45 Questions
Quin és el principal avantatge del cultiu cel·lular en comparació amb l'estudi de cèl·lules dins d'un teixit?
Permet estudiar de manera controlada cèl·lules vives fora de l'organisme del qual provenen.
Quins són els tres tipus principals de cultius cel·lulars?
Primaris, secundaris i línies establertes.
Com s'obté un cultiu primari?
Mitjançant la purificació de les cèl·lules a partir d'un teixit.
Quin és el procés que es realitza per obtenir un cultiu secundari?
Tripsinització del cultiu primari.
Què caracteritza les línies establertes de cèl·lules?
Poden dividir-se indefinidament.
Quin és el resultat final del creixement de cèl·lules normals en un cultiu?
Ocupen tota la superfície de la placa o flascó que les conté.
Quin és el propòsit de la manipulació de cultius cel·lulars?
Aprendre les tècniques de manipulació de cultius cel·lulars.
Quines tècniques de detecció de cèl·lules es mencionen en el text?
Immunocitoquímica i FACS.
Quin és el paper de la tripsina en la preparació de cultius cel·lulars?
Trencar les unions establertes entre cèl·lules i entre cèl·lules-matriu extracel·lular.
Quin és l'objectiu de la immunohistoquímica amb anticossos específics contra la BrdU?
Detectar el percentatge de cèl·lules que estan o han passat per la fase S durant el període d’incubació amb la BrdU.
Quin és el paper de la BrdU en la detecció de cèl·lules en fase S?
La BrdU s'incorpora al DNA de les cèl·lules que estan en fase S i les marca.
Quin és l'objectiu de la tinció amb hematoxilina?
Detectar fàcilment les cèl·lules en mitosi.
Quin és l'avantatge de la citometria de flux?
Permet fer una anàlisi multiparamètrica ràpida de cèl·lules individualitzades en suspensió.
Quin és el paper dels citòmetres de flux?
Fer una anàlisi multiparamètrica ràpida de cèl·lules individualitzades en suspensió.
Com es marca les cèl·lules que estan en fase S?
Incorporant la BrdU en el seu DNA.
Quin és el-paper de la immunohistoquímica en la detecció de cèl·lules en fase S?
Detectar les cèl·lules que han incorporat la BrdU en el seu DNA.
Quin és l'avantatge de la tinció amb hematoxilina en la detecció de cèl·lules en mitosi?
Permet visualitzar bé els cromosomes mitòtics que estan molt condensats.
Quin és el procés que permet detectar les cèl·lules que han passat per la fase S?
La immunohistoquímica amb anticossos específics contra la BrdU.
Quin és el medi de cultiu que s'utilitza per al creixement de les cèl·lules RPE?
El medi de cultiu és DMEM/HAM’S-F-12 (HAM) enriquit amb factors de creixement (10 % FBS).
Per què es fa servir la tripsina en aquest protocol d'experiment?
La tripsina es fa servir per trencar les unions entre cèl·lules i entre cèl·lules i ECM.
Quin és el propòsit de Controlar el procés amb el microscopi invertit de contrast de fases?
El propòsit és controlar que les cèl·lules es desenganxen correctament.
Quin és el volum total del medi DMEM/HAM/10 % FBS que s'afegeix al tub de 50 ml?
El volum total del medi és de 10 ml.
Quin compost fluorescent es fa servir per intercalar-se en el DNA de les cèl·lules en un experiment de citometria de flux?
Iodur de propidi (IP)
Quin és el propòsit d'afegir BrdU a les cèl·lules?
No especificat en el text, però generalment s'utilitza per marcar les cèl·lules que estan en divisió.
Quin és el diàmetre intern de la placa P35?
El diàmetre intern de la placa P35 és de 34 mm.
Quin és el propòsit de permeabilitzar les cèl·lules amb un detergent en un experiment de citometria de flux?
Per possibilitar l'entrada de l'iodur de propidi (IP) a través de la membrana plasmàtica.
Quin és el principi de funcionament del citòmetre de flux?
Les cèl·lules viatgen individualitzades en fila per dins d'un capil·lar i s'il·luminen amb un làser, emetent fluorescència en una quantitat proporcional a l'IP que han incorporat en el seu DNA.
Quin és el temps d'espera després d'afegir la tripsina?
S'ha d'esperar de 2 a 4 minuts fins que les cèl·lules es desenganxen.
Quin és el propòsit d'afegir FBS 10 % al medi?
El FBS 10 % conté molècules que inhibeixen l'activitat de la tripsina.
Quin és el producte final de l'anàlisi de les cèl·lules amb el citòmetre de flux?
Un histograma que representa el nombre de cèl·lules que es troben en cadascuna de les fases del cicle cel·lular segons la seva quantitat de DNA.
Quin és el volum de la tripsina que s'utilitza?
El volum de la tripsina és de 1 ml.
Quin és el paràmetre que es mesura directament amb el citòmetre de flux?
La quantitat de fluorescència emesa per cada cèl·lula.
Com es relaciona la quantitat de DNA amb la quantitat de fluorescència emesa per cada cèl·lula?
La quantitat de fluorescència emesa per cada cèl·lula és proporcional a la quantitat de DNA en la cèl·lula.
Quin és el propòsit de mesurar el nombre de cèl·lules que es troben en cadascuna de les fases del cicle cel·lular?
Per entendre el comportament de les cèl·lules en diferents moments del cicle cel·lular.
Quin és el rol del detector en el citòmetre de flux?
Captar la fluorescència emesa per cada cèl·lula.
Quin és el producte final que es representa en un histograma després de l'anàlisi de les cèl·lules amb el citòmetre de flux?
El nombre de cèl·lules que es troben en cadascuna de les fases del cicle cel·lular.
Quin és el mecanisme que trenca el corrent líquid en petites gotes en la fase posterior a l’anàlisi de fluorescència?
Un mecanisme d’ultrasons.
Quin és el propòsit de donar una càrrega positiva o negativa a les gotes carregades?
Seguir les gotes amb càrrega positiva o negativa a contenidors diferents.
Quin és el nom de l’aparell que realitza l’anàlisi de fluorescència i la separació de les cèl·lules?
FACS (Fluorescence Activated Cell Sorter)
Per què les cèl·lules han de ser incubades amb BrdU durant 20 hores?
Perquè es requereix per a la preparació de les cèl·lules.
Quin és el propòsit de posar cobreobjectes de vidre a les plaques?
Perquè les cèl·lules puguin créixer a sobre i fer-hi la immunocitoquímica.
Quin és el procés que es fa després de l’anàlisi de fluorescència?
La separació de les cèl·lules segons la seva càrrega.
Quin és el nom del llibre que es menciona com a font?
Molecular Biology of the Cell, de Alberts et al.
Quin és el propòsit de la incubació de les cèl·lules amb BrdU?
Per preparar les cèl·lules per a la manipulació i l’anàlisi.
Quin és el grau i la universitat on es desenvolupa aquesta pràctica?
10 Grau Medicina, UB.
Study Notes
Cultius Cel·lulars
- El cultiu cel·lular és una tècnica que permet estudiar de manera controlada cèl·lules vives fora de l’organisme del qual provenen.
- El cultiu cel·lular es preparen a partir d’una suspensió cel·lular obtinguda mitjançant el trencament previ de les unions establertes entre cèl·lules i entre cèl·lules-matriu extracel·lular (ECM) d’un teixit.
- Hi ha tres tipus principals de cultius: primaris, secundaris i línies establertes.
- Un cultiu primari és el primer cultiu de cèl·lules purificades que s’obté a partir d’un teixit.
- Un cultiu secundari s’obté mitjançant la tripsinització del cultiu primari.
- Les línies establertes són cèl·lules que per alguna raó s’han adaptat a un creixement prolongat in vitro.
Mètodes per detectar cèl·lules en les fases del cicle cel·lular
- La BrdU és una substància que es incorpora al DNA de les cèl·lules en fase S.
- La immunocitoquímica amb anticossos específics contra la BrdU permet detectar el percentatge de cèl·lules que estan o han passat per la fase S durant el període d’incubació amb la BrdU.
- La tinció amb hematoxilina permet detectar les cèl·lules en mitosi.
- La citometria de flux és una tecnologia que ens permet fer una anàlisi multiparamètrica ràpida de cèl·lules individualitzades en suspensió.
- El citòmetre de flux és un aparell que mesura la quantitat de DNA de cada cèl·lula i permet identificar les cèl·lules que es troben en cadascuna de les fases del cicle cel·lular.
FACS (Fluorescent Activated Cell Sorter)
- El FACS és un aparell que combina la citometria de flux amb la possibilitat de separar les cèl·lules en funció de les seves característiques.
- El FACS permet mesurar la quantitat de DNA de cada cèl·lula i, posteriorment, separar les cèl·lules en funció de les seves característiques.
- El FACS és útil per a la separació de cèl·lules específiques dins d’una població cel·lular complexa.
Aquest qüestionari tracta sobre els cultius cel·lulars, les tècniques de detecció de cèl·lules en les fases del cicle cel·lular i els mètodes per a la seva manipulació.
Make Your Own Quizzes and Flashcards
Convert your notes into interactive study material.
Get started for free
