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SIMULACRO test 5E Clonación de ADN y vectores genéticos
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SIMULACRO test 5E Clonación de ADN y vectores genéticos

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@HardierUvarovite

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Questions and Answers

La clonación de ADN, o clonación molecular, es la introducción de un fragmento de ADN denominado inserto dentro de una molécula de ADN denominada:

  • Plásmido
  • Vector (correct)
  • Genoma
  • Transecto

    • El inserto puede ser ADN obtenido de cualquier organismo y puede permanecer como :

  • ADN complementario
  • Producto de la retrotranscripción del ARN
  • Todas (correct)
  • ADN genómico

    • La clonación de un fragmento de ADN comporta una serie de procedimientos tales como:

  • Método para cortar ADN
  • Selección de un vector de clonación
  • Todos ellos (correct)
  • Método para unión covalente de fragmentos de ADN

    • Para cortar ADN se necesita:

    <p>Endonucleasa de restricción</p> Signup and view all the answers

    La anterior enzima lleva una nomenclatura específica que consiste en, señale la falsa:

    <p>2 mayúsculas con la secuencia de inicio (ori) de corte</p> Signup and view all the answers

    La ADN-ligasa une fragmentos de ADN produciendo:

    <p>Todos ellos</p> Signup and view all the answers

    Qué tipo de vector es preciso para un inserto del tamaño de 120 kb:

    <p>PACs</p> Signup and view all the answers

    Qué tipo de vector es preciso para un inserto del tamaño de 35 kb:

    <p>Cósmidos</p> Signup and view all the answers

    Qué tipo de vector es preciso para un inserto del tamaño de 1 Mb :

    <p>YACs</p> Signup and view all the answers

    Los vectores son de clonación si su finalidad es :

    <p>El almacenamiento de secuencias y la obtención de grandes cantidades del ADN insertado o de la molécula recombinante</p> Signup and view all the answers

    Los vectores de expresión pueden ser :

    <p>B y C</p> Signup and view all the answers

    Los vectores de clonación pueden ser :

    <p>Todas</p> Signup and view all the answers

    Un vector de clonación contiene elementos tales como :

    <p>Todos ellos</p> Signup and view all the answers

    Un vector de expresión contiene elementos tales como

    <p>Todos ellos</p> Signup and view all the answers

    Quién presenta un sitio de PoliA:

    <p>Vector de expresión</p> Signup and view all the answers

    Señale la incorrecta sobre el Marcador de selección :

    <p>En general, los marcadores de selección son varios en los vectores, aunque existen algunos plásmidos que contienen uno</p> Signup and view all the answers

    Los sitios de restricción más comunes presentes en el sitio de clonación múltiple de la mayoría de los vectores son para las enzimas :

    <p>Todas son correctas</p> Signup and view all the answers

    Qué es la región naranja en el vector superior:

    <p>Marcador de selección</p> Signup and view all the answers

    Se construyen a partir de la ligación de fragmentos de ADN de gran tamaño con genomas de levadura modificados que contienen genes de resistencia a antibióticos, secuencias teloméricas y de codificación para centrómeros:

    <p>YAC</p> Signup and view all the answers

    Indique la correcta:

    <p>Los plásmidos usados como vector en general están formados por de 2 a 5 kb de ADN</p> Signup and view all the answers

    Cromosoma bacteriano, permite la ligación de fragmentos grandes de ADN que contienen secuencias de resistencia a antibióticos, y sitio de clonación múltiple :

    <p>BAC</p> Signup and view all the answers

    Ejecutan complejos procesos de conjugación, como la transferencia sexual de plásmidos a otra bacteria:

    <p>Plásmidos conjugativos</p> Signup and view all the answers

    Hay 5 clases principales plásmidos clasificados por su función, entre ellos:

    <p>Todos ellos</p> Signup and view all the answers

    En el maxiprep, se cultivan volúmenes mucho más grandes de bacterias en suspensión. Esencialmente este es un escalado de la preparación mini-prep, el cual es seguido por una purificación adicional. Esto resulta en una cantidad relativamente grande ............................ de ADN plásmido muy puro:

    <p>0,5 -1 mg</p> Signup and view all the answers

    El ADN plásmido puede aparecer en una de cinco conformaciones, las cuales (para un tamaño dado) corren a diferentes velocidades en un gel durante electroforesis, el más rápido es:

    <p>ADN superespiral</p> Signup and view all the answers

    El bacteriófago lambda es el fago más utilizado como vector de clonación, y su genoma consiste :

    <p>Molécula lineal de aproximadamente 45000 pb</p> Signup and view all the answers

    Los vectores anteriores permiten la clonación de fragmentos de hasta:

    <p>23000 pb</p> Signup and view all the answers

    Algunos estudios de análisis de ADN genómico requieren de la clonación de fragmentos de ADN grandes. En estos casos, es recomendable utilizar los cósmidos ya que pueden aceptar insertos de hasta :

    <p>45000 pb</p> Signup and view all the answers

    . Señale la incorrecta acera de los cósmidos :

    <p>Los cósmidos derivados del fago P1 pueden admitir 85 kb de ADN endógeno</p> Signup and view all the answers

    Son vectores que combinan las características de un fago filamentoso (M13) y un plásmido (pBR323) y contienen tanto el origen de replicación del fago como del plásmido :

    <p>Fásmido</p> Signup and view all the answers

    Estos vectores se desarrollaron con el objetivo de clonar grandes segmentos de cromosomas eucarióticos. Son fragmentos de ADN de mayor tamaño (cientos de kilobases) que pueden clonarse en cromosomas artificiales de bacterias (BAC) o levadura (YAC):

    <p>Cromosoma artificial</p> Signup and view all the answers

    Un BAC es un constructo derivado del plásmido F (functional fertility plasmid) capaz de regular la distribución equitativa de plásmidos después de la división bacteriana. Usualmente, acepta insertos de .............. kb :

    <p>150-350 kb</p> Signup and view all the answers

    Los .......................... contienen telómeros, origen de replicación, un centrómero de levadura y un marcador de selección para su identificación en las células que los contengan. Su capacidad de clonación es de 100 a 1000 kb:

    <p>YAC</p> Signup and view all the answers

    Aunque los BAC y los PAC aceptan fragmentos menores que los YAC tienen algunas ventajas:

    <p>Todas las anteriores</p> Signup and view all the answers

    Una familia de vectores de clonación que ofrecen el promotor de 7SK RNA polimerasa III humano y una selección de marcadores para la clonación de los insertos siRNA/shRNA. Permiten la expresión de uno o dos shRNAs en un plásmido estándar o un plásmido CpG free:

    <p>psiRNA™ Vectors</p> Signup and view all the answers

    A la introducción de un vector a una célula eucariota se le denomina :

    <p>Transfección</p> Signup and view all the answers

    A la introducción de un vector vírico a una célula eucariota se le denomina :

    <p>Transducción</p> Signup and view all the answers

    Para la clonación es preciso :

    <p>Preparar células competentes</p> Signup and view all the answers

    Según el tipo de extremos que se generan con el corte por las enzimas de restricción del vector e inserto que se va a clonar, en este caso:

    <p>Cohesivos con cohesivos</p> Signup and view all the answers

    Preparación del vector para clonación, son etapas:

    <p>todas ellas</p> Signup and view all the answers

    La ligación de un segmento de ADN exógeno a un vector involucra la formación de enlaces . ............................ entre los residuos fosfato que se localizan en los extremos 5’ de la cadena de ADN y los residuos hidroxilo 3’:

    <p>Fosfodiéster</p> Signup and view all the answers

    Para su replicación, los vectores requieren encontrarse dentro de una célula, que debe prepararse para hacerla permeable a la entrada del vector recombinante, proceso denominado generación de células competentes. Las células competentes generalmente son células procariotas. Uno de los métodos de competencia más utilizados consiste en tratar las bacterias con una solución de :

    <p>CaCl2</p> Signup and view all the answers

    Cabe resaltar que el termino transformación se refiere a:

    <p>La introducción de material genético a través de vectores a las bacterias</p> Signup and view all the answers

    Cabe resaltar que el termino transfección se refiere a:

    <p>Implica la introducción del material genético en las células empleando agentes químicos o físicos</p> Signup and view all the answers

    Transformación por electroporación: consiste en la aplicación de breves pulsos eléctricos de alto voltaje (> 1500 V/5 ms) a las células receptoras, para formar poros en la membrana plasmática en células eucariotas y/o la pared celular en bacterias. Los componentes de la membrana se desestabilizan, lo que permite la entrada del vector al citoplasma de la célula. Esta es la técnica de transformación bacteriana más eficiente, ya que se obtienen alrededor de ................................ células transformadas/µg de plásmido:

    <p>1 × 10*8</p> Signup and view all the answers

    Para identificar las bacterias transformadas se utilizan marcadores de selección proporcionados por los vectores:

    <p>Los más utilizados son los genes de resistencia a antibióticos, como la ampicilina, la tetraciclina, el cloramfenicol y la kanamicina</p> Signup and view all the answers

    La clonación por PCR se basa en un proceso llamado ligación, el cual es un método para insertar un fragmento de ADN dentro de un vector usando una ADN ligasa. La razón por la cual la ligación es importante en este paso es porque es responsable de insertar el producto de PCR dentro un un plásmido con una:

    <p>cola T</p> Signup and view all the answers

    . La técnica de clonación lisa o sin costuras:

    <p>se basa en alinear secuencias cortas del extremo del fragmento de ADN a secuencias cortas en el plásmido vector. El método CL requiere una enzima con actividad 5’ a 3’ exonucleasa para crear proyecciones 3’, una ADN polimerasa para llenar los vacíos, y una ADN ligasa para unir los fragmentos rotos de las salientes de ADN</p> Signup and view all the answers

    La técnica de Ligación Independiente de Clonación:

    <p>es llevada a cabo generando secuencias cortas en el extremo del inserto de ADN que se alinean a secuencias cortas en el plásmido vector. Las enzimas con actividad 3’ a 5’ exonucleasa eliminan los extremos 3’ y generan extremos cohesivos entre el fragmento de ADN y el vector lineal. Los dos materiales son luego combinados para el paso de alineación</p> Signup and view all the answers

    La técnica de Clonación por recombinación:

    <p>Este método requiere enzimas recombinasas de ADN sitio-específicas, las cuales intercambian y recombinan piezas de ADN con sitios de recombinación particulares</p> Signup and view all the answers

    Study Notes

    Clonación de ADN

    • La clonación molecular permite introducir un fragmento de ADN (inserto) dentro de una molécula de ADN (vector).
    • El inserto puede ser ADN de cualquier organismo y puede permanecer como un fragmento libre o estar integrado en el vector.

    Procedimientos de clonación

    • Para cortar ADN se requieren enzimas de restricción específicas.
    • La ADN-ligasa une fragmentos de ADN, formando enlaces covalentes.

    Tipos de vectores según tamaño del inserto

    • Vectores para insertos de 120 kb son necesarios para grandes fragmentos.
    • Vectores de 35 kb pueden aceptar tamaños más reducidos.
    • Vectores para insertos de 1 Mb son necesarios para fragmentos aún mayores.

    Funciones de vectores

    • Vectores de clonación se utilizan para replicar y almacenar fragmentos de ADN.
    • Vectores de expresión permiten la producción de proteínas a partir de los genes clonados.

    Componentes de los vectores

    • Los vectores de clonación incluyen elementos como el origen de replicación y un marcador de selección.
    • Los vectores de expresión también contienen promotores y secuencias de polímeros.

    Plásmidos y bacteriófagos

    • Los plásmidos se clasifican por función, permitiendo la ligación de fragmentos de ADN grandes.
    • El bacteriófago lambda es un vector común con un genoma lineal.

    Métodos de purificación

    • La técnica de maxiprep cultiva grandes volúmenes de bacterias para obtener ADN plásmido puro.
    • Los plásmidos pueden aparecer en distintas conformaciones en un gel de electroforesis.

    Vectores para grandes segmentos de ADN

    • Los cósmidos aceptan insertos de grandes tamaños, útiles para estudios genómicos.
    • Los BAC y YAC permiten la clonación de fragmentos de ADN de cientos de kilobases.

    Técnicas de transformación

    • La introducción de un vector en células eucariotas se denomina transfección, mientras que en células procariotas se llama transformación.
    • Las células competentes son tratadas para facilitar la entrada de vectores, utilizando soluciones específicas.

    Métodos de competitividad

    • La electroporación aplica pulsos eléctricos a las células, creando poros en la membrana para la entrada de vectores.
    • Esta técnica es altamente efectiva, generando un gran número de células transformadas.

    Proceso de ligación

    • La clonación por PCR utiliza ligación para integrar fragmentos de ADN en vectores mediante una ADN ligasa.
    • La técnica de ligación independiente de clonación permite la inserción del ADN sin la necesidad de enzimas de restricción.

    Métodos de clonación avanzada

    • La clonación por recombinación es otra técnica utilizada para insertar ADN en vectores de manera eficiente.

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    Este cuestionario evalúa el conocimiento sobre la clonación molecular y la introducción de fragmentos de ADN en moléculas de ADN. Incluye preguntas sobre vectores genéticos y tipos de insertos de ADN.

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