Mantenimiento del cultivo

Mantenimiento del cultivo

• El mantenimiento del cultivo implica diferentes operaciones para controlar la viabilidad y crecimiento del cultivo.
• Las operaciones habituales son el control periódico, el cambio de medio y los subcultivos.

Control periódico

• Se realiza un control microscópico periódico del cultivo cada 1-3 días para observar la apariencia y el crecimiento de las células.
• El cultivo se retira del incubador y se examina con un microscopio invertido.

Cambio de medio

• El cambio de medio se realiza para renovar los nutrientes consumidos por las células y retirar los productos de desecho generados por el metabolismo celular.
• El cambio de medio se suele realizar cada 2-3 días o cuando se observe un cambio de color del medio por viraje del indicador de pH.
• Se cambian 2/3 del volumen del medio para mantener las sustancias beneficiosas secretadas por las células.

Subcultivos

• Tras 6-7 días, los cultivos en monocapa alcanzan la confluencia y los cultivos en suspensión alcanzan una densidad crítica, deteniendo el crecimiento.
• Se realizan subcultivos para reiniciar el crecimiento.

Cultivos en suspensión

• Se realiza un recuento de viables y se calcula el factor de dilución necesario para que la densidad celular sea adecuada.
• Otra opción es escalar el tamaño del recipiente de cultivo para cada subcultivo.

Cultivos en monocapa

• Es necesario despegar las células de la superficie del recipiente para poder hacer el subcultivo.
• Se puede despegar mecánicamente con un rascador o mediante tripsinización.

Conservación de células

• Las líneas celulares inmortales se pueden mantener mediante subcultivos seriados, pero consume recursos y tiempo.
• El método habitual de conservación de líneas celulares es la congelación.
• Se procede a congelar las células en un medio con un 10% de DMSO, a una densidad celular final de aproximadamente 106 células/ml.
• La suspensión se alicuota en criotubos y se congela progresivamente.