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Questions and Answers
¿Cuál es el propósito del cambio de medio en el mantenimiento de cultivos?
¿Cuál es el propósito del cambio de medio en el mantenimiento de cultivos?
¿Cuánto tiempo se deja entre controles microscópicos de los cultivos?
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¿Qué se sustituye al realizar el cambio de medio en un cultivo en monocapa?
¿Qué se sustituye al realizar el cambio de medio en un cultivo en monocapa?
¿Por qué no se cambia todo el medio de cultivo al realizar el cambio de medio?
¿Por qué no se cambia todo el medio de cultivo al realizar el cambio de medio?
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¿Qué se observa con un microscopio invertido al controlar microscópicamente un cultivo?
¿Qué se observa con un microscopio invertido al controlar microscópicamente un cultivo?
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¿Cuál es el propósito del control periódico microscópico en el mantenimiento de cultivos?
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¿Cuál es el objetivo principal de realizar un subcultivo en cultivos en monocapa?
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¿Qué es lo que se calcula en los cultivos en suspensión para determinar el subcultivo?
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¿Cuál es el método más habitual para despegar las células de la superficie del recipiente en cultivos en monocapa?
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¿Por qué no es común mantener líneas celulares inmortales mediante subcultivos seriados?
¿Por qué no es común mantener líneas celulares inmortales mediante subcultivos seriados?
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¿Qué es lo que se añade al medio de cultivo para congelar las células?
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¿Cuál es la temperatura final para la congelación de las células?
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Study Notes
Mantenimiento del cultivo
- El mantenimiento del cultivo implica diferentes operaciones para controlar la viabilidad y crecimiento del cultivo.
- Las operaciones habituales son el control periódico, el cambio de medio y los subcultivos.
Control periódico
- Se realiza un control microscópico periódico del cultivo cada 1-3 días para observar la apariencia y el crecimiento de las células.
- El cultivo se retira del incubador y se examina con un microscopio invertido.
Cambio de medio
- El cambio de medio se realiza para renovar los nutrientes consumidos por las células y retirar los productos de desecho generados por el metabolismo celular.
- El cambio de medio se suele realizar cada 2-3 días o cuando se observe un cambio de color del medio por viraje del indicador de pH.
- Se cambian 2/3 del volumen del medio para mantener las sustancias beneficiosas secretadas por las células.
Subcultivos
- Tras 6-7 días, los cultivos en monocapa alcanzan la confluencia y los cultivos en suspensión alcanzan una densidad crítica, deteniendo el crecimiento.
- Se realizan subcultivos para reiniciar el crecimiento.
Cultivos en suspensión
- Se realiza un recuento de viables y se calcula el factor de dilución necesario para que la densidad celular sea adecuada.
- Otra opción es escalar el tamaño del recipiente de cultivo para cada subcultivo.
Cultivos en monocapa
- Es necesario despegar las células de la superficie del recipiente para poder hacer el subcultivo.
- Se puede despegar mecánicamente con un rascador o mediante tripsinización.
Conservación de células
- Las líneas celulares inmortales se pueden mantener mediante subcultivos seriados, pero consume recursos y tiempo.
- El método habitual de conservación de líneas celulares es la congelación.
- Se procede a congelar las células en un medio con un 10% de DMSO, a una densidad celular final de aproximadamente 106 células/ml.
- La suspensión se alicuota en criotubos y se congela progresivamente.
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Description
Aprende sobre las operaciones para el control de viabilidad y crecimiento de cultivos, incluyendo control periódico, cambio de medio y subcultivos.
