Cytochemia i reakcje cytochemiczne
40 Questions
0 Views

Cytochemia i reakcje cytochemiczne

Created by
@UnrestrictedCarnelian7893

Podcast Beta

Play an AI-generated podcast conversation about this lesson

Questions and Answers

Który typ reakcji cytochemicznych jest bardziej czuły?

  • Reakcja bezpośrednia
  • Reakcja jednoetapowa
  • Reakcja dwuetapowa (correct)
  • Reakcja kontrolna

    • Jakie substancje najlepiej badać metodą liofilizacji?

  • Białka
  • Aminy biogenne (correct)
  • Tłuszcze
  • Kwas nukleinowy

    • Jaką barwę uzyskują białka zawierające tyrozynę podczas reakcji Millona?

  • Kolor zielony
  • Kolor ceglastoczerwony (correct)
  • Kolor niebieski
  • Kolor fioletowy

    • Która technika jest stosowana do wykrywania enzymów?

    <p>Technika mrożeniowa</p> Signup and view all the answers

    Jakie barwniki są używane do wykrywania lipidów?

    <p>Sudan III i IV</p> Signup and view all the answers

    Która z poniższych reakcji jest używana do wykrywania kwasów nukleinowych DNA?

    <p>Reakcja Feulgena</p> Signup and view all the answers

    Jaką funkcję pełnią reakcje kontrolne w cytochemii?

    <p>Sprawdzają swoistość reakcji</p> Signup and view all the answers

    Jakie miejsce lokalizacji określa reakcja bezpośrednia?

    <p>Miejsce działania enzymu</p> Signup and view all the answers

    Jakie są różnice między przeciwciałami monoklonalnymi a poliklonalnymi?

    <p>Monoklonalne pochodzą z jednego klonu limfocytów B, a poliklonalne z kilku.</p> Signup and view all the answers

    Jakie znaczenie ma utrwalanie materiału w immunocytochemii?

    <p>Prawidłowe utrwalenie pozwala zachować antygenowość białek.</p> Signup and view all the answers

    Jakie substancje najczęściej stosuje się jako utrwalacze w technice parafinowej?

    <p>Zbuforowana 10% formalina i 4% paraformaldehyd.</p> Signup and view all the answers

    Jakie są etapy przygotowania materiału w technice mrożeniowej?

    <p>Odwodnienie, prześwietlenie, kryoprotekcja i zamrożenie.</p> Signup and view all the answers

    Co jest celem blokowania miejsc niespecyficznego wiązania w immunocytochemii?

    <p>Zredukowanie fałszywie pozytywnych reakcji.</p> Signup and view all the answers

    Jaka temperatura jest optymalna dla obróbki termicznej skrawków w celu odzyskania antygenowości?

    <p>99˚C przez 30 minut.</p> Signup and view all the answers

    Jakie białko może być używane do blokowania miejsc niespecyficznych w immunocytochemii?

    <p>Albumina surowicy bydlęcej (BSA).</p> Signup and view all the answers

    Jakie są skutki długiego czasu utrwalania materiału?

    <p>Powstawanie nieodwracalnych wiązań poprzecznych między białkami.</p> Signup and view all the answers

    Jakie jest główne zastosowanie mikroskopu kontrastowo-fazowego?

    <p>Do badania żywych komórek nie zabarwionych</p> Signup and view all the answers

    Jakie działanie ma mikroskop interferencyjny?

    <p>Przekształca różnice faz fal świetlnych w różnice ich amplitudy</p> Signup and view all the answers

    Co charakteryzuje mikroskop z optyką Nomarskiego?

    <p>Umożliwia znaczne wzmocnienie kontrastu nie zabarwionych struktur</p> Signup and view all the answers

    Jakie zjawisko wykorzystuje mikroskop pola ciemnego do obserwacji preparatu?

    <p>Dyfrakcji promieni świetlnych</p> Signup and view all the answers

    Jakie figury mogą być widoczne dzięki rozszczepianiu światła w mikroskopie?

    <p>Barwne części widma</p> Signup and view all the answers

    Jakie struktury można zaobserwować w mikroskopie pola ciemnego?

    <p>Drobne cząstki poniżej zdolności rozdzielczej</p> Signup and view all the answers

    Co umożliwia obliczenie współczynnika załamania światła w mikroskopie interferencyjnym?

    <p>Obliczenie ilości suchej masy badanych struktur</p> Signup and view all the answers

    Co jest celem mikroskopii kontrastowo-fazowej?

    <p>Przekształcenie przesunięcia fazy światła w zmianę amplitudy</p> Signup and view all the answers

    Czym charakteryzuje się hodowla pierwotna?

    <p>Zapoczątkowuje się ją przez pobranie komórek z organizmu.</p> Signup and view all the answers

    Co jest cechą charakterystyczną ustalonej linii komórkowej?

    <p>Można ją wielokrotnie pasażować do kolejnych hodowli.</p> Signup and view all the answers

    Jak można scharakteryzować szczep komórkowy?

    <p>Wyprowadza się go z hodowli pierwotnej lub linii komórkowej.</p> Signup and view all the answers

    Co jest istotnym krokiem przy przygotowaniu hodowli jednowarstwowej komórek?

    <p>Izolowanie komórek za pomocą trawienia enzymatycznego.</p> Signup and view all the answers

    Jakie typy hodowli komórkowych można wyróżnić?

    <p>Hodowla komórkowa 2D, w zawiesinie oraz w postaci agregatów.</p> Signup and view all the answers

    Co jest rolą pożywek w hodowlach komórkowych?

    <p>Zapewniają sterylne środowisko wzrostu.</p> Signup and view all the answers

    Jakie techniki stosuje się w celu uzyskania komórek do hodowli jednowarstwowej?

    <p>Rozdrabnianie tkanek mechaniczne.</p> Signup and view all the answers

    Czym różnią się hodowle narządowe statyczne od hodowli przepływowych?

    <p>W hodowli statycznej medium nie przepływa przez hodowlę.</p> Signup and view all the answers

    Jakie struktury można rozpoznać w mikroskopie pola ciemnego?

    <p>Włókna o grubości 5 nm</p> Signup and view all the answers

    Jaką rolę pełni pryzmat w mikroskopie polaryzacyjnym?

    <p>Polaryzuje światło</p> Signup and view all the answers

    Które z poniższych obiektów są widoczne w mikroskopie polaryzacyjnym?

    <p>Włókna kolagenowe</p> Signup and view all the answers

    Jakie zmiany powodują obiekty anizotropowe w zakresie polaryzacji światła?

    <p>Podwójne załamanie światła</p> Signup and view all the answers

    Jaką metodę badawczą wykorzystuje hybrydyzacja in situ?

    <p>Wiązanie komplementarne kwasów nukleinowych</p> Signup and view all the answers

    W jakim celu stosuje się mikroskop polaryzacyjny w histopatologii?

    <p>Do wykrywania złogów skrobiawiczych</p> Signup and view all the answers

    Które z poniższych twierdzeń jest prawdziwe dla obiektów izotropowych?

    <p>Nie zmieniają płaszczyzny polaryzacji</p> Signup and view all the answers

    Co jest podstawą funkcjonowania aparatu genetycznego w organizmach żywych?

    <p>Wiązanie komplementarne kwasów nukleinowych</p> Signup and view all the answers

    Study Notes

    Typy reakcji cytochemicznych

    • Reakcja bezpośrednia: substancja (np. enzym) reaguje z substratem, tworząc produkt wyznaczający jej lokalizację.
    • Reakcja dwu- lub kilkuetapowa: zmiana struktury szukanej substancji, a następnie reakcja barwna. Reakcje kilkuetapowe są bardziej czułe niż jednoetapowe.

    Wykrywanie związków chemicznych w cytochemii

    • Kwasy nukleinowe, cukry i niektóre białka: najlepiej badać w materiałach przygotowanych techniką parafinową.
    • Aminy biogenne (np. noradrenalina, adrenalina, histamina, serotonina): najlepiej w materiałach przygotowanych metodą liofilizacji.
    • Enzymy, tłuszcze: w technice mrożeniowej. Technika mrożeniowa pozwala badać wszystkie pozostałe substancje chemiczne.

    Przykłady reakcji cytochemicznych w mikroskopii świetlnej (MŚ):

    • Wykrywanie białek zawierających tyrozynę: reakcja Millona (białka wybarwiają się na kolor ceglastoczerwony).
    • Wykrywanie cukrowców: reakcja PAS (cukry wybarwiają się na kolor czerwony).
    • Wykrywanie lipidów: Sudan III i IV (tłuszcze pomarańczowe), czerń sudanowa, czerwień oleista.
    • Wykrywanie kwasów nukleinowych DNA: reakcja Feulgena.
    • Wykrywanie enzymów: oparte na uwidocznieniu produktów ich aktywności (wykrywany enzym musi być aktywny).

    Reakcje cytochemiczne:

    • Polegają na specyficznym wiązaniu barwników na drodze oddziaływań elektrostatycznych lub chemicznych.
    • Wybiórcze uwidacznianie niektórych substancji oparte na ich selektywnej rozpuszczalności w barwnikach.

    Reakcje kontrolne:

    • Przeprowadzane na innych skrawkach tkanek.
    • Sprawdzają swoistość reakcji cytochemicznych i wiarygodność uzyskanych wyników.

    Przeciwciała:

    • Przeciwciała monoklonalne: otrzymywane z jednego klonu limfocytów B, wykazują jednakową swoistość oraz powinowactwo względem tego samego antygenu (najlepsze do badań).
    • Przeciwciała poliklonalne: wykazują różne powinowactwo, ponieważ wiążą różne epitopy tego samego antygenu.

    Przygotowanie materiału do badań cytochemicznych i immunocytochemicznych w mikroskopie świetlnym (MŚ):

    • Pobieranie materiału: przyżyciowo (zabieg operacyjny, biopsja) lub pośmiertnie.
    • Utrwalanie materiału: kluczowe znaczenie w IHC. Najczęściej stosowane utrwalacze: zbuforowana 10% formalina (technika parafinowa) lub 4% paraformaldehyd (technika mrożeniowa).
    • Utrwalacze zachowują strukturę tkanki, ale wpływają na tworzenie się wiązań poprzecznych między białkami, zmieniając antygenowość.
    • Krótki czas utrwalania (45 minut - paraformaldehyd, 12-24h - formalina) wiązań jest odwracalny.

    Technika parafinowa:

    • Odwodnienie, prześwietlenie, przepojenie parafiną, zatopienie w parafinie.
    • Odzyskiwanie antygenowości:
      • usunięcie parafiny (ksylen),
      • obróbka termiczna w buforze cytrynowym (99oC, 30 minut),
      • odzyskiwanie epitopów metodą enzymatyczną (np. trypsyna).

    Blokowanie miejsc niespecyficznego wiązania w IHC:

    • Zapobiega fałszywie pozytywnym reakcjom i "tłu” maskującemu właściwy produkt reakcji.
    • Stosuje się: surowicę, BSA (Bovine Serum Albumin), odłuszczone mleko, żelatynę, bufory blokujące.

    Typy hodowli:

    • Hodowla pierwotna: pobranie komórek bezpośrednio z organizmu.
    • Linia komórkowa: przeniesienie części hodowli pierwotnej. Ustalona linia komórkowa może być pasażowana do kolejnych hodowli.
    • Szczep komórkowy: wyodrębnienie komórek o określonej cechy, która się utrzymuje w trakcie pasażowania.
    • Klon komórkowy: populacja komórek wywodząca się z jednej komórki macierzystej.

    Najczęściej stosowane typy hodowli:

    • Hodowle komórkowe:
      • jednowrstawowa komórek (2D),
      • komórek w zawiesinie,
      • komórek w postaci agregatów.
    • Hodowle tkanek:
      • narządowa statyczna,
      • narządowa przepływowa (medią inkubacyjne przepływa przez nią),
      • przestrzenna (3D).

    Przykład techniki hodowli jednowarstwowej komórek (2D):

    • Komórki pobiera się od zwierząt w różnym wieku.
    • Pobieranie wycinków narządów lub całych narządów.
    • Izolacja komórek: trawienie enzymatyczne spajającej je tkanki łącznej (jednostopniowe - trypsyna lub kolagenaza i hialuronidazą, dwustopniowe - kolagenaza, a następnie trypsyna), dodatkowo rozdrabnianie mechaniczne.
    • Stosuje się pożywki (medium inkubacyjne) (np. DMEM, HAMS F12) z dodatkiem surowicy.
    • Pożywki zapewniają: sterylne środowisko wzrostu (brak zanieczyszczenia mikroorganizmami, innymi komórkami lub substancjami toksycznymi).

    Mikroskop kontrastowo-fazowy:

    • Układ optyczny przekształca przesunięcie fazy światła w zmianę jej amplitudy.
    • Struktura w preparacie są widoczne w postaci skontrastowanej (ciemniejsze lub jaśniejsze).
    • Stosowany do badania nie zabarwionych, żywych komórek (np. z hodowli komórkowej).
    • Wzmacnia ogólny kontrast w słabo zabarwionych preparatach.

    Mikroskop interferencyjny:

    • Podobny do mikroskopu kontrastowo-fazowego.
    • Kondensor rozdziela wiązkę światła na dwie składowe (jedna przechodzi przez preparat, druga obok preparatu przez tło), dochodzi do interferencji.
    • Umożliwia obliczenie współczynnika załamania światła, służy do:
      • analizy ilościowej suchej masy badanych struktur,
      • określania grubości skrawków.
    • Układ optyczny rozszczepia światło białe, umożliwiając optyczne "wybarwienie" struktur.

    Mikroskop z optyką (kontrastem) Nomarskiego:

    • Modyfikacja mikroskopii kontrastowo-fazowej i interferencyjnej.
    • Wzmacnia kontrast nie zabarwionych struktur komórkowych.
    • Uzyskuje się plastyczny, nieomal trójwymiarowy obraz struktur.

    Mikroskop pola ciemnego:

    • Obserwacja w polu ciemnym umożliwia dostrzeżenie drobnych cząstek poniżej zdolności rozdzielczej układu optycznego (np. włókna o grubości 5 nm).
    • Wykorzystuje się dyfrakcję (ugięcie) promieni świetlnych na obiekcie.
    • Kondensor blokuje centralne promienie.
    • Obiekty widoczne jako świecące punkty na ciemnym tle.
    • Stosowany głównie do obserwacji mikroorganizmów w płynach ustrojowych.

    Mikroskop polaryzacyjny:

    • Służy do badań obiektów anizotropowych w świetle spolaryzowanym.
    • Układ optyczny posiada pryzmaty polaryzujące światło (uporządkowanie drgań fali świetlnej).
    • Obiekty:
      • izotropowe (nie zmieniają płaszczyzny polaryzacji),
      • anizotropowe (załamują podwójnie światło i zmieniają płaszczyznę polaryzacji).
    • Przykłady obiektów anizotropowych:
      • włókna kolagenowe,
      • zmineralizowana substancja międzykomórkowa tkanki kostnej,
      • miofibryle włókien mięśniowych poprzecznie prążkowanych.
    • Służy do wykrywania złogów skrobiawiczych (amyloidu) w komórkach.

    Hybrydyzacja in situ:

    • Metoda wykorzystująca komplementarne wiązanie łańcuchów kwasów nukleinowych (cytozynę z guaniną, adeninę z tymidyną/uracylem).
    • Swoistość wiązania leży u podstaw funkcjonowania aparatu genetycznego.

    Studying That Suits You

    Use AI to generate personalized quizzes and flashcards to suit your learning preferences.

    Quiz Team

    Related Documents

    Ćw. 2 Biologia Komórki 2023.pdf

    Description

    Quiz dotyczący typów reakcji cytochemicznych oraz metod wykrywania związków chemicznych w cytochemii. W teście znajdziesz pytania o reakcje bezpośrednie oraz dwu- i kilkuetapowe, a także ich zastosowania w mikroskopii świetlnej. Dowiedz się więcej o wykorzystaniu różnych technik w analizie chemicznej komórek.

    More Like This

    Use Quizgecko on...
    Browser
    Open
    Browser
    Browser