Electroforesis y Electroforesis Capilar

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Questions and Answers

¿Cuál es el límite de detección de la espectrometría?

  • 1-1000 (correct)
  • 10
  • 1-0.01
  • 1000

¿Qué tipo de moléculas migran hacia el polo positivo en electroforesis?

  • Proteínas con carga positiva (correct)
  • Ácidos nucleicos
  • Proteínas con carga negativa
  • Moléculas neutras

¿Qué sustancia se usa para dar carga negativa a las proteínas en electroforesis?

  • Etanol
  • Detergente
  • Dodecilsulfato de sodio (SDS) (correct)
  • Ácido clorhídrico

¿Cuál es el principio fundamental de la electroforesis?

<p>Las moléculas migran por un gel basado en su carga y tamaño. (A)</p> Signup and view all the answers

¿Qué grupo es responsable de que los ácidos nucleicos porten carga negativa?

<p>Grupo fosfato (PO4) (A)</p> Signup and view all the answers

¿Qué dispositivo se utiliza para generar un campo eléctrico en electroforesis?

<p>Cámara de electroforesis (D)</p> Signup and view all the answers

¿Cuál es el límite de detección de la conductividad?

<p>100 (A)</p> Signup and view all the answers

¿Qué ocurre con las macromoléculas cargadas en un campo eléctrico?

<p>Migran hacia el polo opuesto a su carga. (C)</p> Signup and view all the answers

¿Cuál es el principio básico en el que se basa la electroforesis?

<p>Separación mediante velocidades de migración de especies cargadas. (A)</p> Signup and view all the answers

¿En qué año se desarrolló la técnica de electroforesis para muestras macroscópicas?

<p>1930 (C)</p> Signup and view all the answers

¿Cuál de las siguientes sustancias no es un ejemplo de un analito que puede ser separado por electroforesis?

<p>Gases (D)</p> Signup and view all the answers

En la electroforesis capilar, ¿cuál es el rango de voltaje que se aplica?

<p>5-30 KV (B)</p> Signup and view all the answers

¿Qué tipo de inyección se utiliza para introducir la muestra en el capilar durante la electroforesis?

<p>Inyección electrocinética o de presión. (A)</p> Signup and view all the answers

¿Qué tipo de moléculas se separa eficazmente con la electroforesis?

<p>Macromoléculas con carga. (C)</p> Signup and view all the answers

¿Cuál es la función de la solución amortiguadora en la electroforesis capilar?

<p>Mantener el pH y la conductividad. (C)</p> Signup and view all the answers

¿Qué tipo de moléculas pueden ser detectadas al final del proceso de electroforesis?

<p>Macromoléculas con carga. (A)</p> Signup and view all the answers

¿Cuál es la función principal de la solución amortiguadora en la electroforesis?

<p>Alterar el pH sin cambios bruscos (A)</p> Signup and view all the answers

En una cámara de electroforesis vertical, ¿dónde se coloca el polo positivo?

<p>En la parte inferior de la cámara (A)</p> Signup and view all the answers

¿Cuál de las siguientes características hace que el gel de agarosa sea adecuado para separar ADN?

<p>Forma una malla tridimensional que separa moléculas por peso (A)</p> Signup and view all the answers

¿Qué ocurre con el gel de agarosa al enfriarse después de ser disuelto?

<p>Forma un gel poroso (C)</p> Signup and view all the answers

¿Cuál es una ventaja del gel de agarosa sobre el gel de acrilamida?

<p>No es tóxico (D)</p> Signup and view all the answers

¿Cuál es la concentración de agarosa más utilizada para la electroforesis de ácidos nucleicos?

<p>1.5 a 2 % (A)</p> Signup and view all the answers

¿Qué propiedad determina el tamaño de poro en los geles de acrilamida?

<p>La concentración total de acrilamida (D)</p> Signup and view all the answers

¿Cómo se elabora un gel de agarosa?

<p>Se disuelve en una solución amortiguadora y se calienta (A)</p> Signup and view all the answers

¿Qué tipo de muestras se utilizan en la digestión ácida?

<p>Muestras sólidas y minerales (D)</p> Signup and view all the answers

¿Qué identifica el color rojo en una cámara de electroforesis?

<p>Polo positivo (D)</p> Signup and view all the answers

¿Qué temperatura mínima se requiere en calcinación para descomponer la parte orgánica?

<p>900°C (C)</p> Signup and view all the answers

¿Cuál de las siguientes afirmaciones sobre el gel de acrilamida es correcta?

<p>Ofrece un mayor poder de resolución (D)</p> Signup and view all the answers

En la electroforesis, ¿qué papel juegan las moléculas cargadas?

<p>Se mueven hacia el electrodo opuesto (D)</p> Signup and view all the answers

¿Cuál es la relación de proporción de acrilamida y bisacrilamida en los geles?

<p>19:1 (B)</p> Signup and view all the answers

¿Cuál de los siguientes ácidos no se menciona para la digestión ácida en el contenido?

<p>H3PO4 (C)</p> Signup and view all the answers

¿Qué tipo de gel se usa principalmente para la separación de proteínas?

<p>Gel de poliacrilamida (C)</p> Signup and view all the answers

¿Cuál es la principal aplicación de la electroforesis?

<p>Separar moléculas según su carga eléctrica y tamaño. (C)</p> Signup and view all the answers

¿Qué proceso es opuesto a la descomposición química?

<p>Síntesis química (D)</p> Signup and view all the answers

¿Cuál es la diferencia principal entre calcinación y combustión?

<p>La calcinación no utiliza oxígeno, mientras que la combustión sí. (C)</p> Signup and view all the answers

¿Cómo se lleva a cabo la descomposición por horno de microondas?

<p>Utiliza un horno especializado con energía de microondas y reactivos químicos. (A)</p> Signup and view all the answers

¿Cuál es la técnica que permite una digestión rápida mediante energía electromagnética?

<p>Horneado de microondas. (A)</p> Signup and view all the answers

¿Cuál de las siguientes moléculas no se usa en la electroforesis?

<p>Ácidos grasos. (B)</p> Signup and view all the answers

¿Cuál de estas afirmaciones sobre la electroforesis es incorrecta?

<p>La electroforesis permite separar moléculas sólo en función de su carga eléctrica. (C)</p> Signup and view all the answers

¿Qué se obtiene principalmente de la combustión durante un proceso de descomposición?

<p>Dióxido de carbono y agua. (C)</p> Signup and view all the answers

¿Cuál de las siguientes afirmaciones sobre la concentración de agarosa es correcta?

<p>La concentración de agarosa es inversamente proporcional al tamaño de los poros. (B)</p> Signup and view all the answers

¿Qué ocurre con los ácidos nucleicos lineales de alto peso molecular durante la electroforesis?

<p>Migran más lentamente que los de menor peso molecular. (C)</p> Signup and view all the answers

¿Qué conformaciones de un plásmido se pueden visualizar durante la electroforesis?

<p>Super enrollada, semirelajada y relajada. (C)</p> Signup and view all the answers

¿Qué función tienen los marcadores de peso molecular en la electroforesis de agarosa?

<p>Ayudar a determinar el peso molecular de los fragmentos analizados. (A)</p> Signup and view all the answers

¿Qué rango de tamaños de banda se puede observar al utilizar una concentración de 1% de agarosa?

<p>250 pb - 12 Kb. (D)</p> Signup and view all the answers

¿Qué efecto tiene el pH sobre la formación del gel de agarosa?

<p>Afecta múltiples aspectos, incluyendo la temperatura de gelificación. (D)</p> Signup and view all the answers

¿Cuál es la relación entre el tamaño de los poros de la matriz de agarosa y la concentración de agarosa utilizada?

<p>A menor concentración, mayor tamaño de los poros. (D)</p> Signup and view all the answers

¿Qué se requiere para un perfil electroquímico de ácidos nucleicos durante la electroforesis?

<p>Detergentes, buffer y marcadores de PM. (C)</p> Signup and view all the answers

Flashcards

Electroforesis

Método de separación de especies cargadas en un campo eléctrico.

Especies cargadas

Moléculas que poseen carga eléctrica.

Electroforesis capilar

Método de electroforesis que utiliza un capilar para separar las moléculas.

Capilar (electroforesis)

Tubo delgado y largo utilizado en la electroforesis capilar.

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Solución amortiguadora

Solución que mantiene un pH constante en la electroforesis.

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Inyección electrocinética

Técnica de introducir la muestra al capilar para la electroforesis.

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Potencial de energía (Electroforesis Capilar)

Voltaje aplicado en la electroforesis capilar para la separación.

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Muestra (electroforesis)

La sustancia a separar en la electroforesis.

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Cámara de electroforesis

Contenedor que contiene el gel con la muestra, permite la transmisión de corriente eléctrica.

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Gel de agarosa

Gel semisólido usado para separar ADN, hecho de polisacárido.

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Gel de acrilamida

Gel semisólido usado para separar moléculas, especialmente proteínas.

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Peso molecular

Medida de la masa de una molécula.

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Soporte de gel

Material semisólido que evita perturbaciones mecánicas para separar moléculas.

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Polos positivo y negativo

Conexiones a la fuente de energía para generar el campo eléctrico en electroforesis, identificados por colores.

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Electroforesis de ácidos nucleicos

Técnica para separar ácidos nucleicos (ADN y ARN) según su tamaño y carga eléctrica utilizando un gel.

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Desnaturalización de la muestra

Proceso de romper las estructuras secundarias de una muestra para su análisis.

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Descomposición de la muestra

Métodos para separar o dividir una muestra en el análisis químico o físico.

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Digestión ácida

Método de descomposición para muestras sólidas, minerales y orgánicas, usando ácidos fuertes a altas temperaturas y presiones.

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Calcinación

Método de descomposición para muestras orgánicas a altas temperaturas (900 °C o más) para eliminar componentes orgánicos.

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Electroforesis: ¿Para qué sirve?

Técnica para separar moléculas según su carga eléctrica y tamaño.

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Descomposición química: proceso opuesto

Síntesis química; unir moléculas para crear otras más complejas.

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Calcinación vs. Combustión (descomposición)

Calcinación: calentar sin oxígeno; Combustión: quemar con oxígeno liberando calor y gases.

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Descomposición por microondas: ¿Cómo funciona?

Utiliza microondas y reactivos para acelerar la digestión de muestras en un ambiente cerrado.

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Digestión rápida de muestras: técnica clave

Descomposición por microondas, una técnica que usa energía electromagnética.

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Electroforesis: moléculas NO usadas

Carbohidratos no son comúnmente usados como muestra en la electroforesis.

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Electroforesis y tamaño de macromoléculas

El tamaño de la macromolécula afecta la cantidad de agente gelificante necesaria para la electroforesis.

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Electroforesis: función principal

Separar moléculas según su carga eléctrica y tamaño.

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Límite de detección de la espectrometría

El rango de concentración más bajo que un método espectroscópico puede detectar de forma confiable, variando entre 1 y 1000.

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Límite de detección de la absorción

El método de absorción espectroscópica puede detectar concentraciones tan bajas como 0.01

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Carga de las proteínas

Las proteínas pueden tener carga positiva o negativa, dependiendo del pH del medio. Algunas son neutras y requieren un tratamiento con detergente (como SDS) para adquirir carga negativa.

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Carga de los ácidos nucleicos

Los ácidos nucleicos tienen carga negativa debido a la presencia de grupos fosfato en su estructura.

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Importancia de la electroforesis en biología molecular

La electroforesis ayuda a separar, purificar y analizar ácidos nucleicos y proteínas, siendo esencial en numerosos experimentos.

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Factores que influyen en la migración en electroforesis

La migración depende de la carga eléctrica y el tamaño de las moléculas (peso molecular), y del pH del medio.

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Concentración de Agarosa y Tamaño de Banda

La concentración de agarosa en un gel afecta el tamaño de las bandas de ADN visibles en la electroforesis. Concentraciones más altas de agarosa producen poros más pequeños, lo que permite la separación de fragmentos más pequeños de ADN.

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Electroforesis de ADN

Técnica que separa fragmentos de ADN según su tamaño, utilizando un gel de agarosa y una corriente eléctrica. El ADN migra hacia el polo positivo (ánodo) del gel.

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Plásmido y Conformaciones

Un plásmido es un tipo de ADN circular. En la electroforesis, diferentes conformaciones del plásmido mismo (superenrollado, relajado) pueden mostrar patrones diferentes de migración, incluso si tienen el mismo tamaño en pares de bases.

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Agarosa

Polímero extraído de las algas marinas. Se utiliza para crear un gel con poros que permiten la separación de fragmentos de ácidos nucleicos mediante electroforesis.

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Tamaño del poro en gel de agarosa

El tamaño de los poros en un gel de agarosa está inversamente relacionado con la concentración del gel. Concentraciones altas de agarosa significan poros más pequeños, y viceversa.

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Peso Molecular (PM) en ADN

El peso molecular indica la masa de una molécula de ADN. Moléculas más grandes tienen mayor peso molecular.

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Marcadores de Peso Molecular (PM)

Fragmentos de ADN de tamaño conocido que se utilizan en la electroforesis para comparar y determinar el tamaño de los fragmentos desconocidos.

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Conformación de plásmido

La forma física de una molécula de ADN, que puede ser super enrollada, lineal o circular. Diferentes conformaciones producen patrones de bandas distintos en la electroforesis.

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Study Notes

Electroforesis

  • Método de separación basado en velocidades de migración diferencial de especies cargadas en un campo eléctrico.
  • Desarrollado en 1930 para estudiar proteínas séricas.
  • Aplicable a una amplia variedad de muestras para separación.
  • Incluye separación de aniones y cationes, inorgánicos, aminoácidos, catecolaminas, fármacos, eritropoyetinas, insulina, vitaminas, carbohidratos, proteínas, péptidos, ácidos nucleicos, polinucleótidos, y otras moléculas con carga.
  • Permite separar macromoléculas de interés bioquímicos, biológicos, inmunológicos, químicos y médicos.
  • Ofrece análisis de enzimas, hormonas, anticuerpos (ELISA).

Electroforesis Capilar

  • Instrumentación incluye un capilar (10-100 µm de diámetro interno y 40-100 cm de longitud) lleno de solución amortiguadora.
  • Electrodos (platinos) en ambos extremos del capilar.
  • Introducción de muestra (inyección electrocinética o de presión).
  • Detección en el extremo opuesto del capilar.
  • Campo eléctrico aplicado (5-30 kV).
  • Migración de moléculas basada en carga y tamaño.

Tipos de detectores

  • Espectrometría (UV-Vis, fluorescencia, etc.)
  • Absorción, fluorescencia
  • Lente térmico, Raman
  • Quimioluminiscencia
  • Espectrometría de masa
  • Electroquímica (conductividad, potenciometría, amperometría)
  • Límites de detección varían según el tipo de detector

Electroforesis Gel (Parte 2)

  • Moléculas cargadas eléctricamente migran hacia polos opuestos según su carga.
  • La carga depende del pH del medio
  • Las proteínas pueden tener cargas positivas o negativas, dependiendo de los aminoácidos que las componen.
  • Los geles pueden ser de agarosa (ideal para ácidos nucleicos) o acrilamida (ideal para proteínas).
  • Agarosa sólida, que forma una matriz porosa para separar ácidos nucleicos según su tamaño.
  • Concentración de agarosa tiene relación inversa con el tamaño de los poros del gel.

Descomposición de la Muestra

  • Procedimientos para separar una muestra en compuestos químicos o físicos.
  • Métodos como tamaño de partícula, preparación de muestra, propiedades elementales.
  • Técnicas como digestiones ácidas (utilizando altas temperaturas y presiones para compuestos orgánicos, minerales y suelos) y calcinación (usando temperaturas extremadamente altas para descomponer material orgánico y dejar solo contenido mineral).
  • También horne de microondas es usado para acelerar el proceso.

Preguntas de Examen

  • Preguntas sobre tipos de geles, funciones de la electroforesis, la descomposición de muestras, aplicaciones de la electroforesis en diversos tipos de muestras (proteínas, ácidos nucleicos, etc), y conceptos relacionados.

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