Inducción de proteínas recombinantes

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Questions and Answers

Empareja los siguientes elementos con su descripción correcta en el contexto de la expresión de proteínas recombinantes.

pColdIV = Vector con promotor cspA para la expresión dependiente de choque térmico IPTG = Inductor de la expresión de genes bajo el control del promotor lac pET21a = Vector que utiliza el promotor T7 para la expresión de genes cspA = Proteína de choque frío que permite la expresión de genes en bajas temperaturas

Asocia cada plásmido con su proteína recombinante correspondiente:

pColdIV-API3 = API3 pET21a-LdTR = LdTR pET28a = N/A pGEX = N/A

Indica cuál de los siguientes factores influye en la solubilidad de la proteína recombinante:

Concentración de IPTG = Sí Temperatura de incubación = Sí Velocidad de agitación = Sí Tipo de medio de cultivo = No

Relaciona cada fase del proceso con su descripción correcta:

<p>Pre-cultivo = Fase inicial de crecimiento bacteriano Cultivo principal = Fase donde se induce la expresión de la proteína recombinante Shock térmico = Reducción rápida de la temperatura para inducir la expresión de API3 Densidad celular = Medida de la cantidad de biomasa en un cultivo</p> Signup and view all the answers

Empareja los siguientes términos con su definición correspondiente:

<p>5´UTR = Región no traducida del extremo 5' del ARNm Promotor = Secuencia de ADN que inicia la transcripción de un gen Operador = Secuencia de ADN que regula la transcripción de un gen Sitios de restricción = Secuencias específicas de ADN que son reconocidas por enzimas de restricción</p> Signup and view all the answers

Flashcards

Inducción de la expresión de una proteína recombinante

Un método para aumentar la producción de una proteína específica en una célula.

Cultivo celular

El crecimiento de un cultivo celular hasta alcanzar una concentración deseada de células.

Plásmido de expresión

Un tipo de plásmido que contiene el gen de la proteína de interés y se utiliza para transformar células.

IPTG (Isopropil β-D-tiogalactopiranósido)

Una sustancia química que induce la expresión de genes en células.

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Shock térmico

El proceso de disminuir la temperatura del cultivo para aumentar la expresión de una proteína.

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Study Notes

Inducción de la expresión de proteínas recombinantes

Para inducir la expresión de una proteína, se debe cultivar células hasta alcanzar una densidad celular deseada (0.4 a 0.8 absorbancia a 600nm).
Se utilizan cultivos pre-cultivos con plásmidos como pColdIV-API3 y pET21a-LdTR.
Para inducir la expresión de API3, con el plásmido pColdIV, se utiliza un "shock" térmico. Este plásmido contiene el promotor cspA, región 5'UTR y sitio de terminación 3’.
La inducción se realiza controlando la temperatura y añadiendo IPTG (para inducir LdTR) para expresar la proteína de interés.
La región de 5'UTR del gen cspA y el sitio de terminación 3´del mismo gen permiten la expresión y estabilización del gen en el plásmido durante la reducción de la temperatura del cultivo.
El vector contiene el operador lac y una copia del gen lacl para controlar la expresión indeseada de la proteína.
La expresión de API3 necesita disminuir la temperatura rápidamente (15°C) y añadir IPTG.
La expresión de LdTR se induce con IPTG.
Parámetros como la concentración de IPTG, el punto de la curva de crecimiento y la velocidad de agitación pueden influir en la solubilidad de la proteína.

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Description

Este cuestionario explora los métodos de inducción para la expresión de proteínas recombinantes, centrándose en el uso de plásmidos como pColdIV y pET21a. Aprenderás sobre la importancia del control de temperatura y la adición de IPTG en el proceso. También se discuten elementos clave como la región 5'UTR y el sitio de terminación 3'.