Métodos de terminación de cadena en secuenciación de ADN
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Questions and Answers

¿Qué técnica se utiliza para separar los fragmentos marcados por tamaño con una resolución de un solo nucleótido?

  • Reacción de polimerización
  • Electroforesis en gel de poliacrilamida (correct)
  • Desnaturalización por calor
  • Autorradiografía en gel

    • ¿Qué se observa en la autorradiografía del gel?

  • Cadenas de nueva síntesis en dirección 3’→5’
  • Tamaño de las bandas correspondientes a los ddNTP
  • Patrón de bandas oscuras de los fragmentos producidos (correct)
  • Separación de fragmentos por tamaño

    • ¿Cómo se determina la secuencia completa de los fragmentos en las 4 calles del gel?

  • Leyendo la autorradiografía de arriba hacia abajo (correct)
  • Analizando la desnaturalización por calor
  • Midiendo el tiempo de migración de los fragmentos
  • Observando el patrón de bandas claras

    • ¿Qué representa el último nucleótido (en posición 3’) del fragmento en cada calle del gel?

    <p>El ddNTP añadido en el tubo correspondiente</p> Signup and view all the answers

    ¿Cuál es la dirección de lectura directa de la secuencia en la autorradiografía?

    <p>5’→3’</p> Signup and view all the answers

    ¿Qué permite determinar la lectura de abajo arriba en la autorradiografía?

    <p>La secuencia completa de los fragmentos</p> Signup and view all the answers

    ¿Cuál es la función de los didesoxinucleótidos trifosfato (ddNTP) en los métodos de terminación de cadena?

    <p>Actúan como terminadores de cadena y detienen la síntesis al carecer del grupo 3’-OH necesario para formar un nuevo enlace fosfodiéster.</p> Signup and view all the answers

    ¿Qué marca la especificidad de cada reacción en las reacciones de polimerización mencionadas?

    <p>La proporción de un ddNTP específico respecto a los ddNTP utilizados.</p> Signup and view all the answers

    ¿Qué detiene la elongación de la cadena durante la reacción de polimerización?

    <p>La incorporación aleatoria de un ddNTP.</p> Signup and view all the answers

    ¿Qué garantiza la síntesis de todos los fragmentos posibles en cada tubo de reacción durante el proceso descrito?

    <p>Las condiciones en que se realiza la polimerización.</p> Signup and view all the answers

    ¿Qué ocurre cuando un ddNTP se incorpora a una cadena de ADN en crecimiento durante las reacciones de polimerización?

    <p>Detiene la elongación de la cadena al carecer del grupo 3’-OH requerido para formar nuevos enlaces fosfodiéster.</p> Signup and view all the answers

    ¿Qué función tiene el cebador marcado en su extremo 5’ con 32P en el proceso descrito?

    <p>Guiar a la ADN polimerasa y servir como inicio para la síntesis de una nueva cadena.</p> Signup and view all the answers

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