Isotopie und Aminosäure Massen

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Questions and Answers

Was ist ein charakteristisches Merkmal monoklonaler Antikörper?

Sie stammen von verschiedenen B Zellen.

Sie haben eine begrenzte Anzahl von Epitopen.

Sie entstehen durch Hybridisierung von B Zellen mit Tumorzellen. (correct)

Sie werden aus rekombinanten DNA-Technologien hergestellt.

Welche Methode dient der Protein-detektion auf Zell- oder Gewebeoberflächen?

Immunfluoreszenz (correct)

Immun-histochemie

Western Blot

Gelelektrophorese

Was bezeichnet die Hybridisierung in der Monoklonalen Antikörperproduktion?

Die Fusion von zwei verschiedenen Antigenen.

Die Vereinigung einer B Zelle mit einer Tumorzelle. (correct)

Die Kombination von B Zellen und T Zellen.

Die Anwendung von synthetischen Peptiden zur Immunisierung.

Welches der folgenden Merkmale beschreibt den Prozess der Immunisierung mit synthetischen Peptiden?

Führt zu einer limitierte Anzahl von Epitopen. Signup and view all the answers

Welches Verfahren wird typischerweise nicht für die quantitative Bestimmung von Proteinen verwendet?

Qualitative Identifizierung Signup and view all the answers

Was ist ein Vorteil bei der Verwendung intakter Proteine?

Gute chromatographische Trennung Signup and view all the answers

Welche der folgenden Optionen beschreibt einen Nachteil der identifizierten intakten Proteine?

Hohe Proben Komplexität Signup and view all the answers

Was ist eine Voraussetzung für das Peptide Mass Fingerprinting?

Liste der gemessenen Massen Signup and view all the answers

Welcher Begriff beschreibt die Massenanalyse von Proteinen nach deren Verdau?

Peptide Mass Fingerprinting Signup and view all the answers

Welche der folgenden Informationen ist bei der Peptide Mass Fingerprinting Analyse nicht zwingend erforderlich?

Organismus Signup and view all the answers

Welcher Schritt erfolgt üblicherweise nach der Bestimmung der Massen der Peptide?

Datenbankabgleich der gemessenen Massen Signup and view all the answers

Was beschreibt den Peptide Mass Fingerprint (PMF)?

Eine Liste der Peptidmassen, die zur Identifikation verwendet werden Signup and view all the answers

Welches Programm wird häufig für die PMF Datenbank Suche verwendet?

Protein Prospector Signup and view all the answers

Was wird in der Tandem-Massenspektrometrie zur Proteinsequenzierung verwendet?

Zwei Massenanalysatoren Signup and view all the answers

Was ergibt die Masse von Glycin in einem Protein im Vergleich zu freiem Glycin?

57 Da Signup and view all the answers

Welche Information liefern Fragmentionen in der Tandem-Massenspektrometrie?

Sie liefern Strukturinformationen. Signup and view all the answers

Was ist ein Merkmal der Fragmentionenserie in der Tandem-Massenspektrometrie?

Es gibt oft fehlende Fragmentionen. Signup and view all the answers

Was sind b-Ionen und y-Ionen in der Tandem-Massenspektrometrie?

Fragmentationsergebnisse von Peptiden Signup and view all the answers

Was geschieht in der Kollisionszelle während der Tandem-Massenspektrometrie?

Ausgewählte Ionen werden fragmentiert. Signup and view all the answers

Welche Masse wird von der Aminosäuremasse in der Tandem-Massenspektrometrie abgezogen?

18 Da (für H2O) Signup and view all the answers

Was ist der Hauptvorteil der Tandem-Massenspektrometrie?

Erzeugung detaillierter Strukturinformationen Signup and view all the answers

Was beschreibt die Ionisierungseffizienz in der Massenspektrometrie?

Die Effizienz, mit der Moleküle ionisiert werden. Signup and view all the answers

Welches Verfahren wird zur relativen Quantifizierung zweier Zustände verwendet?

In Vivo Metabolische Markierung mit stabilen Isotopen. Signup and view all the answers

Was ist das Ziel der Verwendung eines markierten Referenzpeptids in der Massenspektrometrie?

Normalisierung der Quantifizierungsergebnisse. Signup and view all the answers

Wie beeinflusst die Markierung mit 15N und 13C die Analyse von Proteinen?

Sie ermöglicht die relative Quantifizierung von Peptiden. Signup and view all the answers

Welcher Unterschied besteht zwischen 12C-Lysin und 13C-Lysin?

Sie haben unterschiedliche Massen aufgrund der Neutronenanzahl. Signup and view all the answers

Was beschreibt die absolute Quantifizierung in der Massenspektrometrie?

Die genaue Bestimmung der Menge eines Analyten. Signup and view all the answers

Welcher Schritt erfolgt nach der Proteinerfassung in der quantitativen Analyse?

Verdau der Proteine in Peptide. Signup and view all the answers

Welche Rolle spielt Trypsin im Verfahren der massenspektrometrischen Analyse?

Es spaltet Proteine in kleinere Peptide. Signup and view all the answers

Was wird in der Massenspektrometrie zur Normalisierung verwendet?

Ein internes Referenzpeptid. Signup and view all the answers

Wie wird der Δm-Wert in der quantitativen Analytik verwendet?

Zur Bestimmung von Isotopenverhältnissen. Signup and view all the answers

Welche Masse hat das y1 Ion, wenn es sich um ein Lys-Peptid handelt?

147.113 Da Signup and view all the answers

Welche Modifikation erhöht die Peptidmasse um 80 Da?

Phosphorylierung Signup and view all the answers

Was ist das Hauptziel der Tandem Massenspektrometrie?

Identifizierung von Proteinen in komplexen Mischungen Signup and view all the answers

Was beschreibt ein diskontinuierliches Epitop?

Aminosäurereste, die im Protein weit voneinander entfernt sind Signup and view all the answers

Was kennzeichnet die Immunochemie?

Einsatz von Antikörpern als analytische Reagenzien Signup and view all the answers

Welche Voraussetzung ist notwendig für die Erkennung eines kontinuierlichen Epitops?

Das Epitop muss in der Sequenz aufeinanderfolgen. Signup and view all the answers

Welche der folgenden Aussagen über Antikörper ist falsch?

Antikörper können nur ein Epitop erkennen. Signup and view all the answers

Welches Verfahren wird zur Bestimmung der Sequenz von Peptiden verwendet?

Edman Abbau Signup and view all the answers

Welche Methode wird nicht zur quantitativen Proteinbestimmung verwendet?

Rasterkraftmikroskopie Signup and view all the answers

Was beeinflusst die Signalintensität eines Peptidions nicht direkt?

Molekulargewicht Signup and view all the answers

Was ist eine wichtige Voraussetzung für die differenzielle Peptidionisierung?

Kompletter enzymatischer Verdau Signup and view all the answers

Was ermöglicht die Verwendung von stabilen Isotopen in der quantitativen Analyse?

Ähnliche Ionisierungseffizienz zwischen markierten und unmarkierten Peptiden. Signup and view all the answers

Welches der folgenden Verfahren misst die Bandenfärbeintensität zur Quantifizierung?

Western Blot Signup and view all the answers

Was ist eine Herausforderung bei der quantitativen Bestimmung von Proteinen mittels Massenspektrometrie?

Nicht genaue zugehörige Ionisierungseffizienz Signup and view all the answers

Welche Aussage über die relative Quantifizierung ist korrekt?

Beruht auf dem Vergleich des Signals zwischen markierten und unmarkierten Peptiden. Signup and view all the answers

Was ist kein wichtiger Faktor bei der quantitativen Bestimmung von proteinhaltigen Proben?

Temperatur während der Lagerung Signup and view all the answers

Study Notes

Isotopie

Isotope sind Atome mit gleicher Protonenzahl, aber unterschiedlicher Neutronenzahl.
Die natürliche Isotopenhäufigkeit beeinflusst die Durchschnittsmasse.
Die monoisotopische Masse bezieht sich auf die häufigste Isotope.
Die Durchschnittsmasse ist die gewichtete mittlere Masse aller Isotope eines Elements, berücksichtigt dabei ihre natürliche Häufigkeit.

Komplexe Peptid Massenspektren

Monoisotopische Masse: Die Atommassen der am häufigsten vorkommenden Isotope (meist die leichteste Isotope).
Durchschnittsmasse: Die Atommassen aller Isotope in ihrer natürlichen Häufigkeit, nicht identisch.

Aminosäure Massen

Die Tabelle listet monoisotopische und Durchschnittsmassen verschiedener Aminosäuren auf.
Die Werte beziehen sich auf Isotope von Wasserstoff (1H), Kohlenstoff (12C), Stickstoff (14N) Sauerstoff (16O) und Schwefel (32S).

Isotopische Massen

Eine Tabelle mit Isotopen, Elementen, Massen und natürlichen Häufigkeiten ist enthalten.
Beispiele: 12C, 13C, 1H, 2H, 14N, 15N, 16O, 17O, 18O, 31P, 32S, 33S, 34S, 36S.

Protein Identifizierung

Die Identifizierung intakter Proteine mittels Massenspektrometrie ist schwierig.
Proteine werden in Peptide mittels enzymatischem Verdau gespaltet.

Bottom-Up vs. Top-Down Massenspektrometrie

Bottom-Up:
- Vorteile: gute chromatographische Trennung, einfache Datenakquisition, bekannter Fragmentierungsmechanismus, gute Software
- Nachteile: Verlust der Protein-Peptid-Beziehung, hohe Probenkomplexität
Top-Down:
- Vorteile: hohe Empfindlichkeit, Information über ganzes Protein erhalten
- Nachteile: schwierigere chromatographische Trennung, multiple Ladungszustände, komplexe Fragmentierung, Massenheterogenität durch posttranslationale Modifikationen (PTMs).

Peptide Mass Fingerprinting

Peptide Massen aus dem Proteindau sind ausreichend zur Proteinidentifikation.
Einfache Methoden wie Single Stage MS werden genutzt.

Tandem Massenspektrometrie (für Proteinsequenzierung)

Fragmentionen: Liefern Strukturinformationen.
Massenanalysatoren: Zwei Analysatoren, getrennt durch eine Gasfüllung (N2, Ar, Xe), eine ist Kollisionszelle.
y-Ionen: Sekundäre Ionen aus der Fragmentation, liefern Strukturinformation
b-Ionen: Sekundäre Ionen aus Fragmentation, liefern Strukturinformation
Glycin in Proteinen: Die Masse von Glycin in einem Protein beträgt 75-18 Da = 57 Da. (Beispiel einer grundlegenden Berechnung)

Aminosäuremassentafel: Tabelle zur Darstellung von Aminosäuren und ihrer Massen ohne Wasser (-18Da).
Bestimmung der Masse von Peptiden, die aus dem Proteindau gewonnen werden.
Nachweisen der Massen von Proteinen verschiedener Organismen.

Tandem Massenspektrometrie zur Proteinsequenzierung (Details)

Fragmentierung liefert Strukturinformation
Massenspektrometer (MS) analysieren die Fragmente
Sequenzierung geht von C-terminus nach N-terminus

Tandem Massenspektrometrie (zusätzliche Infos)

Fehlende Fragmentionen in einer Tandem Massen Spektrometrie-Messung können auf fehlende Proteine hindeuten.

Quantitative Proteinbestimmungen

Qualitative Proteinidentifizierung ist nicht ausreichend.
Qualitative Methoden: Immunochemie, Gelelektrophorese/Western Blot, Tandem MS.
Quantitative Methoden: verschiedene Methoden, z. B. Immunochemie, Gelelektrophorese/Western Blot, Massenspektrometrie..
Die quantitative Proteinbestimmung ist wichtig für die Untersuchung von Proteine Veränderungen.

Quantifizierung mittels Massenspektrometrie

Signalintensität eines Peptides hängt von der Konzentration, der Enzymeffizienz, der Ausbeute und Matrixeffekten ab.
Präzise Quantifizierung ist oft nicht möglich.
Die Isotopen verwenden (z. B. 13C) zur Quantifizierung dienen eine Möglichkeit.

Absolute Quantifizierung mit Stabilen Isotopen (Details)

Markierte Peptide sind als interne Referenz hilfreich.
Markierte und unmarkierte Peptide haben verschiedene Massen, ermöglichen die Trennung und Identifikation.
Verhältniss der Signale von markierten und unmarkierten Peptiden erlaubt die relative Quantifizierung.

Quantifizierung mit Stabilen Isotopen (In Vivo)

Anwendung zur relativen Quantifizierung von zwei Zuständen z.B. Zell Extrakt, Proteine, Peptide, Massen Spektrometrie.
Markierung der Proteinbestandteile mit Isotopen erlaubt die Unterscheidung und Messung.

Radioimmunoassay (RIA)

Radioaktive Methode zur Proteinquantifizierung.
Verwendung spezifischer Antikörper für die Identifikation.

Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA)

Methode zur Messung von Proteinen.
Verwendung von Enzym-markierten Antikörpern.

Western Blot (Details)

Hoch-sensitive Methode zum Nachweisen von Proteinen.
Einfache Analyse verschiedener Proteine in komplexen Proben.

Immunfluoreszenz

Direkte und indirekte Methoden zur Proteindetektion auf Zell- und Gewebeoberflächen. (z.B. Färbung von Zellen, Gewebe)

Immun-Histochemie

Methode zur Proteindetektion in Zellen und Geweben.
Fixierung der Zellen und dann die Protein-Detektion mit spezifischen Antikörper.

Massenspektrometrie zur Proteinbestimmung

Proteinprospector

Software zur Datenbank-Suche von Proteinen in massenspektrometrischen Daten.

Datenbank-Suche

Datenbanken mit Proteindaten werden in Massenspektrometrische Datenbank gesucht.

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Description

Lernen Sie die Grundlagen der Isotopie kennen, einschließlich der monoisotopischen und Durchschnittsmassen von Isotopen. Der Quiz behandelt auch die spezifischen Massen von Aminosäuren und deren Isotopen. Tauchen Sie ein in die faszinierende Welt der chemischen Elemente und deren Eigenschaften.