Podcast
Questions and Answers
Quina és la característica principal del bromur d'etidi respecte al Sybr Green?
Quina és la característica principal del bromur d'etidi respecte al Sybr Green?
Quin agent intercalant es recomana per a un ús més segur?
Quin agent intercalant es recomana per a un ús més segur?
Quin és el mètode adequat per preparar el gel d'agarosa?
Quin és el mètode adequat per preparar el gel d'agarosa?
Quina funció tenen els marcadors de pes molecular en les mostres carregades al gel?
Quina funció tenen els marcadors de pes molecular en les mostres carregades al gel?
Signup and view all the answers
Quin pas és essencial després de la migració del DNA en el gel?
Quin pas és essencial després de la migració del DNA en el gel?
Signup and view all the answers
Quina és la funció dels cebadors en el procés de la PCR?
Quina és la funció dels cebadors en el procés de la PCR?
Signup and view all the answers
Quin és el paper de l'ADN polimerasa durant l'elongació?
Quin és el paper de l'ADN polimerasa durant l'elongació?
Signup and view all the answers
Quina fase del procés de la PCR es realitza primerament per separar les cadenes d'ADN?
Quina fase del procés de la PCR es realitza primerament per separar les cadenes d'ADN?
Signup and view all the answers
Com afecta la concentració del gel d'agarosa a la separació dels fragments de DNA?
Com afecta la concentració del gel d'agarosa a la separació dels fragments de DNA?
Signup and view all the answers
Quin és l'objectiu principal de l'electroforesi en gel d'agarosa?
Quin és l'objectiu principal de l'electroforesi en gel d'agarosa?
Signup and view all the answers
Quins són els components bàsics del DNA que es separen durant l'electroforesi?
Quins són els components bàsics del DNA que es separen durant l'electroforesi?
Signup and view all the answers
Quina informació proporciona un marcador de pes molecular en l'electroforesi?
Quina informació proporciona un marcador de pes molecular en l'electroforesi?
Signup and view all the answers
Quina és la característica principal dels grups fosfat dels nucleòtids?
Quina és la característica principal dels grups fosfat dels nucleòtids?
Signup and view all the answers
Quina és la principal funció de les proteases?
Quina és la principal funció de les proteases?
Signup and view all the answers
Quin dels següents agents desnaturalitza macromolècules per inactivar nucleases?
Quin dels següents agents desnaturalitza macromolècules per inactivar nucleases?
Signup and view all the answers
Quin mètode és utilitzat per a l'extracció i purificació de l'ADN en laboratoris amb moltes mostres?
Quin mètode és utilitzat per a l'extracció i purificació de l'ADN en laboratoris amb moltes mostres?
Signup and view all the answers
Com es determina la puresa de l'ADN purificat?
Com es determina la puresa de l'ADN purificat?
Signup and view all the answers
Quina és la característica clau de la PCR estàndard?
Quina és la característica clau de la PCR estàndard?
Signup and view all the answers
Quin valor de l'absorbància a 260 nm pot indicar una alta concentració d'ARN en l'ADN purificat?
Quin valor de l'absorbància a 260 nm pot indicar una alta concentració d'ARN en l'ADN purificat?
Signup and view all the answers
Quina acció realiza la proteïnasa K en el procés de purificació de l'ADN?
Quina acció realiza la proteïnasa K en el procés de purificació de l'ADN?
Signup and view all the answers
Quina tècnica es basa en la repetició de cicles de temperatura per augmentar exponencialment el nombre de còpies d'ADN?
Quina tècnica es basa en la repetició de cicles de temperatura per augmentar exponencialment el nombre de còpies d'ADN?
Signup and view all the answers
Quina és la primera etapa en l'extracció i purificació de l'ADN?
Quina és la primera etapa en l'extracció i purificació de l'ADN?
Signup and view all the answers
Quina és la funció principal dels detergents durant la lisi cel·lular?
Quina és la funció principal dels detergents durant la lisi cel·lular?
Signup and view all the answers
Per què és important l'EDTA en el procés d'extracció d'ADN?
Per què és important l'EDTA en el procés d'extracció d'ADN?
Signup and view all the answers
Quina barrera cal trencar per accedir als àcids nucleics durant l'extracció?
Quina barrera cal trencar per accedir als àcids nucleics durant l'extracció?
Signup and view all the answers
Quin tipus de mostra requereix un pretractament específic per a l'obtenció d'àcids nucleics?
Quin tipus de mostra requereix un pretractament específic per a l'obtenció d'àcids nucleics?
Signup and view all the answers
Quin és l'objectiu de l'ús d'enzims específicos com l'arnasa o la dnasasa?
Quin és l'objectiu de l'ús d'enzims específicos com l'arnasa o la dnasasa?
Signup and view all the answers
Quines mostres requereixen tractaments específics a l'hora d'extraure àcids nucleics, a banda de la sang?
Quines mostres requereixen tractaments específics a l'hora d'extraure àcids nucleics, a banda de la sang?
Signup and view all the answers
Quin és el primer pas per alliberar els àcids nucleics de la mostra?
Quin és el primer pas per alliberar els àcids nucleics de la mostra?
Signup and view all the answers
Study Notes
Extracció i Purificació de l'ADN
- El primer pas per extreure i purificar l'ADN és obtenir una suspensió cel·lular de la mostra.
- Cal trencar barreres com la paret cel·lular o la presència de nucleases.
- La sang és una mostra comuna que requereix un pretractament específic.
- L'obtenció de PBMC (limfòcits mononuclears de sang perifèrica) pot ser necessària.
- Altres mostres (teixits vegetals, animals, cultius cel·lulars o teixits fixats) requereixen pretractaments específics.
Lisi Cel·lular i Inactivació de Nucleases
- Els detergents desestructuren la biccapa lipídica i desnaturalitzen les proteïnes de la membrana, facilitant la lisi cel·lular.
- L'EDTA inhibeix l'activitat de les nucleases (DNases), evitant la degradació de l'ADN.
- Es poden utilitzar enzims com ARNasas o DNAses per eliminar ARN o ADN de la mostra.
Proteases
- Les proteases digereixen proteïnes.
- La proteïnasa K inhabilita nucleases, utilitzada en la purificació de l'ADN.
Sistemes Automàtics de Purificació de l'ADN
- En laboratoris amb moltes mostres per analitzar, els sistemes automatitzats són útils.
- Els sistemes automatitzats ofereixen alta puresa i minimització de la contaminació per proteïnes i contaminants creuats.
Qualitat de l'ADN Purificat
- L'integritat de l'ADN es pot determinar mitjançant electroforesi en gel d'agarosa.
- La puresa es pot determinar amb el quocient A260/A280, un valor adequat indica baixa contaminació per proteïnes o fenols.
- La concentració s'avalua mitjançant l'absorbència a 260 nm, on un valor elevat indica alta concentració d'ADN.
Amplificació de l'ADN per PCR
- La PCR (Reacció en Cadena de la Polimerasa) és una tècnica que permet obtenir milions de còpies d'una seqüència d'ADN específica in vitro.
- El funcionament de la PCR es basa en cicles de temperatura per aconseguir un augment exponencial del nombre de còpies d'ADN.
- La PCR necessita ADN polimerasa, encebadors, dNTPs, solució tampó i ions de magnesi.
- L'ADN motlle conté el fragment d'interès que serveix com a motlle per a la síntesi.
- Els encebadors són seqüències curtes de nucleòtids que s'uneixen a les regions complementàries de l'ADN motlle.
- La PCR consta de fases de desnaturalització, hibridació/annellament i elongació/polimerització.
Electroforesi en Gel d'Agarosa
- L'electroforesi separa i visualitza fragments d'ADN.
- Confirma la presència de seqüències de DNA i estima el pes molecular.
- La concentració del gel d'agarosa afecta la separació de fragments.
- Els nucleòtids d'ADN tenen càrrega negativa i migren durant l'electroforesi.
- Els marcadors de pes molecular s'utilitzen per comparar la mida dels fragments.
- Els agents intercalants (bromur d'etidi o Sybr Green) permeten visualitzar les bandes d'ADN sota llum ultraviolada.
Protocol d'Electroforesi
- Preparació del gel d'agarosa.
- Preparació de mostres, controls i marcadors.
- Migració i observació dels resultats (visualització de bandes del DNA).
Studying That Suits You
Use AI to generate personalized quizzes and flashcards to suit your learning preferences.
Related Documents
Description
Aprofundeix en els processos d'extracció i purificació de l'ADN, incloent les tècniques de lisi cel·lular i la inhibició de nucleases. Explora com diferents mostres, com la sang i els teixits, requereixen mètodes específics de tractament per obtenir ADN pur. Coneix l'ús de proteases en la purificació i l'impacte dels detergents en la lisi cel·lular.
