Hemagglutination Assay (HA)

Questions and Answers

HA unit หมายถึงอะไรในกระบวนการ Hemagglutination Assay?

จำนวนเม็ดเลือดแดงที่ติดเชื้อ

ความเข้มข้นของไวรัสในตัวอย่าง (correct)

ความเข้มข้นของเม็ดเลือดแดง

ระดับการจับตัวกันของเม็ดเลือดแดง

เมื่อไม่พบไวรัส เม็ดเลือดแดงจะมีลักษณะอย่างไร?

กระจายทั่วหลุม microtiter plate

ตกลงไปอยู่ที่ก้นจานที่ทึบ (correct)

เกาะกลุ่มกันและเกิดตะกอน

ตกตะกอนที่ก้นจานเป็นรูปแบบ lattice

การเกิดสีชมพูในการทดสอบ Hemagglutination หมายถึงอะไร?

การเกิดการติดเชื้อในเม็ดเลือดแดง

การลดลงของเม็ดเลือดแดง

การจับตัวกันของเม็ดเลือดแดง (correct)

การขาดไวรัสในตัวอย่าง

ทำไมการใช้งานเม็ดเลือดแดงจากหมู่เลือด Group O จึงสำคัญใน Hemagglutination Assay?

เพราะ Group O ไม่มีแอนติบอดีที่ทำให้เกิดการตอบสนอง Signup and view all the answers

การเกิด lattice ใน Hemagglutination Assay หมายถึงอะไร?

การเกาะกลุ่มของเชื้อไวรัส Signup and view all the answers

โมเลกุลใดที่ไวรัสไข้หวัดใหญ่จับกับเซลล์เพื่อทำให้เกิดการติดเชื้อ?

α2,6-linked sialic acid Signup and view all the answers

ในขั้นตอนการเจือจาง 2 เท่า (2-fold dilution) ส่วนผสมในหลุม A2 จะมีความเข้มข้นเทียบกับหลุม A1 อย่างไร?

ครึ่งหนึ่ง Signup and view all the answers

ในกลุ่มไวรัสที่ใช้วิธีการ HA ได้อย่างแม่นยำ ไวรัสใดที่ไม่ได้อยู่ในกลุ่มนี้?

Flaviviridae Signup and view all the answers

ใช้การทดลองใดในการเพาะเชื้อไวรัสไข้หวัดใหญ่ในไข่ไก่?

ฉีดเชื้อเข้าไปในโพรงอลานโตอิค Signup and view all the answers

1 HA Unit หมายถึงอะไรในบริบทของการทดสอบ HA?

การเจือจางที่ต่ำที่สุดที่ยังเห็นการเกาะกลุ่มของเม็ดเลือดแดงได้ Signup and view all the answers

Study Notes

Hemagglutination Assay (HA)

ทดสอบเพื่อหาความเข้มข้นของไวรัสในตัวอย่าง โดยแสดงเป็น HA unit
ไวรัสบางชนิดทำให้เม็ดเลือดแดง (RBC) เกาะกลุ่ม เกิดการเกาะกลุ่มกันเรียกว่า Agglutination

วิธีการทำงานของ HA

ใช้สารละลายไวรัสที่มีความเข้มข้นต่างกันผสมกับเม็ดเลือดแดง 1% ใน NSS 0.85%
หากไม่มีไวรัส เม็ดเลือดแดงจะตกไปอยู่ที่ก้นจาน เรียกว่า Button (HA negative)
หากมีไวรัส เม็ดเลือดแดงจะกระจายและเกิดการตกตะกอนสีชมพู เรียกว่า lattice (HA positive)

เงื่อนไขพิเศษ

RBC สามารถนจากคนหรือสัตว์ได้ แต่ต้องเป็นหมู่เลือด Group O เพื่อหลีกเลี่ยงการรบกวนจาก Antigen A, B

ไวรัสที่สามารถใช้วิธี HA ได้

Orthomyxoviridae (เช่น Influenza A virus)
Paramyxoviridae
ไวรัส Flaviviridae และ Coronaviridae ใช้ HA แต่ไม่แม่นยำ

ไข้หวัดใหญ่ในมนุษย์ (Human Influenza)

เป็นไวรัสที่ทำให้เกิดโรคหวัดในคน
ไวรัสจับกับ α2,6-linked sialic acid บนเซลล์ พบในโพรงแอมเนียติก และโพรงอลานโตอิคของไข่ไก่

การเพาะเชื้อ

ฉีดเชื้อเข้าไปในไข่ไก่ที่มีความสามารถในการเพาะเชื้อ
ต้องฉีดเข้าไปใน Allantoic cavity
บ่มไวรัสในไข่ 48 ชั่วโมงที่อุณหภูมิ 37°C
เก็บสารละลาย Allantoic Fluid ออกมา 10 มิลลิลิตรต่อไข่

การทดลอง HA

การเจือจางไวรัสแบบ 2 เท่า เริ่มจากเติม NSS ปริมาณ 50 µL ในหลุม A1-A12
ใช้ Autopipette เจือจางและผสมวัตถุทุกหลุมให้เข้ากัน
ตรวจสอบการเกาะกลุ่มของเม็ดเลือดแดงที่ก้นหลุมหลังจาก 1 ชั่วโมง

การเจือจาง (Serial Dilution)

เทคนิคลดความเข้มข้นของสารละลายต่อเนื่องโดยการนาสารจากหลอดหนึ่งไปเจือจางในหลอดถัดไป
การผสมในแต่ละหลอดเพื่อให้เกิดการกระจายที่สม่ำเสมอ
การเจือจางแบบ 2 เท่าจะลดความเข้มข้นในอัตรา 1:2, 1:4, 1:8 ฯลฯ

สรุปผลการทดสอบ HA

1 HA Unit คือการเจือจางที่ต่ำที่สุดที่ยังสามารถสังเกตเห็นการเกาะกลุ่มของเม็ดเลือดแดงได้
การเจือจางที่ 1:8 เป็นจุดสุดท้ายที่เห็นการเกาะกลุ่ม
Titer คือค่าผกผันของ 1 HA Unit ดังนั้นค่า Titer จะเท่ากับ 8 ในกรณีนี้

Studying That Suits You

Use AI to generate personalized quizzes and flashcards to suit your learning preferences.

Description

การทดสอบ Hemagglutination Assay (HA) ใช้เพื่อตรวจหาความเข้มข้นของไวรัสในตัวอย่าง โดยแสดงค่าเป็น HA unit. ไวรัสบางชนิดสามารถทำให้เม็ดเลือดแดงเกาะกลุ่มกันได้ การทดลองจะเริ่มจากการผสมสารละลายไวรัสในความเข้มข้นที่แตกต่างกันกับเม็ดเลือดแดงใน NSS.