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Questions and Answers
¿Cuánto volumen de muestra se inyecta en total y cuánto de este volumen pasa finalmente a la columna cromatográfica?
¿Cuánto volumen de muestra se inyecta en total y cuánto de este volumen pasa finalmente a la columna cromatográfica?
Se inyectan 10 µL, de los cuales solo 3 µL pasan a la columna cromatográfica.
¿Qué sucede con el exceso de muestra que no pasa a la columna?
¿Qué sucede con el exceso de muestra que no pasa a la columna?
El exceso de muestra, en este caso 7 µL, es enviado a un recipiente de descarte.
¿Cuál es la función del loop en el sistema de inyección?
¿Cuál es la función del loop en el sistema de inyección?
El loop se utiliza para cargar una cantidad fija de muestra, asegurando que esté libre de burbujas y completamente llena.
¿Por qué los picos se espera que sean más anchos en HPLC en comparación con GC?
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¿Cómo afecta la sobrecarga a la precisión del análisis en HPLC?
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¿Por qué es importante no despresurizar el sistema al inyectar la muestra?
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¿Qué papel tiene la bomba en el sistema de inyección de HPLC?
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¿Qué se debe considerar al inyectar los volúmenes de muestra en HPLC?
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¿Cómo afecta un cambio en la presión y la velocidad de flujo a los tiempos de retención?
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¿Cuál es la capacidad de un inyector típico en cromatografía y por qué es relevante?
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¿Qué diferencia hay entre los disolventes utilizados en UPLC y HPLC?
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¿Qué características se buscan en un disolvente para su uso en cromatografía?
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¿Por qué es importante filtrar las muestras antes de la análisis?
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¿Qué problemas puede causar el uso de benceno como disolvente en UV?
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¿Cuál es la duración típica de los productos utilizados en cromatografía?
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¿Qué implica la miscibilidad en el contexto de disolventes?
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¿Cuál es el propósito principal de los filtros a la entrada de solvente en los equipos?
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¿Cómo funciona el método de burbujeo de helio para la desgasificación?
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¿Cuáles son los requisitos que deben cumplir las bombas de alta presión?
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¿Por qué las bombas recíprocas son preferidas en muchos sistemas?
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¿Qué características debe tener una bomba utilizada en sistemas de alta presión?
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¿Qué se entiende por un sistema de desgasificación al vacío?
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¿Cómo afecta una bomba sobre la retención de tiempo en el sistema?
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¿Qué diferencia hay entre un sistema isocrático y uno no isocrático?
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¿Cuál es la principal desventaja de las bombas neumáticas en HPLC?
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¿Qué tipo de elución se asemeja a isotérmico en GC y por qué?
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¿Qué función tienen las precolumnas en el HPLC?
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¿Cómo afectan las interacciones entre analitos y la fase móvil en HPLC?
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¿Por qué es complicado realizar elución en gradiente con bombas de desplazamiento?
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¿Cuál es la característica de las bombas de desplazamiento en comparación con las neumáticas?
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¿Qué estrategia se puede emplear si los picos salen 'disparados' durante el análisis?
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¿Qué material suelen usar las columnas en HPLC y por qué?
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Study Notes
Introducción a la Cromatografía Líquida de Alta Resolución (CLAR)
- La cromatografía es un método físico basado en la distribución de componentes de una mezcla (entre dos fases inmiscibles: estacionaria y móvil).
- En CLAR, la fase móvil es líquida, que fluye a través de una columna con la fase fija.
- Csaba Horváth desarrolló el primer HPLC (Cromatografía Líquida de Alta Eficiencia).
CLAR: Metodología y Aplicaciones
- CLAR es ampliamente utilizada por su alta sensibilidad, adaptabilidad a la cuantificación y capacidad para separar especies termolábiles y no volátiles.
- Las aplicaciones incluyen el análisis de aminoácidos, carbohidratos, terpenoides, plaguicidas, esteroides, hidrocarburos, drogas, proteínas y antibióticos.
- CLAR es fundamental en la ciencia, industria y sociedad.
Cromatografía Líquida de Alta Resolución: Instrumentación
- El proceso involucra un reservorio de fase móvil, bomba, inyector, columna, desgasificador ,y detector.
- Se utilizan precolumnas para prolongar la vida útil de la columna analítica y eliminar contaminantes.
Sistemas de Inyección
- Los volúmenes suelen ser pequeños, típicamente 10 µL.
- Se inyecta con una jeringa y la muestra pasa a una sección de la columna.
- El exceso de la muestra y las impurezas se envían a un recipiente separado.
Elución: Isocrática vs. Gradiente
- La elución isocrática mantiene una composición constante de la fase móvil durante el experimento.
- La elución con gradiente modifica la composición de la fase móvil a lo largo del tiempo para optimizar la separación de componentes.
Fase Móvil
- Es el líquido que transporta la muestra a través de la columna.
- La polaridad de la fase móvil afecta la separación, y se elige apropiadamente dependiendo de la muestra.
Filtración
- Se utiliza la filtración para remover partículas sólidas, especialmente para HPLC.
- Los métodos incluyen filtración al vacío, a la entrada del solvente y en línea.
Desgasificación de Solventes
- Para eliminar las impurezas gaseosas como oxígeno o dióxido de carbono, se utilizan técnicas como sonicación, burbujeo de helio y desgasificación por vacío en línea.
Bombas de Alta Presión
- Las bombas de alta presión son esenciales en CLAR para impulsar la fase móvil a través de la columna.
- Se describen tres tipos principales: recíprocas, de desplazamiento y neumáticas; cada una con ventajas y desventajas en cuanto a precisión y costo.
Columnas: Clasificación y Caracterización
- Las columnas en HPLC se clasifican por su material (acero inoxidable o vidrio), longitud, diámetro interno, y tipo de relleno (partícula porosa o pelicular).
- Se mencionan las precolumnas, las cuales se utilizan para prolongar la vida útil de la columna.
- El diámetro de la columna y la cantidad de relleno son variables clave en la resolución.
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Description
Este cuestionario cubre la introducción y metodología de la Cromatografía Líquida de Alta Resolución, también conocida como CLAR. Se abordarán sus aplicaciones en análisis químico y la instrumentación básica necesaria para llevar a cabo este método. Ideal para aquellos que buscan profundizar en la técnica y sus usos en la ciencia y la industria.