SIMULACRO TEST 7E Métodos de secuenciación de ADN
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Questions and Answers

En el método de Sanger, la incorporación de los ddNTPs es… :

  • Al azar (correct)
  • En orden
  • De menor a mayor
  • De mayor a menor
  • En la pirosecuenciación la reacción de detección viene dada por la liberación previa de …:

  • Pirofosfato o P2O7^4- (correct)
  • ddNTP
  • dNTP
  • Pirofosfato o ATP
  • Existe un método de secuenciación por semiconductores …:

  • No
  • en que se ancla la polimerasa al chip
  • está en estudio
  • que carece de un sistema óptico de detección, se trata de una detección electroquímica (correct)
  • En la secuenciación por reversión del terminador (CRT) …:

    <p>Se usan nucleótidos con el extremo 3' OH bloqueado</p> Signup and view all the answers

    Es importante recordar que la molécula de ADN está formada por tres componentes:

    <p>Un azúcar, una base nitrogenada y un grupo fosfato</p> Signup and view all the answers

    La característica más importante de la Taq polimerasa que la distingue de otras polimerasas es:

    <p>Actúa a elevadas temperaturas</p> Signup and view all the answers

    Los primers generalmente oscilan entre ............ pares de bases:

    <p>15-25</p> Signup and view all the answers

    Otra característica interesante Los primers es que …:

    <p>Deben tener un máximo del 55 % de cantidad de G-C</p> Signup and view all the answers

    Recordar que en la desnaturalización, las cadenas de ADN son calentadas a 95 ºC durante:

    <p>20-30 segundos</p> Signup and view all the answers

    En la etapa de hibridación la Tª correcta es:

    <p>50-60 ºC</p> Signup and view all the answers

    En la etapa de extensión ...:

    <p>la Tª es de 72 ºC y el sentido de amplificación o extensión de cadenas es 5'--&gt;3'</p> Signup and view all the answers

    En Secuenciación de lectura corta por síntesis Illumina ...:

    <p>Todas son correctas</p> Signup and view all the answers

    El ADN fragmentado se liga a secuencias adaptadoras y se adhiere a microperlas. Las perlas se incrustan en micropocillos en un semiconductor, se trata de ...:

    <p>Torrente Ion</p> Signup and view all the answers

    Señale la incorrecta acerca de Oxford Nanopore ...:

    <p>el ADN replicado se une a la abertura del poro por donde se alimenta una molécula de ADN polimerasa</p> Signup and view all the answers

    ....... se pueden usar para medir la abundancia de transcritos específicos de una manera de rendimiento bastante bajo. Aprovechando el concepto de transcripción inversa y acoplándolo a tecnologías de secuenciación de alto rendimiento, los transcritos pueden secuenciarse y mapearse a un genoma para representar la cantidad de transcritos representados por el número de lecturas:

    <p>b y c</p> Signup and view all the answers

    En el método de secuenciación enzimático de terminación de cadena o método didesoxi de Sanger, se requieren nucleótidos didesoxi que son:

    <p>Los nucleótidos didesoxi son nucleótidos modificados que han perdido el grupo hidroxilo de la posición 3' de la desoxirribosa</p> Signup and view all the answers

    Indique la correcta sobre el método didesoxi de Sanger:

    <p>la ADN polimerasa I comienza a añadir nucleótidos por el extremo 3' OH</p> Signup and view all the answers

    En primer lugar, deben realizarse en cuatro tubos diferentes, cuatro mezclas de reacción. Cada mezcla de reacción contiene los cuatro nucleótidos trifosfato (dATP, dCTP, de dTTP y dGTP), la enzima y …:

    <p>un cebador marcado radiactivamente y un nucleótido dideoxi</p> Signup and view all the answers

    Señale la correcta:

    <p>En cada mezcla de reacción se producen una serie de moléculas de ADN de nueva síntesis de diferente longitud que terminan todas en el mismo nucleótido y marcadas todas radiactivamente por el extremo 5' (todas contienen en el extremo 5' el cebador utilizado)</p> Signup and view all the answers

    En vista de la siguiente autorradiografía indique el fragmento de secuencia correcta de ADN obtenido en dirección 5’à 3’:

    <p>AAATCAATTCTG…</p> Signup and view all the answers

    Una modificación de la técnica anterior facilita un análisis más rápido y económico, además de su automatización:

    <p>secuenciación mediante colorantes acoplados al cebador&quot; (dye-primer sequencing)</p> Signup and view all the answers

    La mayor ventaja de este método es que la secuenciación se puede llevar a cabo en una sola reacción, en lugar de en cuatro reacciones como en el método del cebador marcado, cuál es:

    <p>Marcado de los terminadores de la cadena</p> Signup and view all the answers

    En el método de la cuestión anterior, el sistema de detección y secuenciación es:

    <p>Electroforesis capilar</p> Signup and view all the answers

    Indique la correcta sobre Secuenciación alelo-específica por bisulfito:

    <p>Permite realizar un mapeo de metilaciones alelo-específicas en las islas CpG, añadiendo la posibilidad de observar las metilaciones además de la secuencia nucleotídica</p> Signup and view all the answers

    Qué es la pirosecuenciación:

    <p>es un método de secuenciación de ADN en tiempo real basado en la liberación de los pirofosfatos (PPi) que tiene lugar en la reacción de polimerización del ADN a partir de sus dNTPs</p> Signup and view all the answers

    El método tSMS (True Single-Molecule Sequencing) consiste en:

    <p>Secuenciar a partir de una única molécula monocatenaria de ADN</p> Signup and view all the answers

    Una forma de incrementar la especificidad en la técnica de PCR es mediante:

    <p>Un aumento en la temperatura de alineamiento</p> Signup and view all the answers

    Entre las características técnicas más importantes de las polimerasas de alta fidelidad no se encuentran:

    <p>mayores producciones de producto con cantidades mínimas de enzimas (0,5-1 mg/50 µL de reacción)</p> Signup and view all the answers

    Las curvas de desnaturalización pueden utilizarse cuando ...:

    <p>Cuando se emplean agentes intercalantes y sondas de hibridación</p> Signup and view all the answers

    La síntesis de ADN termina cuando se añade ...:

    <p>Cuando se añade un ddNTP</p> Signup and view all the answers

    En medicina forense, se puede amplificar un ADN desde:

    <p>Todas ellas</p> Signup and view all the answers

    La amplificación con arranque en caliente ...:

    <p>Comenzar la reacción cuando y sólo cuando la temperatura de la mezcla es suficientemente alta, de forma que no se produzcan hibridaciones, y por consiguiente amplificaciones, inespecíficas</p> Signup and view all the answers

    Study Notes

    Técnicas de Secuenciación

    • En el método de Sanger, la incorporación de los ddNTPs es un proceso fundamental.
    • En la pirosecuenciación, la reacción de detección se produce mediante la liberación previa de pirofosfato.
    • Existe un método de secuenciación por semiconductores que utiliza la tecnología de Oxford Nanopore.

    Estructura del ADN

    • La molécula de ADN está formada por tres componentes: azúcares, fosfatos y bases nitrogenadas.
    • La Taq polimerasa se caracteriza por ser termoestable, lo que la distingue de otras polimerasas.

    PCR y Primers

    • Los primers generalmente oscilan entre 18-24 pares de bases.
    • Otra característica interesante de los primers es que son específicos para una región determinada del genoma.
    • En la desnaturalización, las cadenas de ADN se calientan a 95 ºC durante 30 segundos.
    • En la etapa de hibridación, la temperatura correcta es de 55-65 ºC.
    • En la etapa de extensión, la temperatura es de 72 ºC.

    Secuenciación de Lectura Corta

    • En la secuenciación de lectura corta por síntesis Illumina, el ADN se liga a secuencias adaptadoras y se adhiere a microperlas que se incrustan en micropocillos en un semiconductor.
    • El método de secuenciación enzimático de terminación de cadena o método didesoxi de Sanger requiere nucleótidos didesoxi.

    Otros Métodos de Secuenciación

    • La secuenciación alelo-específica por bisulfito se utiliza para medir la abundancia de transcritos específicos.
    • La pirosecuenciación es un método de secuenciación que utiliza la liberación previa de pirofosfato para detectar la incorporación de nucleótidos.
    • El método tSMS (True Single-Molecule Sequencing) consiste en la secuenciación de una sola molécula de ADN a la vez.
    • Una forma de incrementar la especificidad en la técnica de PCR es mediante la utilización de primers específicos.
    • En medicina forense, se puede amplificar un ADN desde una sola célula o incluso desde un fragmento de ADN degradado.

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    Preguntas sobre los métodos de secuenciación de ADN, incluyendo el método de Sanger y la pirosecuenciación. Pon a prueba tus conocimientos sobre cómo se incorporan los ddNTPs en el método de Sanger y la reacción de detección en la pirosecuenciación.

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