CM 3 Enzymologie PDF

CM 3 Enzymologie Etude expérimentales in vitro 1) Définir quantitativement l’activité 2) Description des principaux paramètres Différents points e considération (indépendant des uns des autres) Protocole expérimentales pour mesurer l’activité d’une enzyme (fourni) 1) On considère la...

CM 3 Enzymologie Etude expérimentales in vitro 1) Définir quantitativement l’activité 2) Description des principaux paramètres Différents points e considération (indépendant des uns des autres) Protocole expérimentales pour mesurer l’activité d’une enzyme (fourni) 1) On considère la préparation de milieu d’étude (solution tampon) ➔ TP : enzyme non complexe → tampon organique (phosphate , acétate …) Selon les enzymes , préparer par nous-même 2) Solution mère de substrats (fourni → en poudre ) - penser le substrat et dissoudre dans le tampon (réfléchir sur la masse) 3) Solution mère d’enzymes (catalyseur) → diluer solution mère d’enzyme Activité = Vitesse (a=v) Au laboratoire → vitesse activité(U)  Tampon à 100 mmol Choix tampon selon le pH optimal de l’enzyme (voir fiche technique) pH = 7 → choisir pKa (possible de le trouver sur interne) = entre 7 et 8 Tampons acétate : tampon entre 3,96 et 4,76 Les tampons très utilisé : phosphate → condition physiologique Activité max = ph optimal Préparation de la solution mère de substrat Toutes les enzymes connus → on connait Km → on se base sur le Km de référence Km de référence : valeur qui nous permet d’inhiber ce qu’on recherche = idée approximative de ce qu’on recherche Km : concentration de S qui permet d’avoir 50 % max enzymes Modification du milieu de tampon → Variation de Km : il faut multiplier Km (concentration) Peser environ 3 à 10 mg d’enzyme → dépend de la dilution ➔ solution mère d’enzyme Après avoir produit la solution mère : calculer l’activité 3,2 mg/L  C1.V1 / C2.V2 32 U/mL