biomol 2/3
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Questions and Answers

Quale affermazione riguarda meglio la funzione degli aminoacil-tRNA sintetasi?

  • Regolano esclusivamente l'appaiamento degli anticodoni.
  • Forniscono energia per il legame tra aminoacido e tRNA.
  • Determinano il riconoscimento corretto dell'aminoacido e del tRNA. (correct)
  • Caricano gli aminoacidi sui ribosomi.

    • Cosa distingue i tRNA isoaccettori l'uno dall'altro?

  • La presenza o assenza del nucleotide CCA.
  • La sequenza di nucleotidi nella regione accettori.
  • La prima base del loro anticodone. (correct)
  • Le loro lunghezze molecolari.

    • Qual è la caratteristica principale del fenomeno di wobble pairing?

  • Il terzo nucleotide del codone può variare senza influenzare l'appaiamento. (correct)
  • Il wobble pairing consente un riconoscimento errato dell'aminoacido.
  • Il legame tra tRNA e mRNA è sempre perfetto.
  • Le basi del codone sono sempre identiche.

    • Quale affermazione sulla conservazione dei nucleotidi nei tRNA è corretta?

    <p>La porzione vicina al braccio CCA è molto conservata tra diversi tRNA.</p> Signup and view all the answers

    In quale direzione è normalmente scritto l'mRNA?

    <p>Da 5' a 3'.</p> Signup and view all the answers

    Quale delle seguenti affermazioni sul fluorocromo nella TAQ PCR è corretta?

    <p>Il fluorocromo diventa fluorescente solo dopo che si spezza.</p> Signup and view all the answers

    Qual è la principale caratteristica di un RNA antisenso utilizzato nella ibridazione in situ?

    <p>È complementare all'mRNA del gene da analizzare.</p> Signup and view all the answers

    Per quale motivo si preferisce l'ibridazione RNA/RNA rispetto a quella DNA/RNA nella sonda?

    <p>Il tasso di ibridazione e stabilità sono maggiori negli ibridi RNA/RNA.</p> Signup and view all the answers

    Qual è il ruolo dell'enzima fosfatasi alcalina nel processo di ibridazione in situ?

    <p>Forma un precipitato colorato nelle cellule che esprimono il gene.</p> Signup and view all the answers

    Quale delle seguenti affermazioni è vera riguardo alle RNA polimerasi derivate da fagi?

    <p>Consentono la sintesi di alte quantità di RNA.</p> Signup and view all the answers

    Perchè l'ibridazione in situ non è considerata quantitativa?

    <p>Perchè si basa su sezioni di tessuti con poche molecole di RNA.</p> Signup and view all the answers

    Cosa accade al campione dopo il trattamento con l'anticorpo anti-digossigenina?

    <p>Si forma un precipitate colorato marcante.</p> Signup and view all the answers

    Qual è il vantaggio di utilizzare sonde specifiche nelle regioni ripetute del genoma umano?

    <p>Riduce il rischio di ibridazione non specifica.</p> Signup and view all the answers

    Qual è il composito principale della sonda marcata utilizzata nel metodo di ibridazione?

    <p>UTP modificato.</p> Signup and view all the answers

    Quale affermazione sul ruolo della RNA polimerasi I è corretta?

    <p>Trascrive solo il gene per l'RNA ribosomale.</p> Signup and view all the answers

    Cosa caratterizza i promotori della RNA polimerasi III?

    <p>Sono composti da due regioni chiamate Box A e Box B.</p> Signup and view all the answers

    Qual è un'importante differenza tra il RNA messaggero nei procarioti e negli eucarioti?

    <p>I procarioti producono RNA policistronici.</p> Signup and view all the answers

    Qual è la velocità di polimerizzazione della RNA polimerasi II?

    <p>Circa 40 nucleotidi al secondo.</p> Signup and view all the answers

    Quale funzione hanno i chaperon in relazione al DNA?

    <p>Facilitano la riassemblaggio dei nucleosomi.</p> Signup and view all the answers

    Qual è la funzione della TBP nella trascrizione?

    <p>Si utilizza per collegare le polimerasi ai promotori.</p> Signup and view all the answers

    Cosa è vero riguardo alla maturazione dell'RNA?

    <p>Include il taglio dell'RNA guidato da modifiche post-trascrizionali.</p> Signup and view all the answers

    Quale delle seguenti affermazioni sul processo di trascrizione è corretta?

    <p>La polimerasi II è responsabile della trascrizione di mRNA.</p> Signup and view all the answers

    Qual è il principale scopo di utilizzare primer su due esoni diversi durante la PCR?

    <p>Evitare l'amplificazione del DNA genomico</p> Signup and view all the answers

    Cosa indica il ciclo soglia (Ct) in una REAL TIME PCR?

    <p>Il ciclo in cui si raggiunge un valore soglia di fluorescenza</p> Signup and view all the answers

    Quale caratteristica distingue SYBR green dagli altri coloranti come il bromuro di etidio?

    <p>Maggiore fluorescenza in presenza di DNA a doppio filamento</p> Signup and view all the answers

    Qual è l'effetto del numero di cicli necessari affinché un campione raggiunga il suo Ct?

    <p>È inversamente proporzionale al numero di copie target presente inizialmente</p> Signup and view all the answers

    Qual è la funzione del termociclatore durante la REAL TIME PCR?

    <p>Analizzare i campioni con un raggio laser</p> Signup and view all the answers

    Perché è difficile definire la quantità di DNA amplificato nei primi cicli di PCR?

    <p>Perché si osserva una fluorescenza minima</p> Signup and view all the answers

    Qual è l'importanza della curva di saturazione nella REAL TIME PCR?

    <p>Mostra il raggiungimento della massima amplificazione</p> Signup and view all the answers

    Quale affermazione sul SYBR green è corretta?

    <p>Si lega solo al DNA a filamento doppio</p> Signup and view all the answers

    In quale fase della PCR l'amplificazione di DNA a filamento singolo è maggiormente visibile?

    <p>Nel ciclo di raggiungimento della saturazione</p> Signup and view all the answers

    Quale dei seguenti processi avviene all'interno di un termociclatore durante una PCR?

    <p>Cicli di denaturazione e annealing</p> Signup and view all the answers

    Qual è il ruolo della RNA polimerasi nel processo descritto?

    <p>Legare il cDNA da T3</p> Signup and view all the answers

    Qual è la funzione del trascrittoma in un esperimento di analisi genica?

    <p>Analizzare tutti gli RNA prodotti da un tessuto</p> Signup and view all the answers

    Quale tecnica permette l'analisi di un gran numero di geni in contemporanea?

    <p>Microarrays cDNA</p> Signup and view all the answers

    Che cosa caratterizza l'ibridazione in situ su embrioni interi?

    <p>È limitata agli stadi precoci di sviluppo</p> Signup and view all the answers

    Qual è il risultato atteso dell'analisi tramite microarrays cDNA?

    <p>Osservare dove si lega l'RNA specifico a sonde</p> Signup and view all the answers

    Qual è la percentuale di RNA che rappresenta il mRNA rispetto all'intero RNA?

    <p>3-5%</p> Signup and view all the answers

    Quale aspetto è fondamentale per la generazione di sonde complementari all'RNA messaggero?

    <p>Garantire legami tra filamenti inferiore e superiore</p> Signup and view all the answers

    Cosa si può osservare confrontando geni espressi in un genoma tumorale rispetto a uno normale?

    <p>I cambiamenti nell'espressione genica</p> Signup and view all the answers

    Quale affermazione riguardante le sonde per l'ibridazione è corretta?

    <p>Devono corrispondere a sequenze di almeno 100bp</p> Signup and view all the answers

    Qual è il risultato finale dell'analisi di trascrittoma utilizzando un raggio laser?

    <p>Il riconoscimento delle sonde e sequenze</p> Signup and view all the answers

    Study Notes

    Trascrizione dell'RNA

    • La RNA polimerasi II polimerizza a una velocità di circa 40 nucleotidi al secondo.
    • Polimerasi I e III iniziano la trascrizione da promotori differenti, entrambe utilizzano TBP per trascrivere geni RNA.
    • Polimerasi I trascrive un gene precursore dell'RNA ribosomale, stampando 13.000 nucleotidi, che vengono poi scissi in RNA 18S, 5,8S e 28S.
    • Polimerasi III è responsabile della sintesi di tRNA, snRNA e 5S rRNA; numerosi promotori di Pol III si trovano a valle del sito d'inizio.
    • I promotori possono variare in forza, influenzando la quantità di RNA prodotto.

    Distinzione tra RNA messaggero in eucarioti e procarioti

    • Gli RNA policistronici nei procarioti consentono la produzione di più proteine da un singolo filamento.
    • Tecniche come la REAL TIME PCR quantitativa evitano l'amplificazione di sequenze genomiche, focalizzandosi su esoni distinti.

    PCR in tempo reale

    • La fluorescenza è misurata ciclicamente durante la PCR tramite un termociclatore.
    • SYBR green lega il DNA a doppio filamento e genera una fluorescenza significativa, utile per monitorare la sintesi del DNA.
    • Il ciclo soglia (Ct) determina il numero di cicli necessari a raggiungere il valore soglia di fluorescenza, indicando la quantità di DNA presente.

    Ibridazione in situ dell'mRNA

    • Ibridazione in situ consente l'individuazione delle cellule che esprimono un determinato gene.
    • Viene utilizzata una sonda di RNA antisenso marcata per rilevare l'mRNA in tessuti o embrioni.
    • L'ibridazione RNA/RNA offre maggiore stabilità rispetto a ibridi DNA/RNA o DNA/DNA.

    Trascrittoma

    • Il trascrittoma consente di analizzare tutti gli RNA prodotti in un singolo esperimento.
    • I microarrays cDNA possono analizzare numerosi geni simultaneamente, identificando trascritti specifici da circa 20.000 geni.
    • Confrontando espressione genica in tessuti tumorali e normali, è possibile identificare cambiamenti nei patterns di espressione.

    Sintesi del tRNA

    • Esiste un aminoacil-tRNA sintetasi specifico per ogni amminoacido, ma più tRNA possono legare lo stesso amminoacido.
    • Gli anticodoni degli isoaccettori possono variare, ma il riconoscimento avviene tramite porzioni conservate nel braccio accettore.

    Appaiamento tra tRNA e mRNA

    • L'mRNA è orientato 5' a sinistra e 3' a destra, mentre il tRNA è complementare in modo inverso.
    • L'appaiamento wobble pairing consente una certa flessibilità nel terzo nucleotide del codone, garantendo comunque stabilità nelle prime due basi.

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