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Questions and Answers
La clonación de ADN, o clonación molecular, es la introducción de un fragmento de ADN
denominado inserto dentro de una molécula de ADN denominada:
La clonación de ADN, o clonación molecular, es la introducción de un fragmento de ADN denominado inserto dentro de una molécula de ADN denominada:
El inserto puede ser ADN obtenido de cualquier organismo y puede permanecer como :
El inserto puede ser ADN obtenido de cualquier organismo y puede permanecer como :
La clonación de un fragmento de ADN comporta una serie de procedimientos tales como:
La clonación de un fragmento de ADN comporta una serie de procedimientos tales como:
Para cortar ADN se necesita:
Para cortar ADN se necesita:
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La anterior enzima lleva una nomenclatura específica que consiste en, señale la falsa:
La anterior enzima lleva una nomenclatura específica que consiste en, señale la falsa:
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La ADN-ligasa une fragmentos de ADN produciendo:
La ADN-ligasa une fragmentos de ADN produciendo:
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Qué tipo de vector es preciso para un inserto del tamaño de 120 kb:
Qué tipo de vector es preciso para un inserto del tamaño de 120 kb:
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Qué tipo de vector es preciso para un inserto del tamaño de 35 kb:
Qué tipo de vector es preciso para un inserto del tamaño de 35 kb:
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Qué tipo de vector es preciso para un inserto del tamaño de 1 Mb :
Qué tipo de vector es preciso para un inserto del tamaño de 1 Mb :
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Los vectores son de clonación si su finalidad es :
Los vectores son de clonación si su finalidad es :
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Los vectores de expresión pueden ser :
Los vectores de expresión pueden ser :
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Los vectores de clonación pueden ser :
Los vectores de clonación pueden ser :
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Un vector de clonación contiene elementos tales como :
Un vector de clonación contiene elementos tales como :
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Un vector de expresión contiene elementos tales como
Un vector de expresión contiene elementos tales como
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Quién presenta un sitio de PoliA:
Quién presenta un sitio de PoliA:
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Señale la incorrecta sobre el Marcador de selección :
Señale la incorrecta sobre el Marcador de selección :
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Los sitios de restricción más comunes presentes en el sitio de clonación múltiple de la
mayoría de los vectores son para las enzimas :
Los sitios de restricción más comunes presentes en el sitio de clonación múltiple de la mayoría de los vectores son para las enzimas :
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Qué es la región naranja en el vector superior:
Qué es la región naranja en el vector superior:
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Se construyen a partir de la ligación de fragmentos de ADN de gran tamaño con genomas
de levadura modificados que contienen genes de resistencia a antibióticos, secuencias
teloméricas y de codificación para centrómeros:
Se construyen a partir de la ligación de fragmentos de ADN de gran tamaño con genomas de levadura modificados que contienen genes de resistencia a antibióticos, secuencias teloméricas y de codificación para centrómeros:
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Indique la correcta:
Indique la correcta:
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Cromosoma bacteriano, permite la ligación de fragmentos grandes de ADN que contienen
secuencias de resistencia a antibióticos, y sitio de clonación múltiple :
Cromosoma bacteriano, permite la ligación de fragmentos grandes de ADN que contienen secuencias de resistencia a antibióticos, y sitio de clonación múltiple :
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Ejecutan complejos procesos de conjugación, como la transferencia sexual de plásmidos a
otra bacteria:
Ejecutan complejos procesos de conjugación, como la transferencia sexual de plásmidos a otra bacteria:
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Hay 5 clases principales plásmidos clasificados por su función, entre ellos:
Hay 5 clases principales plásmidos clasificados por su función, entre ellos:
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En el maxiprep, se cultivan volúmenes mucho más grandes de bacterias en suspensión.
Esencialmente este es un escalado de la preparación mini-prep, el cual es seguido por una
purificación adicional. Esto resulta en una cantidad relativamente grande ............................
de ADN plásmido muy puro:
En el maxiprep, se cultivan volúmenes mucho más grandes de bacterias en suspensión. Esencialmente este es un escalado de la preparación mini-prep, el cual es seguido por una purificación adicional. Esto resulta en una cantidad relativamente grande ............................ de ADN plásmido muy puro:
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El ADN plásmido puede aparecer en una de cinco conformaciones, las cuales (para un
tamaño dado) corren a diferentes velocidades en un gel durante electroforesis, el más
rápido es:
El ADN plásmido puede aparecer en una de cinco conformaciones, las cuales (para un tamaño dado) corren a diferentes velocidades en un gel durante electroforesis, el más rápido es:
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El bacteriófago lambda es el fago más utilizado como vector de clonación, y su genoma
consiste :
El bacteriófago lambda es el fago más utilizado como vector de clonación, y su genoma consiste :
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Los vectores anteriores permiten la clonación de fragmentos de hasta:
Los vectores anteriores permiten la clonación de fragmentos de hasta:
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Algunos estudios de análisis de ADN genómico requieren de la clonación de fragmentos de
ADN grandes. En estos casos, es recomendable utilizar los cósmidos ya que pueden
aceptar insertos de hasta :
Algunos estudios de análisis de ADN genómico requieren de la clonación de fragmentos de ADN grandes. En estos casos, es recomendable utilizar los cósmidos ya que pueden aceptar insertos de hasta :
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. Señale la incorrecta acera de los cósmidos :
. Señale la incorrecta acera de los cósmidos :
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Son vectores que combinan las características de un fago filamentoso (M13) y un plásmido
(pBR323) y contienen tanto el origen de replicación del fago como del plásmido :
Son vectores que combinan las características de un fago filamentoso (M13) y un plásmido (pBR323) y contienen tanto el origen de replicación del fago como del plásmido :
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Estos vectores se desarrollaron con el objetivo de clonar grandes segmentos de
cromosomas eucarióticos. Son fragmentos de ADN de mayor tamaño (cientos de
kilobases) que pueden clonarse en cromosomas artificiales de bacterias (BAC) o levadura
(YAC):
Estos vectores se desarrollaron con el objetivo de clonar grandes segmentos de cromosomas eucarióticos. Son fragmentos de ADN de mayor tamaño (cientos de kilobases) que pueden clonarse en cromosomas artificiales de bacterias (BAC) o levadura (YAC):
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Un BAC es un constructo derivado del plásmido F (functional fertility plasmid) capaz de
regular la distribución equitativa de plásmidos después de la división bacteriana.
Usualmente, acepta insertos de .............. kb :
Un BAC es un constructo derivado del plásmido F (functional fertility plasmid) capaz de regular la distribución equitativa de plásmidos después de la división bacteriana. Usualmente, acepta insertos de .............. kb :
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Los .......................... contienen telómeros, origen de replicación, un centrómero de
levadura y un marcador de selección para su identificación en las células que los
contengan. Su capacidad de clonación es de 100 a 1000 kb:
Los .......................... contienen telómeros, origen de replicación, un centrómero de levadura y un marcador de selección para su identificación en las células que los contengan. Su capacidad de clonación es de 100 a 1000 kb:
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Aunque los BAC y los PAC aceptan fragmentos menores que los YAC tienen algunas
ventajas:
Aunque los BAC y los PAC aceptan fragmentos menores que los YAC tienen algunas ventajas:
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Una familia de vectores de clonación que ofrecen el promotor de 7SK RNA polimerasa III
humano y una selección de marcadores para la clonación de los insertos siRNA/shRNA.
Permiten la expresión de uno o dos shRNAs en un plásmido estándar o un plásmido CpG
free:
Una familia de vectores de clonación que ofrecen el promotor de 7SK RNA polimerasa III humano y una selección de marcadores para la clonación de los insertos siRNA/shRNA. Permiten la expresión de uno o dos shRNAs en un plásmido estándar o un plásmido CpG free:
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A la introducción de un vector a una célula eucariota se le denomina :
A la introducción de un vector a una célula eucariota se le denomina :
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A la introducción de un vector vírico a una célula eucariota se le denomina :
A la introducción de un vector vírico a una célula eucariota se le denomina :
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Para la clonación es preciso :
Para la clonación es preciso :
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Según el tipo de extremos que se generan con el corte por las enzimas de restricción del
vector e inserto que se va a clonar, en este caso:
Según el tipo de extremos que se generan con el corte por las enzimas de restricción del vector e inserto que se va a clonar, en este caso:
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Preparación del vector para clonación, son etapas:
Preparación del vector para clonación, son etapas:
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La ligación de un segmento de ADN exógeno a un vector involucra la formación de enlaces
.
............................ entre los residuos fosfato que se localizan en los extremos 5’ de la cadena
de ADN y los residuos hidroxilo 3’:
La ligación de un segmento de ADN exógeno a un vector involucra la formación de enlaces . ............................ entre los residuos fosfato que se localizan en los extremos 5’ de la cadena de ADN y los residuos hidroxilo 3’:
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Para su replicación, los vectores requieren encontrarse dentro de una célula, que debe
prepararse para hacerla permeable a la entrada del vector recombinante, proceso
denominado generación de células competentes. Las células competentes generalmente son
células procariotas. Uno de los métodos de competencia más utilizados consiste en tratar
las bacterias con una solución de :
Para su replicación, los vectores requieren encontrarse dentro de una célula, que debe prepararse para hacerla permeable a la entrada del vector recombinante, proceso denominado generación de células competentes. Las células competentes generalmente son células procariotas. Uno de los métodos de competencia más utilizados consiste en tratar las bacterias con una solución de :
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Cabe resaltar que el termino transformación se refiere a:
Cabe resaltar que el termino transformación se refiere a:
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Cabe resaltar que el termino transfección se refiere a:
Cabe resaltar que el termino transfección se refiere a:
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Transformación por electroporación: consiste en la aplicación de breves pulsos
eléctricos de alto voltaje (> 1500 V/5 ms) a las células receptoras, para formar poros en la
membrana plasmática en células eucariotas y/o la pared celular en bacterias. Los
componentes de la membrana se desestabilizan, lo que permite la entrada del vector al
citoplasma de la célula. Esta es la técnica de transformación bacteriana más eficiente, ya
que se obtienen alrededor de ................................ células transformadas/µg de plásmido:
Transformación por electroporación: consiste en la aplicación de breves pulsos eléctricos de alto voltaje (> 1500 V/5 ms) a las células receptoras, para formar poros en la membrana plasmática en células eucariotas y/o la pared celular en bacterias. Los componentes de la membrana se desestabilizan, lo que permite la entrada del vector al citoplasma de la célula. Esta es la técnica de transformación bacteriana más eficiente, ya que se obtienen alrededor de ................................ células transformadas/µg de plásmido:
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Para identificar las bacterias transformadas se utilizan marcadores de selección
proporcionados por los vectores:
Para identificar las bacterias transformadas se utilizan marcadores de selección proporcionados por los vectores:
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La clonación por PCR se basa en un proceso llamado ligación, el cual es un método para
insertar un fragmento de ADN dentro de un vector usando una ADN ligasa. La razón por
la cual la ligación es importante en este paso es porque es responsable de insertar el
producto de PCR dentro un un plásmido con una:
La clonación por PCR se basa en un proceso llamado ligación, el cual es un método para insertar un fragmento de ADN dentro de un vector usando una ADN ligasa. La razón por la cual la ligación es importante en este paso es porque es responsable de insertar el producto de PCR dentro un un plásmido con una:
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. La técnica de clonación lisa o sin costuras:
. La técnica de clonación lisa o sin costuras:
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La técnica de Ligación Independiente de Clonación:
La técnica de Ligación Independiente de Clonación:
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La técnica de Clonación por recombinación:
La técnica de Clonación por recombinación:
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Study Notes
Clonación de ADN
- La clonación molecular permite introducir un fragmento de ADN (inserto) dentro de una molécula de ADN (vector).
- El inserto puede ser ADN de cualquier organismo y puede permanecer como un fragmento libre o estar integrado en el vector.
Procedimientos de clonación
- Para cortar ADN se requieren enzimas de restricción específicas.
- La ADN-ligasa une fragmentos de ADN, formando enlaces covalentes.
Tipos de vectores según tamaño del inserto
- Vectores para insertos de 120 kb son necesarios para grandes fragmentos.
- Vectores de 35 kb pueden aceptar tamaños más reducidos.
- Vectores para insertos de 1 Mb son necesarios para fragmentos aún mayores.
Funciones de vectores
- Vectores de clonación se utilizan para replicar y almacenar fragmentos de ADN.
- Vectores de expresión permiten la producción de proteínas a partir de los genes clonados.
Componentes de los vectores
- Los vectores de clonación incluyen elementos como el origen de replicación y un marcador de selección.
- Los vectores de expresión también contienen promotores y secuencias de polímeros.
Plásmidos y bacteriófagos
- Los plásmidos se clasifican por función, permitiendo la ligación de fragmentos de ADN grandes.
- El bacteriófago lambda es un vector común con un genoma lineal.
Métodos de purificación
- La técnica de maxiprep cultiva grandes volúmenes de bacterias para obtener ADN plásmido puro.
- Los plásmidos pueden aparecer en distintas conformaciones en un gel de electroforesis.
Vectores para grandes segmentos de ADN
- Los cósmidos aceptan insertos de grandes tamaños, útiles para estudios genómicos.
- Los BAC y YAC permiten la clonación de fragmentos de ADN de cientos de kilobases.
Técnicas de transformación
- La introducción de un vector en células eucariotas se denomina transfección, mientras que en células procariotas se llama transformación.
- Las células competentes son tratadas para facilitar la entrada de vectores, utilizando soluciones específicas.
Métodos de competitividad
- La electroporación aplica pulsos eléctricos a las células, creando poros en la membrana para la entrada de vectores.
- Esta técnica es altamente efectiva, generando un gran número de células transformadas.
Proceso de ligación
- La clonación por PCR utiliza ligación para integrar fragmentos de ADN en vectores mediante una ADN ligasa.
- La técnica de ligación independiente de clonación permite la inserción del ADN sin la necesidad de enzimas de restricción.
Métodos de clonación avanzada
- La clonación por recombinación es otra técnica utilizada para insertar ADN en vectores de manera eficiente.
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Description
Este cuestionario evalúa el conocimiento sobre la clonación molecular y la introducción de fragmentos de ADN en moléculas de ADN. Incluye preguntas sobre vectores genéticos y tipos de insertos de ADN.
