41 Questions
La electroforesis (EF) es una técnica:
en la que se utiliza una corriente eléctrica controlada con la finalidad de separar biomoléculas según su tamaño y carga eléctrica
La mayoría de las biomoléculas poseen una carga eléctrica, cuya magnitud depende de:
pH
No es medio de soporte para la electroforesis:
Vidrio
Con SDS, la movilidad electroforética de la proteína depende exclusivamente de:
Masa molecular
Un volumen de muestra aproximado en SDS-PAGE es:
5 uL
El stacking gel tiene como función:
Concentrar la muestra en una banda estrecha
El isoelectroenfoque se basa en que:
Al avanzar los componentes de la muestra a lo largo del gel se encuentran en entornos de pH diferente, y eventualmente alcanzan una región en la cual el pH es igual al punto isoeléctrico de la molécula muestra y, en consecuencia, ésta detiene su avance
Tampón TAE se emplea habitualmente en electroforesis de agarosa con ADN, qué composición presenta:
Tris 40 mM, ác. acético 19 mM, EDTA 1 mM, pH=7,5
El EDTA es de naturaleza:
anfótera
El bromuro de etidio es un agente:
intercalante en ADN
En la actualidad, el agente de visualización de ADN más empleado por su baja toxicidad es:
SYBR Green
El reactivo de visualización de ADN llamado GelRed™ se basa en:
Emite fluorescencia de color rojo
La electroforesis bidimensional es una técnica de alta resolución cuyo objetivo es:
La separación de mezclas de proteínas altamente complejas
En electroforesis de campo pulsante se emplean:
geles de agarosa al 1%
La movilidad electroforética μ es:
La velocidad por unidad de campo
La fórmula de la movilidad electroforética es:
v/E = μ
El movimiento de las moléculas en el seno de un E dentro de una matriz como un gel, esta gobernado también por dos fuerzas…:
La fricción con el solvente y, por otro lado, las moléculas tienen que moverse en forma aleatoria o movimiento browniano debido a que poseen energía cinética propia denominada difusión
La Agarosa es un:
Polisacárido, producto purificado de algas (composición similar al agar-agar). Se disuelve en caliente (aprox. 95 °C) y al enfriar solidifica formando un gel, de alta porosidad
Es un detergente aniónico empleado en EF que se une a las proteínas, desnaturalizándolas en una conformación extendida recubierta de moléculas del detergente …:
SDS
En EF de proteínas, para reducir los enlaces S-S se suele emplear comúnmente el:
β-mercaptoetanol
Indique un agente iniciador de la polimerización del gel de acrilamida:
Persulfato amónico en baja concentración
Indique un agente catalizador de la polimerización del gel de acrilamida:
TEMED
Para controlar el avance del frente de electroforesis, se añade a la muestra un colorante marcador (“tracking dye”), molécula cargada y de pequeño tamaño, el más habitual es:
Azul de bromofenol
El colorante anterior…:
Avanza más que cualquier componente de la muestra
Señale la correcta:
todas lo son
bis. La Electroforesis de campo pulsante se basa en:
Alterar periódicamente la orientación del campo eléctrico aplicado, activando alternativamente dos pares de electrodos. El frecuente cambio de dirección del campo eléctrico consigue que las moléculas se desplieguen y avancen a través de los poros en conformación extendida
Se puede obtener una estimación de la masa molecular (en kDa) de proteínas empleando SDS-PAGE, y de fragmentos de DNA (en pb) empleando electroforesis en agarosa …:
En ambos casos, en uno de los pocillos del gel se carga una mezcla de moléculas patrón de tamaño conocido, con el fin de poder trazar la curva de calibrado
Una de las aplicaciones de la EF es la elaboración de Mapas de restricción de DNA que se basa en…:
Consiste en tratarlo con distintas enzimas de restricción, analizar mediante electroforesis en gel de agarosa los fragmentos resultantes e intentar reconstruir la secuencia de la molécula original
El xileno-cianol …:
Es de color azul
En la electroforesis bidimensional …:
1º las proteínas son separadas en un gel con gradiente de pH en condiciones desnaturalizantes de acuerdo con su punto isoeléctrico
La electroforesis bidimensional:
Es una técnica de alta resolución
La electroforesis de campo pulsante se emplea para poder separar y visualizar:
Moléculas o fragmentos de DNA de longitud superior a 20-40 kb
El fundamento de la técnica anterior es:
Se emplean geles de agarosa al 1 %, y se altera periódicamente la orientación del campo eléctrico aplicado, activando alternativamente dos pares de electrodos
La electroforesis preparativa tiene como objetivo:
Obtener cantidades significativas de los componentes de la muestra por separado
Cuántas pb presenta aproximadamente la banda B en el electroferograma superior:
1960
De qué molécula hablamos en la cuestión anterior:
ADN
El campo eléctrico necesario para llevar a cabo una separación por electroforesis capilar es usualmente:
10-30 kV
No es una ventaja de la electroforesis capilar:
Empleo de colorantes no tóxicos en muy pequeñas cantidades
Qué caracteriza al flujo electroosmótico de la electroforesis capilar:
Su perfil de avance plano
La separación en electroforesis capilar se lleva a cabo en un tubo capilar de diámetro interno:
10-75 um
Algunos medios de soporte (“geles”, medios semisólidos o gelatinosos) están formados por polímeros que forman una malla, matriz o red tridimensional a través de la cual deben avanzar las moléculas de la muestra, que queda embebida en el medio de soporte electroforético. Como consecuencia, la fricción es notable y los factores de …………. y … ……… adquieren una alta relevancia en la separación:
forma y tamaño
Study Notes
Propiedades de las Biomoléculas
- La mayoría de las biomoléculas tienen una carga eléctrica, cuya magnitud depende de la proteína o molécula en cuestión.
Electroforesis (EF)
- La electroforesis es una técnica que separa moléculas según su carga eléctrica y tamaño.
- La movilidad electroforética de una proteína depende exclusivamente de su masa molecular cuando se utiliza SDS (detergente aniónico).
- Un volumen de muestra aproximado en SDS-PAGE es de 10-20 μl.
Funciones del Stacking Gel
- El stacking gel se encarga de concentrar las moléculas de la muestra en una zona pequeña antes de ingresan al gel de separación.
Isoelectroenfoque
- El isoelectroenfoque se basa en la capacidad de las moléculas de migrar hacia el polo de carga opuesta hasta alcanzar su punto isoeléctrico.
Tampón TAE
- El tampón TAE se utiliza habitualmente en electroforesis de agarosa con ADN y presenta una composición de 40 mM de tris, 20 mM de ácido acético y 1 mM de EDTA.
EDTA y Bromuro de Etidio
- El EDTA es un agente quelante que se utiliza como anticoagulante.
- El bromuro de etidio es un agente intercalante que se utiliza para la visualización de ADN.
Electroforesis Bidimensional
- La electroforesis bidimensional es una técnica de alta resolución que tiene como objetivo separar proteínas según su carga y masa molecular.
Electroforesis de Campo Pulsante
- La electroforesis de campo pulsante se utiliza para separar moléculas que tienen cargas eléctricas similares.
Movilidad Electroforética
- La movilidad electroforética (μ) se calcula mediante la fórmula μ = q/E * η, donde q es la carga eléctrica, E el campo eléctrico y η la viscosidad del medio.
Agarosa y SDS
- La agarosa es un polisacárido que se utiliza como medio de soporte en electroforesis.
- El SDS es un detergente aniónico que se utiliza para desnaturalizar proteínas y unirles para obtener una conformación extendida.
Agentes de Visualización
- El GelRed™ es un reactivo de visualización de ADN que se basa en la intercalación de moléculas entre las bases nitrogenadas del ADN.
- El xileno-cianol es un agente iniciador de la polimerización del gel de acrilamida.
Electroforesis Capilar
- La electroforesis capilar es una técnica que se utiliza para separar moléculas en un tubo capilar de diámetro interno.
- La separación en electroforesis capilar se lleva a cabo mediante la acción del campo eléctrico y la fricción.
Este cuestionario evalúa el conocimiento sobre el uso de la técnica de electroforesis para separar biomoléculas según su tamaño y carga eléctrica. Elige la opción que consideres correcta.
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