Genética Molecular: Transformación Bacteriana con Plásmido pARA-R

Study Notes

Transformación de Bacterias con Plásmido pARA-R

El plásmido pARA-R contiene el gen de interés, la proteína fluorescente roja (rfp) y un gen de resistencia a la ampicilina (ampR).
El gén rfp se expresa utilizando la propia maquinaria de la bacteria después de la transformación.
El plásmido pARA-R también contiene un origen de replicación (ori) y el promotor pBAD y el gen araC, que regulan la expresión del gen.

Competencia Bacteriana

Algunas bacterias son naturalmente competentes, lo que significa que pueden incorporar ADN de su entorno.
No todas las bacterias son naturalmente competentes, y la transformación natural puede ser ineficiente.

Técnicas de Transformación

El tratamiento químico y técnicas como el choque térmico o la electroporación se utilizan para mejorar la captación de plásmidos por parte de una variedad de bacterias.
La adición de cloruro de calcio neutraliza las cargas negativas de las membranas celulares y el ADN, facilitando la transformación.

Choque Térmico y Electroporación

El choque térmico se logra incubando bacterias a 42 ℃, creando agujeros en la membrana que permiten la entrada del ADN.
La electroporación utiliza la corriente eléctrica para lograr un resultado similar.

Precauciones y Medios de Crecimiento

Es importante trabajar en un ambiente estéril y utiliser técnicas asépticas para prevenir la contaminación.
Los tubos y puntas de pipeta usados deben eliminarse en un contenedor de residuos de riesgo biológico.
La solución de caldo de Lisogenia (LB) es un medio de crecimiento que proporciona macromoléculas esenciales para el crecimiento bacteriano.
La solución pARA-R contiene plásmidos pARA-R recombinantes que contienen el gen de interés y el gen de resistencia a la ampicilina.
La solución de células competentes (CC) contiene células que se han tratado con CaCl₂ y se almacenan en el congelador durante la noche.

Description

Aprende sobre la transformación bacteriana con el plásmido pARA-R recombinante, expresión del gen de interés rfp y selección de bacterias transformadas con ampicilina. Conoce la función del origen de replicación.