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Métodos de terminación de cadena en secuenciación de ADN

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Questions and Answers

¿Qué técnica se utiliza para separar los fragmentos marcados por tamaño con una resolución de un solo nucleótido?

Reacción de polimerización
Electroforesis en gel de poliacrilamida (correct)
Desnaturalización por calor
Autorradiografía en gel

¿Qué se observa en la autorradiografía del gel?

Cadenas de nueva síntesis en dirección 3’→5’
Tamaño de las bandas correspondientes a los ddNTP
Patrón de bandas oscuras de los fragmentos producidos (correct)
Separación de fragmentos por tamaño

¿Cómo se determina la secuencia completa de los fragmentos en las 4 calles del gel?

Leyendo la autorradiografía de arriba hacia abajo (correct)
Analizando la desnaturalización por calor
Midiendo el tiempo de migración de los fragmentos
Observando el patrón de bandas claras

¿Qué representa el último nucleótido (en posición 3’) del fragmento en cada calle del gel?

El ddNTP añadido en el tubo correspondiente (B) Signup and view all the answers

¿Cuál es la dirección de lectura directa de la secuencia en la autorradiografía?

5’→3’ (A) Signup and view all the answers

¿Qué permite determinar la lectura de abajo arriba en la autorradiografía?

La secuencia completa de los fragmentos (C) Signup and view all the answers

¿Cuál es la función de los didesoxinucleótidos trifosfato (ddNTP) en los métodos de terminación de cadena?

Actúan como terminadores de cadena y detienen la síntesis al carecer del grupo 3’-OH necesario para formar un nuevo enlace fosfodiéster. (C) Signup and view all the answers

¿Qué marca la especificidad de cada reacción en las reacciones de polimerización mencionadas?

La proporción de un ddNTP específico respecto a los ddNTP utilizados. (C) Signup and view all the answers

¿Qué detiene la elongación de la cadena durante la reacción de polimerización?

La incorporación aleatoria de un ddNTP. (B) Signup and view all the answers

¿Qué garantiza la síntesis de todos los fragmentos posibles en cada tubo de reacción durante el proceso descrito?

Las condiciones en que se realiza la polimerización. (A) Signup and view all the answers

¿Qué ocurre cuando un ddNTP se incorpora a una cadena de ADN en crecimiento durante las reacciones de polimerización?

Detiene la elongación de la cadena al carecer del grupo 3’-OH requerido para formar nuevos enlaces fosfodiéster. (C) Signup and view all the answers

¿Qué función tiene el cebador marcado en su extremo 5’ con 32P en el proceso descrito?

Guiar a la ADN polimerasa y servir como inicio para la síntesis de una nueva cadena. (A) Signup and view all the answers

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