Bioassay og Ekstraksjonsmetoder

Bioassay-styrte metoder

• Bioassay (biologisk analyse) er en teknikk som brukes til å vurdere effekten av et stoff på levende organismer
• Bioassay-styrte isoleringsteknikker brukes for å finne bioaktive forbindelser fra naturlige kilder, f.eks. planter
• Bioassay-styrt isolering innebærer å bruke en serie tester for å identifisere og isolere forbindelser med ønskede egenskaper

Ekstraksjonsmetoder

• Ekstraksjon er en prosess som brukes til å trekke ut forbindelser fra en matriks, for eksempel planter
• Soxhlet-ekstraksjon er en effektiv metode for å trekke ut forbindelser fra planter
• Soxhlet-ekstraktoren bruker kontinuerlig refluks av et løsemiddel for å ekstrahere forbindelser fra plantemateriale
• Soxhlet-ekstraksjon utføres vanligvis ved å øke løsemidlets polaritet for å trekke ut ulike forbindelser fra plantemateriale

Kromatografiske teknikker

• Kromatografi er en teknikk som skiller forbindelser basert på deres forskjellige fysisk-kjemiske egenskaper
• Kromatografi brukes for å isolere og identifisere forbindelser fra naturlige kilder
• Typer av kromatografiske teknikker: TLC (tynnsjiktskromatografi), HPLC (høytrykksvæskekromatografi) og GC (gasskromatografi)

TLC (tynnsjiktskromatografi)

• TLC brukes til å skille og identifisere forbindelser i en prøve
• Stasjonær fase for TLC kan være cellulose, silica gel, etc.
• Mobil fase for TLC er et løsemiddel som brukes til å løse opp prøven og skille forbindelser
• Deteksjonsmetoder for TLC: visuell deteksjon (naturlig farge, fluorescens), densitometer og flammeionisasjonsdetektor (FID)

HPLC (høytrykksvæskekromatografi)

• HPLC bruker en væske som mobilfase og et trykkystem for å skille forbindelser
• HPLC gir større oppløsning, båndspredning og reproduserbare resultater sammenlignet med tradisjonell kromatografi

GC (gasskromatografi)

• GC bruker en gass som mobilfase og et trykkssystem for å skille forbindelser
• GC brukes for å analysere flyktige og termisk stabile forbindelser
• To typer GC: Gass-fast stoff kromatografi (GSC) og Gass-væske kromatografi (GLC)

Eksklusjonskromatografi (gelkromatografi)

• En teknikk som separerer forbindelser basert på størrelse
• Stasjonær fase er et porøst materiell med bestemt porestørrelse
• Store molekyler elueres først, siden de blir ekskludert fra porene
• Gelkromatografi kan brukes til å skille proteiner, peptider, polysakkarider, etc.
• Sephadex og Sephacryl er vanlige materialer for gelkromatografi

Typer av stasjonære faser

• Dekstran-baserte materialer (Sephadex) brukes til å separere vannløselige forbindelser
• Agarose-baserte materialer brukes til å separere polysakkarider og proteiner
• Polyakrylamid-baserte materialer brukes til å separere proteiner og nukleinsyrer
• Polystyren-baserte materialer brukes til å separere små molekyler

Viktige faktorer for separasjon i gelkromatografi

• Størrelse på hulrom i stasjonær fase

• Partikkelstørrelse

• Flow hastighet

• Fraksjoneringsområde: Et bestemt molekylmasse-område blir adskilt fra resten.

Bioassay-baserte tester

• Antioksidanter - tester om et stoff kan beskytte celler mot oksidativt stress
• Arakidonsyremetabolisme - tester om et stoff påvirker produksjonen av betennelsesfremmende forbindelser
• Enzymtester - tester om et stoff påvirker aktiviteten til spesifikke enzymer
• Antimikrobielle tester - tester om et stoff kan drepe eller hemme mikrobielle organismer
• Toksisitetstester - tester om et stoff er giftig for levende organismer

Andre viktige elementer

• Densitometer - En enhet som brukes til å måle intensiteten til båndene eller flekkene på en TLC-plate
• FID (Flammeionisasjonsdetektor) - En detektor som brukes for å påvise organiske forbindelser i GC

Dette quizzet dekker grunnleggende konsepter om bioassay-styrte metoder, ekstraksjonsmetoder som Soxhlet-ekstraksjon, og kromatografiske teknikker. Lær om hvordan disse teknikkene brukes til å isolere og identifisere bioaktive forbindelser fra naturlige kilder. Test kunnskapen din om disse viktige prosessene innen biokjemi.