Génétique moléculaire - Extraction d'ADN et ARN

Génétique moléculaire

• ADN et ARN : ADN plus stable que l'ARN mais les deux sont sensibles à la digestion par les nucléases.

• Extraction d'ADN : Le plus courant est d'extraire l'ADN du sang total.

  • Chauffage à 95°C pour séparer les brins d'ADN.
  • Refroidissement rapide pour empêcher la reformation des liaisons.
  • On utilise un anticoagulant comme EDTA dans le prélèvement sanguin.
  • Les globules rouges (GR) sont éliminés car ils n'ont pas de noyau.
  • Utilisation d'une solution hypotonique pour lyser les GR.
  • La centrifugation permet de séparer les leucocytes (globules blancs).
  • L'éthanol et le phénol-chloroforme éliminent les protéines.

• ADN ancien : L'ADN ancien peut être utilisé pour des études génétiques, car il peut être conservé pendant de longues durées à basse température.

• Extraction d'ARN : L'ARN est plus fragile que l'ADN, nécessitant des techniques spécifiques et des précautions pour éviter sa dégradation. 

  • L'ARN polyA+ est une catégorie spécifique d'ARN messager avec une queue poly-A, qui permet son isolement.
  • Représente 1% de l'ARN total.

• PCR : La réaction en chaîne par polymérase (PCR) est une technique pour amplifier une petite quantité d'ADN.

  • Découpage en étapes : dénaturation, hybridation, élongation.
  • Utilisations très fréquentes.
  • Techniques multiples pour visualisation de l'ADN amplificé.
  • Sensibilité importante aux contaminations.

Achondroplasie

• Maladie rare : Chondrodysplasie la plus fréquente. 
  • L'augmentation du nombre de cas est dûe aux améliorations du dépistage.
  • Signes principaux : Fémurs courts.
  • Facteurs de risques : petites tailles, macrocéphalie, front haut, ensellure nasale marquée.
• Transmission dominante autosomique.
• Gen : Transmission fréquente en cas de mutation spontané.
• Diagnostic : Examen des fémurs et biométries fœtales.
• Mutation dans le gène FGFR3 (récepteur du facteur de croissance des fibroblastes 3) au codon 380. -Remplacement de la glycine par une arginine (substitution de la Guanine par une adénine ou cytosine).
• Prélèvement amniotique pour l'extraction de l'ADN fœtal.
• Amplification par PCR.
• Vérification de la taille des amplicons par électrophorèse sur gel d'agarose.
• Vérification de la mutation après une digestion enzymatique et séquençage.

Ce quiz explore les concepts clés de la génétique moléculaire, en mettant l'accent sur l'extraction et la stabilité de l'ADN par rapport à l'ARN. Il aborde les méthodes de séparation des brins d'ADN et les techniques spécifiques nécessaires à la manipulation de l'ARN. Testez vos connaissances sur ces processus fondamentaux pour la biologie moléculaire.