Dosage de la Caféine par HPLC

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Questions and Answers

Quelle est la relation fondamentale en analyse chromatographique quantitative reliant la masse injectée et l’aire du pic obtenue ?

L’aire du pic est proportionnelle à la masse injectée. (correct)
L’aire du pic est inversement proportionnelle à la masse injectée.
L’aire du pic est indépendante de la masse injectée.
L’aire du pic est proportionnelle à la concentration de l'échantillon.

Comment est mesurée l’aire du pic dans une analyse chromatographique ?

Par observation visuelle de la couleur du pic.
Par calcul manuel des points d'inflexion.
À l'aide d'un logiciel de traitement de données chromatographiques. (correct)
En utilisant une règle pour mesurer la hauteur des pics.

Quelles sont les différences fondamentales entre l’étalonnage externe et l’étalonnage interne ?

L’étalonnage externe utilise des standards tandis que l’étalonnage interne ne les utilise pas. (correct)
L’étalonnage interne est réalisé en utilisant plusieurs échantillons de référence.
L’étalonnage externe est basé sur l’ajout d’un étalon interne aux échantillons.
L’étalonnage interne est plus sujet aux erreurs de mesure que l’étalonnage externe.

Quels critères sont importants pour le choix d’un étalon interne ?

<p>L'étalon doit être chimiquement similaire au composé d'intérêt. (B)</p> Signup and view all the answers

Pourquoi est-il important de justifier la longueur d’onde de détection dans une analyse chromatographique ?

<p>Pour maximiser la sensibilité et la sélectivité de l'analyse. (D)</p> Signup and view all the answers

Flashcards

Relation fondamentale en chromatographie quantitative

La relation fondamentale en analyse chromatographique quantitative reliant la masse injectée et l'aire du pic obtenue est : Aire du pic = k * Masse injectée, où k est une constante de proportionnalité qui dépend de la substance analysée, des conditions de chromatographie et du détecteur utilisé.

Comment mesurer l'aire du pic ?

L'aire du pic est mesurée en intégrant la surface sous la courbe du pic chromatographique. La méthode la plus courante est de mesurer l'aire du pic en utilisant une méthode d'intégration numérique réalisée automatiquement par le logiciel de l'appareil.

Différences entre étalonnage externe et interne

L'étalonnage externe consiste à établir une relation entre la réponse du détecteur (l'aire du pic) et les concentrations connues d'une série d'étalons préparés séparément de l'échantillon. L'étalonnage interne utilise un composé connu, ajouté à l'échantillon et aux étalons, comme référence pour quantifier l'analyte. Le rapport des aires des pics de l'analyte et de l'étalon interne est utilisé pour déterminer la concentration de l'analyte.

Critères d'un étalon interne idéal

Un bon étalon interne doit être facilement séparable de l'analyte sur le chromatogramme, avoir une réponse proche de celle de l'analyte au même détecteur, être stable dans les conditions de l'analyse, et être présent à une concentration constante dans l'échantillon et les étalons.

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Justifier la longueur d'onde de détection

Le choix de la longueur d'onde de détection est justifié par le fait que la caféine présente un maximum d'absorption à 273 nm. Cette longueur d'onde a été choisie pour obtenir une meilleure sensibilité de détection et un meilleur rapport signal/bruit, conduisant ainsi à une meilleure précision dans les résultats de l'analyse.

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Study Notes

Partie 1 : Dosage de la Caféine dans le Coca-Cola® par HPLC

La caféine est dosée par chromatographie liquide haute performance (HPLC).
Les chromatogrammes des étalons sont fournis en annexe.
Conditions opératoires:
- Colonne: Wakosil C18 250*4
- Eluant: Eau/acétonitrile (30/70)
- Débit: 1 mL/min
- Pression: 114 bars
- Température: 25°C
- Volume d'injection: 20 µL
- Durée de la chromatographie: 4 min
- Longueur d'onde de détection: 254 nm
- Etalon interne: Benzoïne à une concentration finale précisée.

Relation fondamentale en analyse chromatographique quantitative

La relation fondamentale relie la masse injectée à l'aire du pic.

Différences entre étalonnage externe et étalonnage interne

Explication requise.

Choix d'un étalon interne (à partir du document 1)

Critères de choix d'un étalon interne explicites.

Justification de la longueur d'onde de détection

Justification de la longueur d'onde de détection (254 nm) à partir du document 1.

Détermination de la concentration de l'échantillon 43 en caféine

Exploitation des chromatogrammes (documents 2 et 2bis) est requise.

Partie 2 : Dosage de la caféine dans le Coca-Cola® par la méthode des ajouts dosés

Principe de la méthode des ajouts dosés:
- Ajouter des quantités connues de composé à doser à des solutions de référence.
- Déterminer la concentration du composé dans la solution initiale.
Préparation de la gamme étalon (à l'aide des documents):
- Cinq solutions diluées de caféine sont préparées (différentes concentrations)
- Les solutions sont injectées dans une boucle de 20,0 µL.
- Les aires des pics de caféine correspondantes sont données dans le tableau.
Relation entre l'aire du pic et la concentration (à l'aide des documents):
- Une courbe d'étalonnage est tracée avec les données (aire du pic vs concentration).
- La droite obtenue possède une équation y = 0.2151x + 0.5076 et un coefficient de corrélation R² = 0.9999, permettant de déterminer la concentration de caféine dans la solution mère.