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Ecco gli appunti di studio dettagliati:

• Le note di studio sono in italiano

Medicina di Laboratorio

• Disciplina che studia "in vitro" campioni biologici umani (e talvolta "in vivo" tramite spettroscopia a risonanza magnetica nucleare).
• Analizza parametri fisico-chimici per informazioni su processi fisiologici o patologici a vari livelli strutturali.
• La biochimica clinica si concentra su fluidi corporei, principalmente plasma, urina, liquido pleurico/peritoneale e fluido cerebrospinale.
• Esami di laboratorio analizzano liquidi e tessuti biologici.
• Campioni = liquidi/tessuti prelevati; Analiti = costituenti dosati in laboratorio su richiesta clinica.
• Esempi di campioni biologici: sangue, urine, feci, liquido sinoviale, liquor cefalorachidiano, liquido amniotico, latte, liquidi biologici speciali (ascitico, pleurico, bronchiale, intestinale, peritoneale), lacrime, sudore, succo gastrico/duodenale, saliva, liquido seminale, villi coriali e biopsie.
• Ultime due (villi coriali e biopsie) sono campioni solidi che necessitano di trattamenti diversi per l'analisi (inclusione in paraffina, taglio, colorazione).

Branche della Medicina di Laboratorio con Fini Diagnostici

• Ematologia e Immunoematologia: lo studio di cellule del sangue e del sistema immunitario, organi ematopoietici e patologie correlate.
• Microbiologia/Virologia Clinica: lo studio di patogeni batterici/virali e patologie associate.
• Biologia Molecolare/Genetica di Laboratorio: lo studio di eventi molecolari e acidi nucleici, proteine mutate che causano patologie umane, specialmente tumorali.
• Biochimica Clinica: l'analisi di fluidi corporei, principalmente plasma e altri fluidi organici con valenza clinica variabile.
• La biochimica clinica studia gli effetti di malattie o farmaci sui processi biochimici di organi, tessuti e fluidi biologici, a differenza della biochimica generale.

Finalità della Medicina di Laboratorio

• Diagnosi: conferma/esclude sospetti diagnostici del clinico, o formulazione di una diagnosi.
• Prognosi: previsione del decorso di una patologia e monitoraggio della terapia.
• Screening: raccolta di informazioni epidemiologiche/statistiche e prevenzione comunitaria.

Utilità della Biochimica Clinica per la Diagnosi

• Diagnosi di malattie basate sulla biochimica (errori del metabolismo).
• Classificazione e caratterizzazione fisiopatologica di malattie (es. diabete).
• Fornire dati per analisi statistiche/epidemiologiche.
• Controllo della posologia di farmaci.
• Monitoraggio di farmaci.
• Valutazione del rischio lavorativo/tossicologico.

Total Testing Process e Fasi di Analisi

• George Lundberg ha introdotto il concetto di Total Testing Process (Brain-to-Brain Loop): dal punto di vista medico clinico durante la formazione di informazione clinica.
• Fase analitica: rappresenta solo una parte del ciclo.
• Fase Pre-analitica: comprende tutti gli eventi/condizioni che influenzano le misure prima dell'analisi del campione.
• Gli avanzamenti tecnici non riducono la variabilità/errori nella fase analitica; la fase pre/post-analitica accumula la maggior parte degli errori (80% del totale), con il 60% nella fase pre-analitica.
• La fase pre/post-analitica è divisa in fasi pre-pre, pre, post e post-post analitica.
• Fase Pre-Pre-Analitica: avviene prima dell'analisi, al di fuori del controllo del laboratorio (richiesta del test, identificazione del paziente, prelievo e trasporto del campione). Tipico elementi di questi fase.
• Fase Pre-Analitica: avviene prima dell'analisi, sotto la responsabilità diretta del laboratorio (trattamento del campione, etichettatura secondaria, centrifugazione, etc.).

Variabilità della Misurazione Analitica

• Accuratezza e riproducibilità dei dati sono fondamentali per le misurazioni cliniche, ma si scontrano con la variabilità intrinseca dei campioni biologici.
• Variabilità Intrinseca/Pre-analitica: legata al paziente e/o modalità di prelievo/conservazione.
• Variabilità Analitica: legata al metodo di analisi.
• Variabilità Pre-analitica legata al paziente ha due tipologie:
  • Variabilità Biologica Inter-individuale: dovuta a differenze intrinseche tra individui (età, sesso, razza, massa corporea).
  • Variabilità Intra-individuale: dovuta a stili di vita, farmaci e altri fattori che variano i valori nel tempo (assunzione di cibo, tabagismo, farmaci, attività fisica, postura, ritmi biologici).
• La Variabilità Inter-Inter possono intendersi un tutto nel percorso.
• La variabilità intrinseca NON può essere considerata un errore pre-analitico.
• Errori = difetti nell'iter diagnostico che influenzano la qualità del servizio.

Errori in Medicina di Laboratorio

• La maggior parte degli errori si concentra nella fase preanalitica (60-70%), specialmente nella raccolta dei campioni.
• Errori comuni più frequenti: errori identificativi, campioni non idonei (tipo/quantità), campioni coagulati, campioni emolisati/lipidemici/itterici.
• Il Brain-to-Brain Loop:
  • Inappropriatezza della richiesta: esame non corretto per la patologia sospettata o mancata richiesta che comporta ritardo/ mancato riconoscimento e danno economico.
  • Misure: profili diagnostici per patologia, esami integrati con livelli diagnostici successivi, sistemi informatici per la richiesta di esami strutturati.
• Esempio di celiachia: prescrizione IgA totali e TG2, possibili situazioni, e azioni in base ai risultati.
• Identificazione del paziente o del campione: forse è l'errore più pericoloso (confusione pazienti o documenti, scambio provette, soprattutto inserendo i risultati per i file su un altro paziente).
  • Prevenzione: standardizzazione, doppio codice di identificazione.
• Non conformità nella richiesta degli esami:
  • Mancanze di informazioni anagrafiche o relative al prelievo (diagnosi, terapia, data e ora del prelievo, tipo di indagine) che possono influire sui valori.
  • Etichette inamovibili sulle provette con indicazioni per individuare univocamente paziente ed esame, codice a barre o doppio codice di identificazione.
• Tipo di contenitore errato:
  • Provetta non conforme per analisi di laboratorio che causa alterazioni quantitative(campione coagulato o microlaguli)
  • Prevenzione: personale prelevatore e comunicazione del rischio

Prelievi

• Tabelle colori provette esempio: viola EDTA imatinib reversibile Ca e ideale per esame emocromocitometrico , verde eparina attiva anti-trombina III adatti ad esamo emozioni e chimica clinica su plasma ecc.
• Nella raccolta di campioni, assicurarsi che la quantità di sangue sia adatta, e che il rapporto con l'anticoagulante sia rispettato
• Subito dopo la raccolta, capovolgere le provette contenenti un anticoagulante da 4 a 6 volte, per rendere la reazione tra sangue e anticoagulante corretta.
• Subito dopo la raccolta del campione:
  • Il prelevatore rilascia il laccio(se non lo ha rilasciato), estrae l'ago dalla vena e posiziona subito un batuffolo di cotone sul sito di prelievo.
  • Per nessuna ragione l'ago usato deve essere rotto, reinserito o rimesso nel tappo
• Precauzioni supplementari: usare aghi non troppo sottili, strumenti e contenitori sterili; non usare dispostivi multi-uso
• Modalità di prelievo sottovuoto perché è costituita da sicurezza di operatore.
• L'emolisi rappresenta la ragione per cui l'inaccurabilità nei laboratori è molto alta. Nel resto dei casi si parla di un emolisi extravascolare

Cause di Emolisi Extravavascolare

• L'uso di aghi con diametro piccolo perché genera un flusso.
• Togliere la p rovvetta.
• Fanno la trasfusione di sangue nelle provette con un ago innestato,
• Riempimento della pipetta con i componenti è incompatibile.

Altre Fonte di Errore Sono:

• Evitare le diluzione di infusione venosa
• Prossimità dal il valore ematochimico
• Diluire campione lipemico ed in errore.
• Intervalli di temperatura(10°C e 22°C)
• Tempo di conservazione.

Tecniche Separative

• Vengono adoperate quando lo scopo specifico consiste nella purificazione o eliminazione delle varie popolazioni (cellule eritrociti , cellule leucociti, ecc...). Spesso è indispensabile in analisi o in ricerca. L’esecuzione delle tecniche non è indirizzata solo a scopo diagnostico ma anche con valenza preparativa.
• Tecnica antonomasia la centrifugazione. Quest’ultima però può alterare il numero.
• Passaggi di centrifugazioni vanno evitati perché si potrebbe perdere materiale(importante nelle indagini diagnostiche dove ci sono eventi rari).

La Centrifugazione

• La cromatografia è una tecnica per il metodo di separeazione di sostante con diversa intensità di legame.
• Utilizza un’alta accelerazione centrifuga e questo può equivalere anche a molte miglia di volte l'accelerazione di gravità.
• Si tratta di un contenitore all’interno del quale c’è un motore.
• Rotori = angolazione fisso, ad angolazione mobile.
• Ulteriormente, grazie, ad una camicia esterna il refigerante si tiene a temperatura costante. Le altre hanno invece una pompa di aspirazione.
• Se il rotore gira, questa ruota ad accelerazione gravità(espressa con la G). Il tipo di misurazione utilizzata dalle riviste é la misurazione espressa nelle scienzes scientifiche.
• Formale per descriverla e di calcolarla, se la velocità di sedimentazione in una particella é di 10 volte rispetto alla velocità gravitazione, ma non occorre ricordarla.
• Si opera con uno discorso classificativo di quella preparativa .

Centrifugazione PREPARATIVA

• Utile per separare cellule, frazione subcellulari. la C ANALITA viene utilizzata per conoscere componento o particelli.
• Metodi preparazione = grandi scala, adattadosi. Quelli analiitici invece utilizzatao quantità limitate perché già modificato
• Quella che prevede l’utilizzo del sangue : provetta con sangue eterogeneo posta nella centrifuga per un x tempo.

Centrifugazione ZONALE

• Consistone nella particele in zona discrete. E’’ usata per al separeazione delle particelle densità simile ma di massa diversa come organi subtonica DNA proteine ecc.
• Dura il separeare le particele ma senza portare alle fine nel fondo.
• Tecnicamente si procede attraverso = graduente qualsiasi
• Per separare componenti di sangue si utilizza una provetta, di cui metta a metà globuli biachi, rosso, plasma

La Centrifugazione ISOPICNICA

• è una centrifugiazione che consiste per portare ogni compenete all’interiorma, cio’ consiste in un portare all’ equilbrio. quindi una tecnica che separa delle particele in miscela.

Eletroforesi

• Se volessero scindere ed analizzare le cellule(o organelli) queste verrebbero separate per mezzo delle tecnica di centrifugazione. Nel casi di marcromolecole, allora vengono invece utilizzate delle tecniche chimiche( eletroforesi)
• C’è necessità mezzi liquidi o solidi per scindere sotto l’azione di un carico elttrico ionio oo polielettiliti.
• Un alimentatore fornisce corrente a livello e allinterno di una cellula elettrica.
• Catodici invece che ne pendonomo una molecole.
• il metodo di eletroforetizione si basa su tre componenti, cellulosio, alluminio, agarosio, sepiadix
• gel di placrilimmide servono per separare molecole su base della caraica e l’ SDS è sostanza che aggiunge.
• Vengono in questo modo fatte reazioni che vanno a formare polimerazionine acimmmide e non si puo farne a meno.
• Esitstono due tipologie di elettroforisi, WET è una e Semi Dry

ISOELETTROFOCALIZZAZIONE

• Il sistema utilizza gel con sostanze e separa le proteine grazie al loro peso neutro.
• questa tecnica e la separazione elettroforetica sono unite insieme. Il sistema utilizza il colorati PIK
• Viene utilizzata sopratutto per l’anemia falciforme e a sclerosi molto pilastro.
• Tipi bandie = assenti nel siero nel ligour, tipo bande assenti nel siero e presenti nel ligour , tipo preseti noeil siero ma ne legour ecc.
• Cromatografia = per le preparative

Spettrometriche

• Se le molecole composti è in sono in grado di assorbire le componentio, le carica con se . Se queste colpitio in un’onda vengono liberate una carica più alta e l’analita libererà le parti energetiche.
• Analisi spettro permette la sostanza il campione, quindi il suo spettro
• le molecole elettriche hanno componente di energia a livella i’ energia va ad un altro livello all’eccitato, e la colonometria.
• Il saggio fotametria dipende dalle caratteristiche costanti ed è dato dall’energia. In questo caso bisogna far attenzione se si è al giusto assorgimento con un campioni
• L’energia fotometria è basata in e cvi c’e stato in precedenza

ISOELLETTROFOCUSING

• Metodo che permerede il pH nelle proteine. Questa analisi e molto uytile nel caso di tumori

Turbidimetria e Nefelometria

• Usata per la misurazione a livello dello spettro fotometro

fluorometria

• È una sorgente che va e viene la fluoresenzna, fa si che l’anticorpo faccia a colorare in maniere diversa.
• Attaverso metodi di immumologia.

Elettronica

• Dot Pllot per la rapresentazaione de sali , density plot,. Permetttono analazi di piu’ grafici

Le Tecniche Immunochimiche

• Tecniche diagnostiche con anticorpi che riconoscono l'analita.
• Sistema immunitario distingue "SELF" da "NON SELF" (antigeni).
• Risposte immunitarie: umorale (anticorpi) e cellulo-mediate (linfociti T citotossici/CTL).
• Specificità, diversità, auto-limitazione, discriminazione del Self, memoria.
  • Specificità: ogni anticorpo reagisce contro un solo antigene
• Specificità e diversità - chiavi per l'uso di anticorpi come reattivi.
• Immunoglobuline (anticorpi): hanno 4 catene (2 pesanti H e 2 leggere L).
• Specificità data da regioni variabili delle catene H e L (VH e VL) che creano siti di legame (idiotipi). Diversi isotipi (IgA, IgD, IgE, IgG, IgM) condividono la specificità antigenica ma hanno funzioni diverse. Unita assieme da ponti di di sul fiuto

Anticorpi (Monoclonali e Policlonali)

• Policclonate
• Miseca di Ac piu’ tipi
• Mono
• Solo 1 AC
• Acolonalle
• Partire da topi muirnbi
• Iniettando antigene(AB) specifico. -Si effetuan piu inietti
  • Si effettuan piu iniezioni
• AB specifici solo iniettando antigieni
• Le reazioni di immuno/precipitazione. Si crea legame _ Test ad Anelli Antigenis sul tavolo
• test Di macini = diffunsione di piu tipi di test = si mette Ag e ac

Tipologie di reazione

• test immunno a livello cellulare
• test di immono/a con 2 reazioni di immuno
• Precpitate
• Con mac

Immunodiffusione radiale semplice (Test di Mancini)