Questions and Answers
Quali sono le azioni principali svolte dal laboratorio di biochimica clinica?
Qual è lo scopo del laboratorio di biochimica clinica?
Assistere il medico nella diagnosi e monitoraggio delle patologie.
Il ciclo analitico include le fasi pre-analitica, analitica e ______.
post-analitica
Il laboratorio generale è più piccolo del laboratorio di reparto.
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Cos'è il TAT nel contesto di laboratorio?
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I campioni più comuni utilizzati sono: sangue, urine, ____, e biopsie di tessuto.
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Qual è la fase pre-analitica che include la preparazione del paziente?
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Quale tra i seguenti è un obiettivo delle analisi richieste dal medico?
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La sensibilità di un test è la sua capacità di identificare i soggetti malati.
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Cosa si intende per 'gold standard'?
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Abbina i seguenti termini alle loro definizioni:
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Qual è una condizione di malignità associata alle MG?
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La fosfatasi alcalina epatica è facile da distinguere dalla fosfatasi alcalina osteoblastica.
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Quale enzima è principale nel ciclo di Meister?
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La gamma-glutamiltranspeptidasi è un indicatore di _____ epatobiliare.
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Quale metodo è usato per misurare la fosfatasi alcalina?
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Quali sono le principali funzioni del glutatione?
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Cosa scinde l'amilasi?
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L'amiloidosi è una diagnosi finale comune collegata al mieloma multiplo.
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I livelli sierici di riferimento della gamma-glutamiltransferasi sono 40 U/L per _____ e 70 U/L per _____
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Quale dei seguenti valori non devono essere imparati a memoria?
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Qual è il valore di riferimento per l'alfa-1-antitripsina (AAT)?
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La protidemia totale è una misura della concentrazione totale delle proteine nel sangue.
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La __________ è la proteina di trasporto del ferro nel sangue.
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Quale delle seguenti affermazioni è vera riguardo all'infiammazione acuta?
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Abbina le proteine alla loro funzione principale:
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Che cos'è la VES e a cosa serve?
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Le immunoglobuline aumentano nelle malattie autoimmuni.
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L'albumina diminuisce la sua produzione durante la sintesi di __________.
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Quale proteina è indicativa della fase acuta dell'infiammazione?
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Quali sono i principali componenti del plasma?
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Il siero contiene i fattori di coagulazione.
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Quale tappo si usa per l'analisi dei fattori della coagulazione?
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Cosa si ottiene utilizzando un tappo rosso per il campione di sangue?
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L'EDTA è un chelante del _____ che si trova sulle pareti della provetta.
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Come si ottiene il plasma dal sangue?
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Qual è il rapporto usato per diluire una sostanza in una diluizione 1:10?
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Abbina i seguenti tipi di provetta con il loro utilizzo:
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Un errore comune nella fase pre-analitica è l'uso di strumenti sterili.
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Qual è la funzione dell'SDS nel campione per elettroforesi?
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Quale non è un tipo comune di elettroforesi?
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Study Notes
Il Laboratorio di Biochimica Clinica
- Il laboratorio di biochimica clinica assiste il medico nella scoperta e conferma delle malattie, nella scelta e monitoraggio della terapia e nella definizione della prognosi.
- Il laboratorio è multidisciplinare, con biologi, chimici, fisici e personale tecnico specializzato.
Struttura del Laboratorio
- La struttura del laboratorio comprende lo staff, l'impianto e i compiti assegnati in base alle analisi cliniche da effettuare.
- Il personale deve essere specializzato e avere titoli di studio congrui con la posizione rivestita.
- L'impianto è caratterizzato da requisiti impiantistici e di sicurezza obbligatori e regolamentati per legge.
Processo di Laboratorio
- Il processo di laboratorio comprende l'accettazione, l'analisi, la validazione del dato e la creazione del referto.
- Il ciclo analitico segue il TAT (turn around time) che deve essere breve, specialmente in pronto soccorso.
Tipi di Laboratori
- Laboratorio di reparto (point of care testing): piccolo laboratorio che si trova nelle vicinanze di un reparto e ha lo scopo di ridurre il tempo tra le analisi e il referto.
- Laboratorio generale (core laboratory): laboratorio di analisi ospedaliero che effettua analisi di ogni tipo.
- Laboratorio specialistico: laboratorio che si occupa di un particolare tipo di analisi, ad esempio analisi citogenetiche.
Motivazioni per la Richiesta delle Analisi
- Il medico richiede le analisi per controllare i valori attuali, per lo screening di patologie comuni in famiglia, per confermare o escludere dubbi diagnostici, per verificare il follow-up di una malattia o terapia, e per gestire emergenze.
Controllo del Processo e del Prodotto
- Il controllo del processo e del prodotto è fondamentale per garantire la qualità del referto.
- Il ciclo di Deming è un metodo di gestione iterativo in quattro fasi utilizzato per il controllo e il miglioramento continuo dei processi e dei prodotti.
Valutazione Esterna della Qualità (VEQ)
- La VEQ è un sistema di controllo che fa si che i vari laboratori abbiano i valori di un parametro nello stesso range.
- L'ente di controllo invia mensilmente ai laboratori dei campioni di controllo, che simulano i campioni dei pazienti, su cui dovranno essere eseguite determinazioni analitiche.
Fonti della Variabilità in Medicina di Laboratorio
- La variabilità dei parametri può dipendere dalle abitudini, dal sesso, dall'età ecc.
- Gli intervalli di riferimento vengono stabiliti mediante uno step-by-step che comprende la selezione di un individuo di riferimento, la selezione di un gruppo campione di riferimento, l'analisi del parametro, la distribuzione di riferimento e l'osservazione del valore.### Valutazione della distribuzione dei valori
- La valutazione della distribuzione dei valori assume un'importanza centrale nella scelta del metodo per la valutazione dell'intervallo e dei limiti di riferimento
- I metodi non parametrici possono essere applicati a tutte le distribuzioni (gaussiane, logaritmiche, ecc.)
- I metodi parametrici sono preferibilmente utilizzati per le distribuzioni gaussiane o trasformabili in gaussiane
Valutazione parametrica dei valori di riferimento
- La valutazione parametrica dei valori di riferimento è basata sul controllo della normalità della distribuzione
- La trasformazione dei dati in caso di non normalità della distribuzione con la definizione dei limiti di riferimento
- I limiti si fissano in modo da escludere porzioni del 2,5% dalla coda di distribuzione inferiore o superiore
Valutazione non parametrica dell'intervallo di riferimento
- La valutazione non parametrica dell'intervallo di riferimento può essere applicata a qualsiasi distribuzione di valori
- Non fa alcuna presunzione sul tipo di distribuzione e non effettua alcuna stima dei parametri di distribuzione
- Si limita a determinare i percentile superiore e inferiore
Gold standard
- Il gold standard è un test per un determinato parametro che ci dà il risultato più affidabile in assoluto
- È un test caratterizzato da maggiore sensibilità e specificità
- Esempi di gold standard:
- Emoglobina glicata per il diabete
- Biopsia epatica per la cirrosi
- Troponine per l'infarto del miocardio
Analisi di laboratorio
Ciclo analitico
- Fase pre-analitica:
- Richiesta delle esecuzioni delle analisi
- Preparazione del paziente
- Raccolta del campione
- Fase analitica:
- Analisi del campione
- Fase post-analitica:
- Interpretazione dei risultati
Fase pre-analitica
- Preparazione del paziente:
- Accertamento dell'identità
- Paziente riposato, a digiuno da almeno 6-8 ore
- Firma del contratto informato
- Raccolta del campione:
- Standardizzazione delle metodologie di prelievo del campione
- Scelta del campione biologico dipendente dalle indagini da eseguire
- Campioni biologici più utilizzati:
- Sangue (sangue venoso e arterioso)
- Urine (campione della mattina e raccolta delle 24 ore)
Fase analitica
- Analisi del campione:
- Utilizzo di strumentazione specifica (es. centrifughe, pipette, ecc.)
Fasi di errori
- Errori nella fase pre-analitica:
- Prescrizione di analisi errata
- Scambio di persona
- Errore nella preparazione del paziente
- Errore nella tenuta del laccio emostatico
- Provetta sbagliata
- Errori nella fase analitica:
- Mescolamento sbagliato
- Etichetta sbagliata
- Il campione è stato portato al laboratorio sbagliato
- Errata conservazione
- Errato trattamento in laboratorio### Il Campione di Sangue
- Il campione di sangue, trattato con sostanze anticoagulanti e lasciato sedimentare in una provetta, mostra una stratificazione visibile ad occhio nudo:
- 44% Ematocrito: contiene eritrociti e si trova nella parte inferiore della provetta
- 1% Buffy coat: contiene globuli bianchi e piastrine e si trova al centro della provetta
- 55% Plasma: composto da H2O, proteine, glucosio, ioni e metaboliti di scarto, e si trova nella parte superiore della provetta
Il Plasma
- Il plasma contiene più di 300 proteine diverse, molte delle quali hanno un ruolo specifico:
- Mantengono la pressione osmotica colloidale (albumina)
- Trasportano sostanze (trasportatori di lipidi, ormoni, bilirubina, ferro)
- Partecipano alla difesa immunitaria (immunoglobuline, sistema del complemento)
- Regolano la coagulazione e la fibrinolisi (proteine della coagulazione)
- Altre proteine possono essere presenti nel plasma solo in condizioni patologiche (enzimi di provenienza tissutale e marcatori tumorali)
Errori Pre-Analitici
- Le etichette sulle provette devono:
- Non essere facilmente asportabili
- Permettere l'identificazione inequivocabile del paziente (nome, cognome, codice fiscale, codice a barre)
- Presentare almeno un doppio codice di identificazione
- Utilizzare strumenti sterili
- I campioni possono essere rifiutati se:
- Sono stati etichettati erroneamente
- Sono emolizzati o coagulati
- Sono arrivati in laboratorio troppo tardi
- Sono stati conservati male
- La richiesta non corrisponde al tipo di provetta utilizzata
Raccolta delle Urine
- La raccolta delle urine può essere:
- Qualitativa: comune analisi delle urine, usata per esami microbiologici
- Quantitativa: usata per valutare la funzionalità renale, richiede una precisa quantificazione del campione urinario
Protidogramma
- Il protidogramma è una tecnica utilizzata per analizzare la composizione proteica dei liquidi biologici
- Le tecniche di separazione elettroforetica utilizzate sono:
- Elettroforesi zonale
- Elettroforesi capillare (CE)
- Tecniche di immunosottrazione (ISE)
- Elettroforesi/immunofissazione (IFE)
Elettroforesi su Gel di Agarosio
- L'elettroforesi su gel di agarosio è utilizzata per separare gli acidi nucleici
- Il gel di agarosio è formato da unità di D-galattosio e 3,6-anidro-L-galattosio
- La velocità di migrazione del DNA dipende dalla concentrazione del DNA, dalla dimensione del DNA e dalla concentrazione di agarosio
Elettroforesi su Gel di Poliacrilammide
- L'elettroforesi su gel di poliacrilammide è utilizzata per separare le proteine
- Il gel di poliacrilammide è formato da acrilammide e bisacrilammide
- La velocità di migrazione delle proteine dipende dalla concentrazione di poliacrilammide, dalla dimensione delle proteine e dalla carica elettrica delle proteine
SDS Page
- L'SDS page (Polyacrylamide Gel Electrophoresis) è una tecnica utilizzata per analizzare la composizione proteica degli estratti proteici
- L'SDS è un denaturante che rompe la struttura articolata delle proteine e conferisce loro una carica negativa
- Il campione deve essere preparato con un buffer contenente SDS e un agente riducente
- La corsa elettroforetica viene eseguita in una cella elettroforetica con un tampone di corsa a pH 8,3
- Le proteine vengono separate in base alla loro dimensione e carica elettrica
Elettroforesi Capillare
- L'elettroforesi capillare è una tecnica utilizzata per separare sistemi complessi di molecole grandi e piccole
- Il capillare deve avere un diametro compreso tra 20 e 70 μm e una lunghezza di 20-100 cm
- Il tampone di corsa deve essere neutro o basico per garantire un flusso elettroendosmotico uniforme
- La velocità di migrazione degli analiti dipende dalla loro massa, carica e flusso elettroendosmotico
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Description
Il laboratorio di biochimica clinica e il suo ruolo nell'aiuto al medico per scoprire patologie.