Podcast
Questions and Answers
Quina és la característica principal del bromur d'etidi respecte al Sybr Green?
Quina és la característica principal del bromur d'etidi respecte al Sybr Green?
- És més intens en l'electroforesi.
- És menys tòxic.
- Té propietats mutagèniques. (correct)
- S'intercalen de manera diferent en el DNA.
Quin agent intercalant es recomana per a un ús més segur?
Quin agent intercalant es recomana per a un ús més segur?
- Doxorubicina
- Sybr Green (correct)
- Bromur d'etidi
- Es verd que brilla
Quin és el mètode adequat per preparar el gel d'agarosa?
Quin és el mètode adequat per preparar el gel d'agarosa?
- Amb gelatina i tampó de sal.
- Amb cinta d'autoclau i tampó TBE 0,5X. (correct)
- Amb aigua destil·lada i tampó de fosfat.
- Amb clorur de calci i sèrum d'albumina.
Quina funció tenen els marcadors de pes molecular en les mostres carregades al gel?
Quina funció tenen els marcadors de pes molecular en les mostres carregades al gel?
Quin pas és essencial després de la migració del DNA en el gel?
Quin pas és essencial després de la migració del DNA en el gel?
Quina és la funció dels cebadors en el procés de la PCR?
Quina és la funció dels cebadors en el procés de la PCR?
Quin és el paper de l'ADN polimerasa durant l'elongació?
Quin és el paper de l'ADN polimerasa durant l'elongació?
Quina fase del procés de la PCR es realitza primerament per separar les cadenes d'ADN?
Quina fase del procés de la PCR es realitza primerament per separar les cadenes d'ADN?
Com afecta la concentració del gel d'agarosa a la separació dels fragments de DNA?
Com afecta la concentració del gel d'agarosa a la separació dels fragments de DNA?
Quin és l'objectiu principal de l'electroforesi en gel d'agarosa?
Quin és l'objectiu principal de l'electroforesi en gel d'agarosa?
Quins són els components bàsics del DNA que es separen durant l'electroforesi?
Quins són els components bàsics del DNA que es separen durant l'electroforesi?
Quina informació proporciona un marcador de pes molecular en l'electroforesi?
Quina informació proporciona un marcador de pes molecular en l'electroforesi?
Quina és la característica principal dels grups fosfat dels nucleòtids?
Quina és la característica principal dels grups fosfat dels nucleòtids?
Quina és la principal funció de les proteases?
Quina és la principal funció de les proteases?
Quin dels següents agents desnaturalitza macromolècules per inactivar nucleases?
Quin dels següents agents desnaturalitza macromolècules per inactivar nucleases?
Quin mètode és utilitzat per a l'extracció i purificació de l'ADN en laboratoris amb moltes mostres?
Quin mètode és utilitzat per a l'extracció i purificació de l'ADN en laboratoris amb moltes mostres?
Com es determina la puresa de l'ADN purificat?
Com es determina la puresa de l'ADN purificat?
Quina és la característica clau de la PCR estàndard?
Quina és la característica clau de la PCR estàndard?
Quin valor de l'absorbància a 260 nm pot indicar una alta concentració d'ARN en l'ADN purificat?
Quin valor de l'absorbància a 260 nm pot indicar una alta concentració d'ARN en l'ADN purificat?
Quina acció realiza la proteïnasa K en el procés de purificació de l'ADN?
Quina acció realiza la proteïnasa K en el procés de purificació de l'ADN?
Quina tècnica es basa en la repetició de cicles de temperatura per augmentar exponencialment el nombre de còpies d'ADN?
Quina tècnica es basa en la repetició de cicles de temperatura per augmentar exponencialment el nombre de còpies d'ADN?
Quina és la primera etapa en l'extracció i purificació de l'ADN?
Quina és la primera etapa en l'extracció i purificació de l'ADN?
Quina és la funció principal dels detergents durant la lisi cel·lular?
Quina és la funció principal dels detergents durant la lisi cel·lular?
Per què és important l'EDTA en el procés d'extracció d'ADN?
Per què és important l'EDTA en el procés d'extracció d'ADN?
Quina barrera cal trencar per accedir als àcids nucleics durant l'extracció?
Quina barrera cal trencar per accedir als àcids nucleics durant l'extracció?
Quin tipus de mostra requereix un pretractament específic per a l'obtenció d'àcids nucleics?
Quin tipus de mostra requereix un pretractament específic per a l'obtenció d'àcids nucleics?
Quin és l'objectiu de l'ús d'enzims específicos com l'arnasa o la dnasasa?
Quin és l'objectiu de l'ús d'enzims específicos com l'arnasa o la dnasasa?
Quines mostres requereixen tractaments específics a l'hora d'extraure àcids nucleics, a banda de la sang?
Quines mostres requereixen tractaments específics a l'hora d'extraure àcids nucleics, a banda de la sang?
Quin és el primer pas per alliberar els àcids nucleics de la mostra?
Quin és el primer pas per alliberar els àcids nucleics de la mostra?
Flashcards
Obtenció de suspensió cel·lular
Obtenció de suspensió cel·lular
Primer pas en l'extracció i purificació d'ADN. Es necessita una suspensió de cèl·lules de la mostra.
Extracció d'àcids nucleics
Extracció d'àcids nucleics
Alliberar els àcids nucleics de la mostra per a la purificació.
Purificació d'àcids nucleics
Purificació d'àcids nucleics
Aïllar i purificar els àcids nucleics alliberats.
Diversitat de mostres
Diversitat de mostres
Signup and view all the flashcards
Trencar barreres (àcids nucleics)
Trencar barreres (àcids nucleics)
Signup and view all the flashcards
Lisi cel·lular
Lisi cel·lular
Signup and view all the flashcards
Inactivació de nucleases
Inactivació de nucleases
Signup and view all the flashcards
EDTA
EDTA
Signup and view all the flashcards
Proteases
Proteases
Signup and view all the flashcards
Proteïnasa K
Proteïnasa K
Signup and view all the flashcards
Agents caotròpics
Agents caotròpics
Signup and view all the flashcards
PCR
PCR
Signup and view all the flashcards
ADN motlle
ADN motlle
Signup and view all the flashcards
PCR estàndard
PCR estàndard
Signup and view all the flashcards
Quocient A260/A280
Quocient A260/A280
Signup and view all the flashcards
Concentració d'ADN
Concentració d'ADN
Signup and view all the flashcards
Cebador 1 en PCR
Cebador 1 en PCR
Signup and view all the flashcards
Cebador 2 en PCR
Cebador 2 en PCR
Signup and view all the flashcards
ADN polimerasa en PCR
ADN polimerasa en PCR
Signup and view all the flashcards
Desnaturalització en PCR
Desnaturalització en PCR
Signup and view all the flashcards
Hibridació/ Anells en PCR
Hibridació/ Anells en PCR
Signup and view all the flashcards
Electroforesi en gel d'agarosa
Electroforesi en gel d'agarosa
Signup and view all the flashcards
Concentració gel d'agarosa
Concentració gel d'agarosa
Signup and view all the flashcards
Marcador de pes molecular en electroforesi
Marcador de pes molecular en electroforesi
Signup and view all the flashcards
Banda de 500pb
Banda de 500pb
Signup and view all the flashcards
Agents intercalants
Agents intercalants
Signup and view all the flashcards
Toxicitat del bromur d'etidi
Toxicitat del bromur d'etidi
Signup and view all the flashcards
Preparació del gel d'agarosa
Preparació del gel d'agarosa
Signup and view all the flashcards
Preparació de mostres i càrrega al gel
Preparació de mostres i càrrega al gel
Signup and view all the flashcards
Study Notes
Extracció i Purificació de l'ADN
- El primer pas per extreure i purificar l'ADN és obtenir una suspensió cel·lular de la mostra.
- Cal trencar barreres com la paret cel·lular o la presència de nucleases.
- La sang és una mostra comuna que requereix un pretractament específic.
- L'obtenció de PBMC (limfòcits mononuclears de sang perifèrica) pot ser necessària.
- Altres mostres (teixits vegetals, animals, cultius cel·lulars o teixits fixats) requereixen pretractaments específics.
Lisi Cel·lular i Inactivació de Nucleases
- Els detergents desestructuren la biccapa lipídica i desnaturalitzen les proteïnes de la membrana, facilitant la lisi cel·lular.
- L'EDTA inhibeix l'activitat de les nucleases (DNases), evitant la degradació de l'ADN.
- Es poden utilitzar enzims com ARNasas o DNAses per eliminar ARN o ADN de la mostra.
Proteases
- Les proteases digereixen proteïnes.
- La proteïnasa K inhabilita nucleases, utilitzada en la purificació de l'ADN.
Sistemes Automàtics de Purificació de l'ADN
- En laboratoris amb moltes mostres per analitzar, els sistemes automatitzats són útils.
- Els sistemes automatitzats ofereixen alta puresa i minimització de la contaminació per proteïnes i contaminants creuats.
Qualitat de l'ADN Purificat
- L'integritat de l'ADN es pot determinar mitjançant electroforesi en gel d'agarosa.
- La puresa es pot determinar amb el quocient A260/A280, un valor adequat indica baixa contaminació per proteïnes o fenols.
- La concentració s'avalua mitjançant l'absorbència a 260 nm, on un valor elevat indica alta concentració d'ADN.
Amplificació de l'ADN per PCR
- La PCR (Reacció en Cadena de la Polimerasa) és una tècnica que permet obtenir milions de còpies d'una seqüència d'ADN específica in vitro.
- El funcionament de la PCR es basa en cicles de temperatura per aconseguir un augment exponencial del nombre de còpies d'ADN.
- La PCR necessita ADN polimerasa, encebadors, dNTPs, solució tampó i ions de magnesi.
- L'ADN motlle conté el fragment d'interès que serveix com a motlle per a la síntesi.
- Els encebadors són seqüències curtes de nucleòtids que s'uneixen a les regions complementàries de l'ADN motlle.
- La PCR consta de fases de desnaturalització, hibridació/annellament i elongació/polimerització.
Electroforesi en Gel d'Agarosa
- L'electroforesi separa i visualitza fragments d'ADN.
- Confirma la presència de seqüències de DNA i estima el pes molecular.
- La concentració del gel d'agarosa afecta la separació de fragments.
- Els nucleòtids d'ADN tenen càrrega negativa i migren durant l'electroforesi.
- Els marcadors de pes molecular s'utilitzen per comparar la mida dels fragments.
- Els agents intercalants (bromur d'etidi o Sybr Green) permeten visualitzar les bandes d'ADN sota llum ultraviolada.
Protocol d'Electroforesi
- Preparació del gel d'agarosa.
- Preparació de mostres, controls i marcadors.
- Migració i observació dels resultats (visualització de bandes del DNA).
Studying That Suits You
Use AI to generate personalized quizzes and flashcards to suit your learning preferences.
Related Documents
Description
Aprofundeix en els processos d'extracció i purificació de l'ADN, incloent les tècniques de lisi cel·lular i la inhibició de nucleases. Explora com diferents mostres, com la sang i els teixits, requereixen mètodes específics de tractament per obtenir ADN pur. Coneix l'ús de proteases en la purificació i l'impacte dels detergents en la lisi cel·lular.
