Biología Molecular y Citogenética - Cultivos Celulares
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Questions and Answers

¿Cuál de los siguientes tipos de cultivos celulares se refiere a aquellas células obtenidas directamente de un organismo?

  • Cultivos celulares sintéticos
  • Cultivos celulares permanentes
  • Cultivos celulares secundarios
  • Cultivos celulares primarios (correct)

En la determinación del número y viabilidad celular, ¿qué método se puede utilizar para obtener recuentos precisos?

  • Método de tinción negativa
  • Contadores manuales
  • Contadores electrónicos (correct)
  • Microscopía óptica

¿Cuál es una de las principales causas de contaminación en cultivos celulares?

  • Utilización de células de origen humano
  • Uso de medios de cultivo convencionales
  • Manipulación inadecuada (correct)
  • Almacenamiento en condiciones ideales

¿Qué técnica se utiliza para la recogida celular mediante la separación de las células de un tejido complejo?

<p>Disgregación celular (C)</p> Signup and view all the answers

¿Cuál de las siguientes opciones representa una técnica específica para obtener cromosomas?

<p>Centrifugación diferencial (B)</p> Signup and view all the answers

En relación a la conservación de células, ¿cuál de las siguientes prácticas no es recomendada?

<p>Almacenamiento a temperaturas estándar de laboratorio (D)</p> Signup and view all the answers

¿Qué tipo de tinción se utiliza generalmente para observar la viabilidad celular?

<p>Tinción de azul de tripano (A)</p> Signup and view all the answers

¿Qué sección se encarga de abordar la contaminación de cultivos celulares?

<p>Caso práctico sobre contaminación (D)</p> Signup and view all the answers

¿Cuál es el objetivo de utilizar técnicas de biología molecular en la detección de Mycoplasma?

<p>Para confirmar la infección en cultivos celulares (A)</p> Signup and view all the answers

A qué temperatura debe conservarse un cultivo celular por 24 h?

<p>-20º C (B)</p> Signup and view all the answers

La confluencia en cultivos celulares indica qué aspecto del crecimiento celular?

<p>Porcentaje del área cubierta por células (C)</p> Signup and view all the answers

¿Cuál de las siguientes características NO es un indicador de contaminación por bacterias y hongos?

<p>Gránulos en el citoplasma (B)</p> Signup and view all the answers

¿Qué tipo de cultivos celulares se refiere a los que se obtienen de tejidos específicos?

<p>Cultivos histotípicos (A)</p> Signup and view all the answers

Cuál es la técnica más adecuada para confirmar la presencia de Mycoplasma en cultivos celulares?

<p>PCR y tinciones fluorescentes (D)</p> Signup and view all the answers

El recuento y viabilidad de células en un cultivo celular se pueden determinar mediante cuáles de las siguientes técnicas?

<p>Microscopía y análisis de cambios en el pH (A)</p> Signup and view all the answers

¿Qué indica la presencia de contaminantes como bacterias o hongos en un cultivo celular?

<p>Alteraciones en el medio de cultivo (B)</p> Signup and view all the answers

¿Cuál es la principal función de la cámara de Neubauer?

<p>Contar células en un volumen determinado. (C)</p> Signup and view all the answers

¿Qué volumen corresponde a un cuadrado de la cámara de Neubauer?

<p>0.1 mm3 (C)</p> Signup and view all the answers

Al contar células en los cuatro cuadrados de las esquinas, ¿qué cálculo se realiza para obtener la densidad celular?

<p>Dividir el número total de células entre 4 y multiplicar por 10.000. (C)</p> Signup and view all the answers

¿Cuál es la principal característica de un cultivo celular en monocapa?

<p>Las células se disponen sobre un soporte sólido. (A)</p> Signup and view all the answers

¿Cuál de las siguientes opciones es un método manual para el recuento celular?

<p>Cámara de Neubauer. (D)</p> Signup and view all the answers

¿Qué tipo de cultivos celulares son empleados principalmente para células sanguíneas?

<p>Cultivo en suspensión. (A)</p> Signup and view all the answers

¿Qué ocurre si la densidad celular de la muestra es muy elevada?

<p>Se debe realizar una dilución. (D)</p> Signup and view all the answers

¿Qué propiedad no se utiliza en contadores electrónicos para realizar el recuento celular?

<p>Coloración. (A)</p> Signup and view all the answers

¿Cuál de las siguientes muestras se obtiene de la sangre periférica?

<p>Linfocitos. (A)</p> Signup and view all the answers

¿Cuál es el tamaño de cada cuadrado en la cámara de Neubauer?

<p>1 mm x 1 mm (B)</p> Signup and view all the answers

¿Qué ventaja tiene el análisis de líquido amniótico en comparación con la sangre periférica?

<p>No requiere agentes mitógenos. (A)</p> Signup and view all the answers

¿Cuál es el factor por el que se multiplica el número de células contadas en el cuadrado central?

<p>10,000 (B)</p> Signup and view all the answers

¿Cuál es la desventaja de utilizar sangre periférica para estudios citogenéticos?

<p>Necesita agentes mitógenos. (B)</p> Signup and view all the answers

¿Qué técnica se utiliza para el diagnóstico prenatal precoz a través de las vellosidades coriónicas?

<p>Biopsia corial. (A)</p> Signup and view all the answers

¿Cuánto tiempo se requiere generalmente para obtener resultados del líquido amniótico?

<p>2-3 semanas. (C)</p> Signup and view all the answers

¿Qué sustancia se debe incluir en los medios de cultivo para promover el desarrollo celular?

<p>Factores de crecimiento. (B)</p> Signup and view all the answers

¿Qué procedimiento se realiza para confirmar una alteración cromosómica en un niño recién nacido?

<p>Hacer un diagnóstico posnatal (B)</p> Signup and view all the answers

¿Cuál es el nombre de la trisomía detectada en el niño mencionado?

<p>Trisomía del 21 (A)</p> Signup and view all the answers

¿Qué ocurre con las células cuando alcanzan la confluencia en un cultivo?

<p>Detienen su crecimiento debido al contacto estrecho (B)</p> Signup and view all the answers

¿Qué es el subcultivo en el contexto de cultivos celulares?

<p>Reubicación de células en un nuevo medio de cultivo (C)</p> Signup and view all the answers

¿Cuál es un motivo por el que algunas gestantes no siguen los programas de screening temprano?

<p>Falta de recursos económicos (A)</p> Signup and view all the answers

¿Qué tipo de muestras se utilizan para el diagnóstico postnatal de aneuploidías?

<p>Muestra de sangre periférica (D)</p> Signup and view all the answers

En el contexto de los cultivos celulares, ¿qué indica la fase de confluencia?

<p>Recursos limitados en el medio de cultivo (A)</p> Signup and view all the answers

¿Qué se estudia en el diagnóstico citogenético posnatal?

<p>Los cromosomas del paciente (D)</p> Signup and view all the answers

¿Qué proceso se utiliza para inducir la mitosis de las células antes de observar los cromosomas?

<p>Inyección de un mitógeno (A)</p> Signup and view all the answers

¿Qué sucede con las células durante el proceso de hinchazón antes de observar los cromosomas?

<p>Aumentan su volumen para facilitar la observación (C)</p> Signup and view all the answers

¿Cuál es la diferencia principal entre los cultivos celulares primarios y los explantes primarios?

<p>Los cultivos primarios son células disgregadas mientras que los explantes son muestras de órganos. (A)</p> Signup and view all the answers

En el contexto de cultivos celulares, ¿qué se entiende por confluencia?

<p>El momento en que las células necesitan más espacio debido a su crecimiento. (C)</p> Signup and view all the answers

¿Qué caracteriza a los cultivos histotípicos?

<p>Buscan imitar tejidos de un único tipo celular. (B)</p> Signup and view all the answers

¿Qué limitación tienen los explantes primarios respecto a su crecimiento celular?

<p>Las células en el interior del explante están aisladas del medio de cultivo. (D)</p> Signup and view all the answers

¿Cuál es el objetivo principal de los cultivos organotípicos?

<p>Reproducir la estructura y función de un órgano original. (A)</p> Signup and view all the answers

¿Qué tipo de sustancias se utilizan para detener el ciclo celular de las células antes de la observación de cromosomas?

<p>Colchicina y otros mitógenos (B)</p> Signup and view all the answers

Flashcards

Cultivos celulares primarios

Las muestras celulares se extraen directamente del tejido original y mantienen su fenotipo original. Son útiles para estudios de desarrollo celular.

Aplicaciones de los cultivos celulares primarios

Los cultivos celulares primarios se utilizan para estudiar el desarrollo celular, los efectos de los fármacos y las respuestas a las lesiones.

Cultivos celulares continuos

Un cultivo celular que ha sido derivado de un cultivo primario y puede multiplicarse indefinidamente.

Líneas celulares inmortalizadas

Se derivan de una única línea celular que ha sido modificada genéticamente para crecer 'in vitro'.

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Células somáticas

Las células somáticas del cuerpo, no reproductivas, que se encuentran en los tejidos.

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Disgregación celular

La adición de enzimas especiales a las células para romper las uniones celulares.

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Citogenética

El estudio de los cromosomas en las células.

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Cultivo celular citogenético

Un cultivo celular que se utiliza para reproducir un cromosoma o un conjunto de cromosomas.

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Cultivo en Monocapa

Un tipo de cultivo celular donde las células se adhieren y crecen sobre una superficie sólida.

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Cultivo en Suspensión

Un tipo de cultivo celular donde las células se mantienen en suspensión dentro de un medio líquido.

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Sangre Periférica

Un tipo de muestra para cultivos celulares primarios que se obtiene a través de una venopunción.

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Líquido Amniótico

Un tipo de muestra para cultivos celulares primarios que se obtiene a través de una amniocentesis.

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Biopsia Corial

Un tipo de muestra para cultivos celulares primarios que se obtiene a través de una biopsia de las vellosidades coriónicas.

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Mitógenos

Sustancias químicas que se añaden al medio de cultivo para estimular la división celular.

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Cariotipo

Un conjunto completo de cromosomas de un organismo.

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Diagnóstico citogenético posnatal

Diagnóstico citogenético realizado después del nacimiento para detectar alteraciones cromosómicas en un individuo.

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Genoma

Conjunto de cromosomas de un individuo.

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Cultivo celular

Técnica de laboratorio que consiste en el cultivo de células fuera del organismo. Se utiliza para el estudio de las células, tejidos y órganos.

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Subcultivo

Proceso de transferencia de células de un cultivo celular a un nuevo medio de cultivo. Se realiza cuando el cultivo celular alcanza la confluencia.

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Confluencia

Fase en la que las células de un cultivo celular han proliferado hasta ocupar todo el espacio disponible en el medio de cultivo. El crecimiento se detiene debido a la falta de recursos y la alta densidad celular.

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Cribado prenatal de aneuploidías

Una técnica de diagnóstico prenatal que busca identificar posibles anomalías cromosómicas, como la trisomía 21 (Síndrome de Down).

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Aneuploidía

Alteración en el número de cromosomas en un individuo.

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Preparación de cromosomas

Un proceso que utiliza un mitógeno para estimular la división celular, seguida de la detención del ciclo celular con colchicina y la hinchazón de las células con una solución hipotónica de cloruro potásico. Esto permite observar los cromosomas con mayor claridad.

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Subcultivo o pase

Un proceso que implica la transferencia de células a un nuevo medio de cultivo cuando alcanzan la confluencia, es decir, cuando requieren más espacio para crecer.

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Explantes primarios

Muestras de órganos colocadas en un soporte de cultivo donde las células periféricas reciben nutrientes y crecen, migrando y expandiéndose. Las células internas del tejido permanecen aisladas del medio de cultivo.

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Órganos

Similar a un explante primario, pero conserva la arquitectura celular del tejido original, ofreciendo una ventaja para estudios que requieren la estructura celular del tejido in vivo. Sin embargo, requiere la creación de un nuevo explante para cada estudio.

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Cultivos histotípicos y organotípicos

Cultivos que intentan imitar a los tejidos (histotípicos) de un único tipo celular o a los órganos (organotípicos) compuestos por diferentes tipos celulares que interactúan, replicando la estructura y función del órgano original.

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Mitosis

Las células se multiplican y dividen en dos células hijas idénticas.

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Detención del ciclo celular

La célula se detiene en una fase específica del ciclo celular.

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Cámara de Neubauer

Un instrumento similar a un portaobjetos, graduado en cuadrículas de mm2 para contar células y determinar la densidad citológica.

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Densidad citológica

Cantidad de células por unidad de volumen.

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Espacio entre la muestra y el cubreobjetos

La muestra se coloca en la cámara de Neubauer, y el cubreobjetos se coloca sobre ella, dejando un espacio de 0,1 mm entre ambos.

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Volumen de un cuadrado de la cámara

Cada cuadrado de la cámara de Neubauer tiene 1 mm x 1 mm de área y 0,1 mm de profundidad, dando un volumen de 0,1 mm3.

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Conteo en cámara de Neubauer

El conteo se puede hacer en el cuadrado central o en los cuatro cuadrados de las esquinas, y los resultados se multiplican por 10.000 para obtener el número de células por mililitro.

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Dilución de la muestra

Si la densidad celular es alta, se debe diluir la muestra antes del conteo y multiplicar el resultado por el factor de dilución.

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Contadores electrónicos de células

Aparatos que utilizan diferentes propiedades físico-químicas de las células para su recuento, como la densidad, la resistencia eléctrica o la absorbancia.

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Células viables

Se refiere a células que son viables, es decir, que están vivas y pueden funcionar correctamente.

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Cultivo celular primario

Un cultivo celular que se obtiene directamente de un tejido o órgano.

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Conservación de cultivos celulares

Un cultivo celular que se ha mantenido en condiciones apropiadas para que siga creciendo.

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Recuento y viabilidad celular

Proceso para determinar la cantidad de células viables en un cultivo.

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Contaminación en cultivos celulares

Microorganismos que contaminan cultivos celulares, como bacterias, hongos, virus y micoplasmas.

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Detección de contaminación por Mycoplasma

Técnicas utilizadas para detectar la presencia de micoplasmas en cultivos celulares.

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Study Notes

BIOLOGÍA MOLECULAR Y CITOGENÉTICA - CULTIVOS CELULARES

  • Objetivos: Comprender qué son los cultivos celulares, diferenciar los tipos de cultivos celulares y conocer las características y manejo de cada uno de ellos.

INTRODUCCIÓN Y CONTEXTUALIZACIÓN PRÁCTICA

  • Preparación de cultivos: Preparar material para su posterior procesado en citogenética requiere precisión, ya que errores en esta etapa pueden arruinar todo el proceso.
  • Análisis posterior: Una vez establecidos con éxito, se utilizan técnicas de análisis cromosómicos para estudiar anomalías numéricas o estructurales relacionadas con posibles patologías.

¿CÓMO PODEMOS OBTENER CROMOSOMAS?

  • Células eucariotas: Se extraen de muestras humanas, generalmente sangre periférica (extraída mediante venopunción), o otras fuentes.
  • ADN: Inicialmente, el ADN se encuentra como cromatina dispersa en el núcleo celular.
  • Preparación: Se induce la mitosis, se detiene el ciclo celular con colchicina y se hinchan las células con una solución hipotónica, lo que facilita la visualización de los cromosomas metafásicos.

TIPOS DE CULTIVOS CELULARES

  • Primarios: Son células disgregadas (separadas de tejido) que pueden seguir creciendo y desarrollándose.
  • Tipos:
    • Monocapa: Células adheridas a un soporte sólido.
    • Suspensión: Células dispersas en un medio líquido.
  • Explantes primarios: Son muestras de órganos colocadas en un medio de cultivo; las células periféricas proliferan, mientras que las internas no.
  • Histotípicos/Organotípicos: Imitan tejidos u órganos completos, respectivamente.

CASO PRÁCTICO 1: DIAGNÓSTICO CITOGENÉTICO POSNATAL

  • Planteamiento: Se discuten las aneuploidías (alteraciones en el número de cromosomas) en recién nacidos, enfocado en los casos que no se realizaron estudios prenatales de cribado.
  • Caso: Una gestante no cumplió con el protocolo de pruebas, presentándose un bebé con rasgos que sugieren una posible alteración cromosómica.
  • Solución: Se realiza un diagnóstico postnatal para confirmar la sospecha mediante cariotipo.

TÉCNICAS DE CULTIVO CELULAR: TÉCNICAS DE SUBCULTIVO

  • Confluencia: Las células requieren más espacio para crecer, por lo que se transfieren a un nuevo medio de cultivo (subcultivo o pase).
  • Monocapa: Las células se disgregan y trasladan a un nuevo soporte con medio de cultivo.
  • Suspensión: Se diluye en un nuevo medio de cultivo.
  • Línea celular: Es el nuevo grupo de células generadas mediante subcultivos; comúnmente, la línea celular de crecimiento dominante es la que predomina en el cultivo.
  • Senescencia: Las células dejan de dividirse tras un período dado de crecimiento.

PROCEDIMIENTOS DE CONSERVACIÓN DE CÉLULAS

  • Criopreservación: Las células se preservan congelándolas en nitrógeno líquido (-196°C) para usos posteriores.
  • Medio de cultivo: Se utiliza un medio de cultivo con crioprotectores (como el DMSO) para proteger a las células.
  • Densidad celular: Se necesita una densidad celular adecuada para una exitosa criopreservación.

TÉCNICAS DE SACRIFICIO Y RECOGIDA CELULAR: DISGREGACIÓN CELULAR

  • Métodos:
    • Mecánicos: Destrucción y raspado del tejido para liberar las células.
    • Químicos: Se usan quelantes para inhibir las moléculas de adhesión celular.
    • Enzimáticos: Se emplean enzimas (como la tripsina) para digerir las proteínas que mantienen las células unidas.

DETERMINACIÓN DEL NÚMERO Y VIABILIDAD CELULAR

  • Tinción vital: Se utiliza un colorante (ej., azul tripán) para diferenciar las células vivas de las muertas en un cultivo.
  • Cámara de Neubauer: Permite contar células en muestras de líquido (como sangre).
  • Contadores electrónicos: Emplean propiedades físicas (como densidad o resistencia) para cuantificar células.

MÉTODOS DE TINCIÓN

  • Tinción ácida: Se une a estructuras básicas (proteínas del citoplasma).
  • Tinción básica: Se une a estructuras ácidas (ADN nuclear).
  • Tinción neutra: Se une a estructuras básicas y ácidas.
  • Tinción indiferente: Se une a estructuras no polares, como lípidos.

CONTAMINACIÓN DE CULTIVOS CELULARES

  • Posibles contaminantes: Bacterias, hongos, levaduras, micoplasmas y virus.
  • Importancia de la higiene: Condiciones asépticas en el laboratorio son esenciales para prevenir la contaminación.
  • Detección de contaminantes: Se detectan visualmente (observación al microscopio) y con pruebas específicas (como tinciones fluorescentes, biólogíca molecular o PCR).

CASO PRÁCTICO 2: CONTAMINACIÓN DE LOS CULTIVOS CELULARES

  • Planteamiento: Se identifican problemas de higiene y técnicas asépticas en el laboratorio.
  • Problema: Se observa una contaminación potencial del cultivo.
  • Solución: Se implementan medidas de higiene en caso de infección, tales como la limpieza, desinfección y corrección de las medidas asépticas.

RESUMEN Y RESOLUCIÓN DEL CASO PRÁCTICO DE LA UNIDAD

  • Resumen de técnicas: Se resumen todas las técnicas empleadas para realizar cultivos de células para su posterior estudio.
  • Análisis de casos: Se analiza la toma de decisiones y el proceso de resolución de los experimentos.
  • Importancia de medidas asépticas: Se recalca la importancia de seguir los protocolos de higiene y seguridad en las actividades de los laboratorios para evitar contaminación.

BIBLIOGRAFÍA

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Este cuestionario profundiza en el concepto de cultivos celulares, sus tipos y manejo. Además, se abordará el proceso de obtención de cromosomas a partir de células eucariotas y las técnicas de análisis cromosómico. Ideal para estudiantes que deseen consolidar sus conocimientos en citogenética.

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