup and view all the answers

La curva de calibración siempre debe resultar en una línea recta si se sigue la ley de Lambert-Beer.

<p>True (A)</p> Signup and view all the answers

¿Qué variable se necesita conocer para calcular la concentración de un cromóforo puro?

<p>Coeficiente de extinción molar.</p> Signup and view all the answers

¿Cuál es una de las aplicaciones más comunes de la espectrofotometría UV-Visible?

<p>Determinación de la concentración de sustancias (D)</p> Signup and view all the answers

La ley de Lambert-Beer se aplica independientemente de la longitud de onda utilizada.

<p>False (B)</p> Signup and view all the answers

¿Qué se debe utilizar para analizar una muestra con espectrofotometría?

<p>Espectrofotómetro</p> Signup and view all the answers

En el análisis cuantitativo, se puede determinar la concentración de sustancias como __________ en muestras clínicas.

<p>proteínas</p> Signup and view all the answers

Relaciona los componentes del espectrofotómetro con su función:

<p>Fuente de radiación = Proporciona luz para el análisis Selector de longitud de onda = Elige la longitud de onda adecuada Recipiente de la muestra = Contiene la muestra a analizar Detector = Mide la absorbancia de la luz</p> Signup and view all the answers

¿Qué ocurre a elevadas concentraciones de soluto durante un análisis espectrofotométrico?

<p>Las interacciones moleculares impiden la absorción (B)</p> Signup and view all the answers

El análisis cualitativo en espectrofotometría se utiliza para medir la concentración exacta de un compuesto.

<p>False (B)</p> Signup and view all the answers

¿Qué permite la curva de calibrado en un análisis espectrofotométrico?

<p>Determinar coeficiente de extinción molar</p> Signup and view all the answers

¿Cuál es la concentración de calcio de la muestra problema, según la interpolación de la absorbancia?

<p>12.5 mg/dl (C)</p> Signup and view all the answers

La ecuación para calcular la absorbancia es y = 0.04x + 0.

<p>True (A)</p> Signup and view all the answers

¿Qué representa el 'b' en la ecuación de la recta y = bx + a?

<p>pendiente</p> Signup and view all the answers

El factor de calibración (FC) se calcula como FC = [X + ___].

<p>C</p> Signup and view all the answers

Relaciona las concentraciones de calcio con su respectiva absorbancia:

<p>0 mg/dl = 0,000 5 mg/dl = 0,200 10 mg/dl = 0,400 20 mg/dl = 0,800</p> Signup and view all the answers

Si 10 mg/dl corresponse a 0,4 en la absorbancia, ¿qué valor representa 0,5 en la regla de tres?

<p>12.5 mg/dl (D)</p> Signup and view all the answers

El intercepto 'a' de la ecuación de la recta es igual a 0.

<p>True (A)</p> Signup and view all the answers

¿Cuál es el promedio de las concentraciones de los estándares usado para calcular el FC?

<p>promedio de 0, 5, 10, 15 y 20 mg/dl</p> Signup and view all the answers

Flashcards

Espectrofotometría y Luz Monocromática

La relación de Lambert y Beer solo se puede aplicar cuando se trabaja con luz monocromática, es decir, con una sola longitud de onda. Si se usa luz con varias longitudes de onda, el coeficiente de extinción varía y afecta la absorbancia.

Espectrofotometría y Concentración

En altas concentraciones, las moléculas de la muestra se comportan de manera diferente, interfiriendo con la absorción de luz. Por lo tanto, es importante trabajar con concentraciones en las que la absorbancia sea proporcional a la concentración.

Componentes de un Espectrofotómetro

Un espectrofotómetro es un instrumento que mide la cantidad de luz que pasa a través de una muestra a diferentes longitudes de onda. Se compone de una fuente de luz, un monocromador, un recipiente para la muestra y un detector.

Curva de Calibración

La curva de calibración es una gráfica que relaciona la absorbancia de una serie de soluciones con concentraciones conocidas. Esta gráfica se utiliza para determinar las concentraciones de muestras desconocidas.

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Coeficiente de Extinción Molar

El coeficiente de extinción molar (ε) indica la capacidad de una sustancia para absorber luz a una longitud de onda específica.

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Ley de Lambert-Beer

La ley de Lambert-Beer relaciona la absorbancia de una solución con la concentración de la sustancia y la longitud de la trayectoria del haz de luz.

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Análisis Cualitativo con Espectrofotometría

La espectrofotometría se utiliza para determinar la presencia o ausencia de compuestos en una muestra, analizando su espectro de absorción.

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Patrones

Soluciones de concentración conocida utilizadas para construir una curva de calibración.

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Interpolación

El proceso de encontrar la concentración de una muestra problema utilizando la relación lineal entre su absorbancia y una curva de calibración.

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Relación de tres

Relación matemática que permite estimar la concentración desconocida de una muestra en base a su absorbancia y la absorbancia de un estándar conocido.

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Ley de Beer-Lambert

La ley de Beer-Lambert relaciona la absorbancia de una solución con la concentración del analito y la longitud de la trayectoria del haz de luz a través de la solución. Establece que la absorbancia es directamente proporcional a la concentración y a la longitud de la trayectoria. Se puede expresar como A = εbc, donde A es la absorbancia, ε es el coeficiente de extinción molar, b es la longitud de la trayectoria y c es la concentración.

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Coeficiente de extinción molar (ε)

El coeficiente de extinción molar (ε) es una constante que representa la cantidad de luz absorbida por una sustancia a una determinada longitud de onda. Es una medida de la capacidad de una sustancia para absorber la luz y, por lo tanto, puede usarse para determinar la concentración de una solución.

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Cromóforo

Un cromóforo es una sustancia que absorbe la luz visible y da color a la solución. La mayoría de las sustancias no son cromóforas en sí mismas y necesitan una reacción química para generar un cromóforo que se pueda medir por espectrofotometría.

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Absorciometría

La absorciometría es una técnica analítica que utiliza la absorción de la luz para determinar la concentración de una sustancia. Se basa en la ley de Beer-Lambert, que relaciona la absorbancia de la solución con la concentración del analito y la longitud de la trayectoria del haz de luz a través de la solución.

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Espectrofotometría

La espectrofotometría es una técnica que se utiliza para medir la cantidad de luz que es absorbida por una sustancia a diferentes longitudes de onda. Se utiliza para identificar y cuantificar sustancias, así como para determinar la concentración de una sustancia.

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Muestra Problema

Una muestra problema es una muestra de concentración desconocida que se analiza mediante una técnica analítica, como la espectrofotometría. Su concentración se determina comparando su absorbancia con la curva de calibración.

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Cuantificación de una Sustancia

Para cuantificar una sustancia en espectrofotometría, se requiere que la sustancia tenga color o que se pueda convertir en un cromóforo a través de una reacción química. La técnica utiliza la absorción de luz por la sustancia para determinar su concentración.

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Intercepto (a)

Es el punto en el que la gráfica corta el eje Y, cuando la concentración es cero.

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Pendiente (b)

La pendiente de la recta (b) indica la relación entre la absorbancia y la concentración.

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Concentración de muestra problema

Es la concentración de la muestra problema que se determina por la interpolación en la gráfica de la curva de calibración.

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Factor de calibración (FC)

Representa la relación entre la concentración de la muestra problema y su absorbancia.

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Error de la curva de calibrado (C)

C es a/b, y representa el error de la curva de calibración.

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Promedio de concentraciones (X)

Es el promedio de las concentraciones de los estándares utilizados para crear la curva de calibración.

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Promedio de absorbancias (Y)

Es el promedio de las absorbancias de los estándares utilizados para crear la curva de calibración.

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Study Notes

Guía Espectrofotometría I y II

  • Instrumentos analíticos: diferentes modelos de espectrofotómetros UV-VIS (ultravioleta-visible) se muestran en imágenes. Estos incluyen espectrofotómetros de haz simple, espectrofotómetros UV/Vis (haz simple o doble) e instrumentos analíticos de laboratorio.
  • Química clínica: la asignatura en la que se usa la espectrofotometría para analizar muestras biológicas.

Objetivos de la Espectrofotometría UV-VIS

  • Conocer los fundamentos básicos de la técnica y su uso en química clínica.
  • Saber operar un espectrofotómetro.
  • Ejecutar un espectro de absorción de soluciones coloreadas.
  • Realizar una curva de calibrado y determinar el coeficiente de extinción molar.
  • Determinar la concentración de una muestra problema utilizando la ley de Lambert-Beer.

Introducción a la Espectrofotometría

  • La espectrofotometría UV-visible es una técnica analítica que mide la cantidad de luz absorbida por una sustancia en solución.
  • La cantidad de luz absorbida depende linealmente de la concentración de la sustancia.
  • Se utiliza un espectrofotómetro para seleccionar la longitud de onda de la luz y medir la cantidad de luz absorbida.

Importancia de la Técnica

  • Es una técnica útil y accesible para determinar la concentración de biomoléculas en soluciones y muestras biológicas.
  • Se utiliza para identificar y cuantificar compuestos, así como caracterizarlos. Se usa mediante reacciones con reactivos específicos para obtener un producto coloreado detectable.

Fundamentos Teóricos

  • Absorción de luz: las moléculas absorben luz en el rango UV-VIS dependiendo de su estructura.
  • Radiación electromagnética: la luz es una forma de transmisión de energía a través del vacío u otro medio. Una onda tiene amplitud y longitud de onda (expresada en nanómetros (nm) o angstroms (Å)).
  • Espectro electromagnético: el espectro de la radiación electromagnética muestra diferentes longitudes de onda, incluyendo el rango visible.

Región UV y Visible

  • El rango UV cercano (180-380 nm) es de alta energía, causando daño a los ojos y quemaduras en la piel.
  • La región visible (400-780 nm) es la porción del espectro que percibimos como colores.
  • El espectro UV-visible es crítico para analizar compuestos orgánicos.

Aspectos Cualitativos de la Espectroscopía

  • Los espectros de absorción muestran la cantidad de luz absorbida por una sustancia en diferentes longitudes de onda.
  • Los picos de absorción son únicos para moléclas (clorofila, carotenoides).

Aspectos Cuantitativos: Ley de Lambert-Beer

  • La absorbancia (A) es proporcional a la concentración (C) de la sustancia, la longitud de la trayectoria (l) de la luz a través de la muestra y el coeficiente de extinción molar (ε).
  • Formula: A = εcl
  • Se necesita una curva de calibración para que los cálculos sean correctos.

Equipo Utilizado en Espectrofotometría UV-VIS

  • Fuentes de radiación (lamparas). Lampas de tungsteno para región visible y de hidrógeno o deuterio para la región UV.
  • Selectores de longitud de onda. (monocromador)
  • Recipientes para la muestra (cubetas)
  • Detectores miden la intensidad de la radiación para obtener la absorbancia de la muestra.

Aplicaciones de la Espectrofotometría UV-VIS

  • Análisis cualitativo: identificación de sustancias.
  • Análisis cuantitativo: determinación de concentraciones en diversos fluidos (suero, plasma, orina).
  • Métodos cuantitativos: curva de calibración.

Unidades de medida

  • Absorbancia (A): unidad adimensional.
  • Longitud (l): comúnmente en cm.
  • Concentración (C): varias unidades posibles (molar (M), milimolar (mM), g/100mL, etc.)
  • Coeficiente de extinción (ε): unidades dependen de la unidad de concentración.

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Beer-Lambert Law and Spectrophotometry
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