CRISPR-Cas Edición Genómica en Levaduras

Tecnología que permite la edición precisa y eficiente del ADN genómico en cualquier organismo.

ARN guía que dirige la enzima Cas9 al lugar específico del ADN para su edición.

Técnica de amplificación de ADN.

Herramienta para diseñar sgRNAs para CRISPR-Cas9.

Modificación del ADN de la levadura Saccharomyces cerevisiae usando CRISPR-Cas9 y PCR.

Sistema de defensa inmunológica en bacterias y arqueas, usado en edición genética.

Reparación de unión de extremos no homólogos; método de reparación del ADN, menos preciso.

Enzima endonucleasa que corta el ADN en una secuencia específica.

Inserción o deleción de nucleótidos en el ADN.

Recoge y guarda fragmentos genéticos de invasores (bacteriófagos, plásmidos) en forma de crRNAs y los usa para neutralizar futuras infecciones.

Pequeñas moléculas de ARN que contienen secuencias complementarias a los invasores y guían a las enzimas Cas a ellos.

Endonucleasas (cortan ADN o ARN) que se asocian a los crRNAs y degradan el material genético invasor.

Contiene repeticiones intercaladas con secuencias espaciadoras de origen exógeno (de invasores). Es la 'memoria' del sistema.

Se divide en 2 clases (1 y 2), 5 tipos (I, II, III, IV, V, VI) y 16 subtipos, basándose en sus componentes y mecanismos.

El sistema CRISPR captura fragmentos de ADN o ARN de invasores y los inserta en la región CRISPR como protoespaciadores.

Fragmentos de ADN o ARN invasor que se insertan en la región CRISPR, convirtiéndose en 'recuerdos' de los ataques.

El dominio HNH es una parte de la enzima Cas9 que corta la cadena de ADN complementaria al crRNA durante el proceso de escisión del ADN.

El dominio RuvC es una parte de la enzima Cas9 que corta la cadena de ADN no complementaria al crRNA durante el proceso de escisión del ADN.

Una DSB (rotura de doble cadena) es una ruptura en ambas cadenas de ADN.

El NHEJ es un mecanismo de reparación del ADN que une los extremos rotos de una DSB sin necesidad de una plantilla. Este proceso es propenso a errores y puede causar indels (inserciones o eliminaciones de nucleótidos).

Los indels son inserciones o eliminaciones de nucleótidos en el ADN.

El HDR es un mecanismo de reparación del ADN que utiliza una secuencia de ADN exógena homóloga como plantilla para reparar una DSB. Es un proceso más preciso que el NHEJ y permite introducir modificaciones dirigidas en el ADN.

Una secuencia exógena es una secuencia de ADN que proviene de fuera de la célula.

La edición genómica es la modificación del ADN de un organismo con el fin de cambiar sus características.

CRISPR-Cas destaca por su simplicidad, eficiencia, bajo costo y rapidez en comparación con otras tecnologías de edición genética como ZFNs y TALENs.

CRISPR-Cas funciona mediante un sgRNA que dirige la enzima Cas9 a una secuencia específica de ADN, donde genera una rotura de doble cadena que puede ser aprovechada para introducir modificaciones.

Saccharomyces cerevisiae, una levadura de uso común, se utiliza como modelo biológico en ingeniería genética debido a la simplicidad de su genoma y su alta capacidad para generar proteínas.

Las secuencias delta son regiones del genoma de la levadura Saccharomyces cerevisiae que se usan para insertar genes mediante recombinación homóloga, permitiendo realizar modificaciones genéticas.

La proteína fluorescente verde (GFP) se utiliza como marcador para visualizar la inserción de genes, ya que la célula que la expresa emite luz verde bajo la iluminación adecuada.

Los cebadores son secuencias cortas de ADN que se utilizan para amplificar un gen específico mediante PCR, y son esenciales para la introducción precisa y eficiente del gen deseado.

La recombinación homóloga es un proceso natural que permite intercambiar segmentos de ADN entre cromosomas homólogos. Se utiliza para insertar genes específicos en el genoma.

Para editar el genoma de S. cerevisiae se diseña un sgRNA específico y se introduce el gen gfp en las secuencias delta mediante recombinación homóloga, usando cebadores específicos.