Técnicas de inmunodiagnóstico - Tema 2: Detección de Autoanticuerpos PDF

Técnicas de inmunodiagnóstico TEMA 2: DETECCIÓN DE AUTOANTICUERPOS 1. AUTOANTICUERPOS. DETECCIÓN Las técnicas más usadas son las reacciones de aglutinación, precipitación y fijación del complemento. Ahora las que más se emplean son y enzimoinmunoensayos. Inmunofl...

Técnicas de inmunodiagnóstico TEMA 2: DETECCIÓN DE AUTOANTICUERPOS 1. AUTOANTICUERPOS. DETECCIÓN Las técnicas más usadas son las reacciones de aglutinación, precipitación y fijación del complemento. Ahora las que más se emplean son y enzimoinmunoensayos. Inmunofluorescencia indirecta (IFI): se usan dos Ac: » Primario que reconoce la molécula diana. » Secundario marcado con fluoróforo que reconoce al primario para unirse a él. Los complejos Ag-Ac que se forman se ven en el microscopio de fluorescencia. Requiere la confirmación por ELISA. Enzimoinmunoensayos: destaca ELISA indirecto, que no requiere equipamiento sofisticado ni mucho tiempo, además permite una interpretación más objetiva que IFI. Consiste en el reconocimiento de Ac específicos del suero por Ac obtenidos de animales. 1.1. TÉCNICAS DE CRIBADO DE AC. ELISA: usa sustratos cromogénicos. Para analizar varios sueros a la vez y es adecuada para el cribado de ANA. Fundamento: recubrir un pocillo con el Ac diana, si el Ac específico para una enfermedad autoinmune está presente en la muestra, se unirá al Ag. Un segundo Ac marcado se une al Ac diana, y el sustrato cambia de color. En el ELISA indirecto es importante la calidad de los Ag. La intensidad del color es proporcional a la cantidad de Ac en la muestra. Inmunoensayo Lineal (LIA): Kits comerciales que permiten la identificación de autoAc con una tira de nitrocelulosa, a la que se añade suero problema, se incuban y se revelan con un antianticuerpo marcado con una enzima, después se adhiere un cromóforo (positivo=color) Inmunoensayos de quimioluminiscencia (CLIA): perimtes una determinación semicuantitativa de autoAc. Reaccionan con la base sólida y se ilumina, indicando la concentración de ANA en muestras de suero sanguíneo. 2. ENFERMEDADES AUTOINMUNES Y ANTICUERPOS ASOCIADOS. ETIOLOGÍA. El s.i. identifica como extrañas estructuras y células propias, respondiendo frente a Ag propios. El organismo crea autoanticuerpos y ataca estas estructuras. Se caracterizan por una pérdida de tolerancia inmune con consecuencias graves como daños tisulares, inflamación, etc. Hay dos conceptos importantes: Inmunógeno: Ag del propio organismo que provocan una respuesta inmune, es decir, tienen la capacidad de inducir a la generación de Ac. Tolerógeno: Ag que desencadenan la tolerancia inmunológica, es decir, el sistema inmunitario es capaz de reconocer y aceptar sustancias extrañas o no sin desencadenar una respuesta. Los Ac asociados a ciertas patologías ayudan a confirmar el carácter autoinmune de la enfermedad porque se emplean como marcadores biológicos, que reconocen elementos propios del cuerpo. Los tipos más comunes son: AUTOANTICUERPO Ag QUE USA Líneas de células epiteliales Antinucleares (ANA) humanas Anti-ADN de doble cadena AUTOANTICUERPO Crithidia luciliae (anti-ADNdc) 1 Anticitoplasma de Carmen Arce Millán neutrófilos Neutrófilos Tejidos específicos (glándulas, ORGANO-ESPECÍFICOS órganos…)  Técnicas de inmunodiagnóstico 2.1. CLASIFICACIÓN DE ENF. AUTOINMUNES Se clasifican según el tejido diana donde se produce la reacción contra el Ag propio. Dos tipos principales: Autoinmunes sistémicas (EAS) o no específicas de órgano o conectivopatías: provocan un ataque general multiorgánico. Inflamaciones del tejido conectivo. Se agrupan en los criterios diagnósticos. En estas enfermedades es habitual el síndrome de superposición. » Artritis reumatoide (AR): Un biomarcador es el factor reumatoide que corresponde a varias Ig (M, D o A) contra diferentes epítopos. Aunque ahora se una los Ac antipéptidos cíclicos para el diagnóstico. » Esclerodermia o esclerosis sitémica (ES): los autoAc ANA son los más representativos entre otros. » Lupus eritematoso sistémico (LES): células inmunitarias crean Ac al núcleo y membrana celular, por lo que se inflama todo el cuerpo. Elevada sensibilidad por los autoAc ANA aunque hay otros Ac de bastante relevancia en esta enfermedad: › Anti-dsDNA › Antinucleosoma › Anti-Sm › Anti-histona › Anti-C1q › Anti-ribosomal P › Anti-Ro/SSA › Anti-La/SSB › Antifosfolípidos » Síndrome de Sjögren: da resultado positivo en los autoAc ANA aunque no confirman la enfermedad. El diagnóstico suele basarse en anti-Ro y anti-La » Polimiositis Autoinmunes órgano-específicas o específicas de órgano: la respuesta se dirige contra un único Ag en un órgano concreto. Da un daño más puntual y menos genérico. La respuesta se desencadena contra más de una parte de las células propias de un órgano. » Diabetes mellitus insulinodependiente: destruye células del páncreas (células beta). Para su diagnóstico se usan los autoAc: contra el citoplasma y membrana de las células del islote, contra la descarboxilasa del ácido glutámico, antiinsulinas y anti-ZnT8 » Tiroiditis de Hashimot: inflamación del tiroides. Se encuentran Ac séricos (antitiroglobulina y antimicrosomales) además de Ac frente a peroxidasa tiroidea » Enfermedad de Graves-Basedow: posibilidad de varios Ac: › Antitiroglobulina › Antimicrosomales › Ig estimulante del crecimiento tiroideo(TSI) › Ig Exoftalmógena › Ig asociada a dermopatía › Ig inhibidora de receptor TSH » Hepatitis autoinmune:puede llevar a insuficiencia hepática grave, según los Ac detectados hay dos: › Tipo I: antinucleares y/o antimúsculo › Tipo II: antimicrosomales de hígado o riñon » Enfermedad de Addison: insuficiencia en la corteza suprarrenal » Vitíligo:despigmentación y destrucción de células productoras de melanina. Ac contra proteínas de melanocitos. 2 Carmen Arce Millán  Técnicas de inmunodiagnóstico 3. FACTORES RELACIONADOS CON LAS ENFERMEDADES AUTOINMUNES Factores genéticos: se heredan varios polimorfismos genéticos que junto a los factores ambientales, desarrollan la patología. El complejo mayor de histocompatibilidad es una región genética que consta de un grupo de genes polimórficos con variaciones según la especie (humano: Ags leucocitarios humanos o HLA) cuyo papel fundamental es regular la r. inmune y diferenciar entre lo propio y ajeno. Su polimorfismo se usa para estudios poblacionales. Factores ambientales: infecciones y daño tisular pueden desencadenar estar enfermedades por la iadecuada regulación del sistema inmune en el momento del daño o la semejanza entre el Ag del microbio extraño y los Ag propios (mimetismo molecular) Factor hormonal: mujeres las que más las padecen. Medicamentos, tóxicos o contaminación tienen una relación indirecta. Son también factores de riesgo el microbioma y las alteraciones epigenéticas. 4. TIPOS DE AUTOANTICUERPOS Antinucleares (ANA) o anticelulares: reactividad contra Ag en el núcleo o citoplasma de células de muchos tejidos y órganos Antihistonas: AR, ES o LES Anti-ADN: contra ADN bicatenario (LES) o de cadena única (enf del conectivo) Anticromatina: hacia el nucleosoma y cromatina Frente a proteínas extraíbles del núcleo o Ag extraíbles del núcleo (ENA): la mayoría son nucleares, dirigidos contra las sintetasas Anticentrómero (ACA) Factor reumatoide (FR) Antifilagrina/anti-CCP Anti-RA-33 Anticélulas endoteliales (ACE) Anticitoplasma de neutrófilo (ANCA) Antimembrana basal glomerular (anti-MBG) Antifosfolípidos Complemento Crioglobulinas (isotopos Ig M, D y A) 3 Carmen Arce Millán