Control de Calidad - bioquímica. PDF

Control de calidad Calidad: grado en el que un conjunto de características inherentes cumple con los requisitos (ISO 9000:2000) “Caracteristica, Atríbuto de algo, Propiedad” (diccionario) ▪ “Relación entre las necesidades del cliente y...

Control de calidad Calidad: grado en el que un conjunto de características inherentes cumple con los requisitos (ISO 9000:2000) “Caracteristica, Atríbuto de algo, Propiedad” (diccionario) ▪ “Relación entre las necesidades del cliente y su satisfacción” (Deming) ▪ “Adecuado al uso, confiable y con facilidad de mantenimiento” (Jurán) ▪ “Conformidad con los requisitos establecidos” (Crosby) Por lo que calidad es: - Satifacción del cliente - Cumplir con los requisitos - Adecuación al uso La calidad de un producto o servicio es la forma en que dicho producto o servicio se ajusta a los resultados que de él se esperan ✓ CONJUNTO DE PROPIEDADES Y CARACTERISTICAS DE UN PRODUCTO O SERVICIO QUE LE CONFIEREN SU APTITUD PARA SATISFACER UNAS NECESIDADES EXPRESADAS O IMPLICITAS. ✓ NECESIDADES Y EXPECTATIVAS DEL CLIENTE ✓ NO EXCELENCIA SINO CUMPLIR CON LOS REQUISITOS ✓TOTALIDAD DE CARACTERISTICAS DE UN PRODUCTO O SERVICIO QUE LE CONFIEREN SU CAPACIDAD PARA CUMPLIR LAS NECESIDADES IMPLICITAS ✓ TODA LA EMPRESA SE DEBE INVOLUCRAR EN SU OBTENCION La calidad debe: - Especificarse Es posible especificar un conjunto de propiedades o características de un producto o servicio que le permiten cumplir su función de uso en forma satisfactoria. Esto se establece a través de normas técnicas - Poder medirse Las especificaciones de las propiedades o características se establecen en base a parámetros que se pueden medir con exactitud (metrología) - Poder evaluarse Al evaluar sus características, las pruebas demuestran que el producto alcanza o supera aquellas definidas en las normas, lo que se establece a través de la certificación acreditada ¿Para que sirve una norma? La calidad de un producto o servicio se especifica a través de una norma, la cual define el conjunto de propiedades o características requeridas para cumplir su función de uso en forma satisfactoria Las normas ayudan a mejorar la calidad, la seguridad y la competitividad industrial Norma Entrega un lenguaje común. Logra una comunicación que facilita el entendimiento entre distintos sectores Normas internacionales Norma chilena para acreditación de laboratorios clínicos, homologada de la ISO Manuales del estándar de acreditación para prestadores, MINSAL Acreditación Se establecen 9 ámbitos en que el laboratorio será evaluado entre los que se trata por ejemplo de dignidad al paciente, la calidad en los procesos, las competencias del recurso humano, la seguridad del equipamiento e instalaciones. Les aplican 30 características, de las cuales 8 son obligatorias Diferencia entre certificación y acreditación - Certificación Procedimiento por el cual una tercera parte (organismo de certificación) entrega un aseguramiento escrito (certificado) que un producto, proceso, sistema, servicio o persona está conforme con los requisitos especificados (normas) Puede ser voluntaria u obligatoria Es la conformidad que da un organismo reconocido a un producto servicio, o proceso final. Así se certifican lotes de conservas de pescado, se certifican servicios de consultorías o se certifican procesos de exámenes de admisión como los de las universidades. La certificación se da después de verificar que se han cumplido ciertos estándares o requisitos establecidos en una norma. Por ejemplo, el lote de conservas puede haber cumplido una norma ANSI XX, o en el caso del proceso de admisión arriba citado se ha cumplido la norma ISO 9001 El objetivo de la Certificación es “declarar públicamente que un producto, proceso o servicio es conforme con requisitos establecidos” - Acreditación (INN) Procedimiento por el cual un organismo con autoridad técnica reconoce formalmente que una organización es competente para efectuar actividades específicas en el campo de la evaluación de la conformidad - Actúa en: área voluntaria  - Área reglamentaria, mediante convenios con la autoridad competente. Se consideran además los requisitos impuestos por los reglamentos o por la autoridad También se basa en el cumplimiento de ciertos estándares, pero aplicados a las organizaciones que producen los productos o servicios. Así se puede hablar de acreditación de laboratorios, acreditación de carreras, acreditación de universidades, etc. El objetivo de la Acreditación es “dar reconocimiento formal de que un organismo es competente para llevar a cabo tareas específicas”. Enfoque de procesos flujo de trabajo de un laboratorio clínico Errores en el flujo de trabajo de un laboratorio clínico Enfoque de sistema para la gestión Implica identificar, entender y gestionar la red de procesos interrelacionados como un sistema, para lograr mejorar la eficacia y la eficacia de la organización Decisiones basadas en hechos Las decisiones eficaces se deben basadas en el análisis de los datos y la información Si no podemos medir, no podemos mejorar... ¿Para qué realizar el control de calidad? - Cumplir con reglamentos y normas legales - Acceder a convenios y ser contratado - Cumplir con estándares de precisión y exactitud aceptables - Dar confianza y seguridad al médico y al paciente de los resultados - Ser un real apoyo al diagnóstico y terapias de un paciente ¿Cuáles son los objetivos del control de calidad? - Ayudar a evaluar cambio o errores - Ayudar a un mejor desempeño del laboratorio - Asegurar la entrega de resultados confiables, de calidad - Credibilidad, confianza en la unidad - Acreditación ¿Como realizar control de calidad? - Calibrador, estándar o patrón Es un espécimen del que conocemos la concentración exacta del analito. El término patrón o estándar se utiliza al referirse a una solución del analito en agua o en un tampón adecuado El término calibrador se utiliza más al hablar de la solución estandarización de auto analizadores (el vehículo suele ser suero o una solución de viscosidad semejante). Los estándares o calibradores pueden ser para uno o múltiples analitos Ej: calibrador de glucosa= 107 mg/dL (trazable) - Control Es un espécimen en el que conoce la media y el intervalo de valores (DS) de uno o más analitos Ej. Calibrador de glucosa= valor 107 mg/dL Suero control valorado para glucosa, Rango de valores 265-280 mg/dL Los estándares o controles actualmente se compran en el mercado a empresas que lo fabrican. En el laboratorio, el control de calidad revisa el final del proceso y desecha aquello productos (resultados) defectuosos. - Trazabilidad El término trazabilidad es definido por la organización internacional de estándares ISO como: La propiedad del resultado de una medida o del valor de un estándar donde este pueda estar relacionado con referencias específicas, usualmente estándares nacionales o internacionales, a través de una cadena continua de comparaciones todas con incertidumbres específicas Ejemplo de trazabilidad analítica en química clínica Los valores de referencia indicados en la ficha técnica fueron obtenidos a través de múltiples determinaciones usando lotes específicos de reactivos y un Estándar Interno de Plasma Calibrador. Dicho Estándar está valorado respecto a los Estándares Internacionales actuales (Antitrombina, Proteína C, Proteína S, Factor VIII y Factor von Willebrand) indicados en la ficha técnica. En los ensayos para los que no están disponibles Estándares Internacionales (ej. Plasminógeno y Inhibidor de la Plasmina), estosn parámetros se han asignado usando un Estándar Interno referido a un “pool” de plasmas normales congelado procedente de 100 donantes. Los valores de referencia obtenidos en su laboratorio podría variar ligeramente entre los lotes de reactivos utilizados. Los resultados obtenidos en pacientes al utilizar el Plasma Calibrador como calibrador de Chromogenix de acuerdo con las recomendaciones del fabricante, son los mismos que se obtendrían usando el método de referencia calibrado con el correspondiente estándar de la OMS Tipos de errores - Er. Sistemáticos Se presentan en forma continua y definida. Estos errores incluyen los instrumentales, personales, de aplicación, técnicos. Afectan la exactitud (CCI- CCE); se puede corregir con la calibración - Afectan la exactitud - Detectados a través del CCI y CCE - Er. Aleatorios Impredecible, inherentes a todas las mediciones. Pueden ser ocasionados por factores como: cambios de t°, variaciones de voltaje, material mal lavado, variaciones entre el personal que realiza las mediciones, agitación incorrecta, etc. - Afectan la precisión - Detectados a través del CCI Er. Aleatorios burdos, gruesos o groseros - Informar un resultado por otro - Omitir un factor de dilución - Transponer dígitos (101 por 110) - Colocar la coma decimal en forma incorrecta - Preparación incorrecta de un reactivo Herramientas estadísticas Las estadísticas es la herramienta de que se vale el QC, y los dos indicadores muy usados en mediciones cuantitativas son: - La precisión: que se evalúa con las medidas de dispersión - La exactitud: que es valorada a través de la medida de tendencia central Media Tendencia central de distribución Es una medida de precisión Desviación estándar Describe la dispersión alrededor de la media Está relacionada con la exactitud Coeficiente de variación Es la relación entre la desviación típica de la muestra (desvío estándar) y su media Permite comparar las dispersiones de dos distribuciones distintas, siempre que sus medias sean positivas Se expresa en porcentaje Precisión Reproducibilidad de una serie de mediciones Se evalúa como el grado de imprecisión, a través de la desviación estándar o coeficiente de variación, los que se describen la dispersión entre las mediciones Exactitud Concordancia de nuestro resultado con el valor “verdadero” En la práctica, es una diferencia entre el valor real y el medido (Error o sesgo o bias) Límite de detección Es el valor más pequeño de la magnitud que puede medir dicho procedimiento En el laboratorio clínico resulta mucho más importante la precisión de los resultados que la exactitud En una población de datos de distribución normal Gráficas de Levey- Jennings La DS es el parámetro para crear la gráfica en la cual se indican los valores diarios de los controles Esta gráfica se crea para cada prueba y para cada nivel de control Los límites de la gráfica son ± 1 SD, ± 2 SD, ± 3 DSD respecto al promedio aritmético Reglas de Wesgard Multi reglas Westgard Espectofotometría Ciencia que estudia los ESPECTROS - Forma de obtenerlos - Forma de medirlos - Aplicación al análisis químico - Métodos espectrofotométricos Se denominan genéricamente a muchos métodos instrumentales que usan técnicas instrumentales en las que se genera una señal óptica basada en la interacción de la radiación electromagnética con el analito. Espectro Representación gráfica de la distribución de intensidades de R.E.M emitida o absorbida por la materia en función de la longitud de onda (λ) de dicha radiación - Emisión Estado excitado e-. Fundamental - Absorción Estado Fundamental e-. Excitado Propiedades de la R.E.M Forma de propagación de la energía sin soporte material Emitida por materia en estado excitado Naturaleza ondulatoria - Flujo de Fotones o partículas de energía - La Energía de un fotón es proporcional a la frecuencia de la radiación - Interacciona con las partículas que posean carga eléctrica o momento magnético, produciéndose una transferencia de energía REM -MATERIA Propiedades ondulatorias Longitud de onda λ Longitud de un ciclo o distancia entre máximos o mínimos (nm, cm,m) Frecuencia ν Ciclos por segundo (s–1 ) Velocidad C En el vacío, C = ν·λ = 3,0 · 10 10cm·s–1 Energía que transmite una onda ΔE = h·ν= h (c/λ) (1 julio = 10 -7ergios) Espectro de la REM Tipos de energía - Electrónica. Se debe a la energía cinética y potencial de los electrones de moléculas y átomos. - Vibracional. Movimiento de vibraciones de los enlaces entre átomos. - Rotacional. Rotación del centro de gravedad de las moléculas alrededor de un eje. - Nuclear. Orientación de las partículas nucleares en un campomagnético exterior. Métodos espectrofotométricos Así se denominan genéricamente a un amplísimo número de métodos instrumentales que utilizan técnicas instrumentales en las que se genera una señal de tipo óptico cuyo fundamento está basado en la interacción de la radiación electromagnética con el analito. Al interaccionar la radiación electromagnética con la muestra que contiene el analito, se pueden originar distintos fenómenos, de entre los cuales la absorción y emisión de luz, son los mas relevantes y dan lugar a los métodos espectrofotométricos de absorción y (o) emisión Los métodos pueden ser de absorción molecular o atómica, dependiendo de que el analito se encuentre en estado molecular o atómico. También existen métodos fluorescentes, en los que existe una absorción precedida de emisión. Todos estos métodos se denominan también espectroscópicos, porque están basados en los espectros de absorción o emisión del analito. Métodos espectroscópicos Moleculares. Espectros de ABSORCIÓN, por cambios en los niveles energéticos de las moléculas. Espectroscopía UV / VIS – IR. Métodos espectroscópicos ATÓMICOS. Espectros de ABSORCIÓN o de EMISIÓN, debido a cambios energéticos en el átomo. Absorción o Emisión Atómica, Rayos X. Absorción de energía Se hace pasar luz continua (posee todas las longitudes de onda posibles dentro de un intervalo) a través de una muestra. Parte de las radiaciones de determinadas L son absorbidas por la muestra. La energía absorbida se transfiere a los átomos o las moléculas. Éstas partículas pasan del estado de más baja energía (estado fundamental) a estados de mayor energía(estados excitados). Para que se produzca ABSORCIÓN La energía del fotón ha de ser igual a la diferencia de energía entre el estado fundamental y uno de los estados excitados de la especie absorbente Emisión Niveles de energía Abosrción atómica El espectro está constituido por líneas, debido al gran n° de transacciones posibles, que incluyen la de los subniveles electrónicos dentro de cada nivel Absorción molecular En la absorción por moléculas, entran en juego transacciones de tipo vibracional, rotacional entre subniveles electrónicos. El resultado final se traduce en un espectro de bandas. Tipos de espectro - Espectro de líneas - Espectro contibuo Técnicas de espectroscopia - Espectroscopia visible - Espectroscopia UV - Espectroscopia IR - Absorción atómica - Emisión atómica - Espectroscopia Rx  - Espectroscopia Rγ - Microondas - Ondas de radio - Frecuencia modulada - Espectroscopia RMN. Color de la sustancia El color de las sustancias se debe a que éstas absorben ciertas longitudes de onda de la luz blanca que incide sobre ellas y solo dejan pasar a nuestros ojos aquellas longitudes de onda no absorbida. Leyes fundamentales de la absorción Se denomina absorción al proceso por el cual una especie, en un medio transparente, capta selectivamente ciertas frecuencias de la radiación electromagnética. Ley de lambert-beer Al interaccionar la REM con la materia se produce absorción, siempre que la energía de la REM coincida con la E necesaria para que el sistema pase a un nivel energético superior Cuando un haz de luz monocromático pasa a través de un medio de absorción, la intensidad de la radiación disminuye en proporción al número de moléculas, átomos o iones absorbentes en el paso de la luz. Ley de lambert cuando un haz de luz atraviesa un medio absorbente de concentración constante, la cantidad de energía luminosa absorbida por el medio varía en forma directamente proporcional a la distancia recorrida Energía proporcional a: I (b) Energía absorbida proporcional a : C Absortividad molar (coeficinete epsilon ) DEPENDE DE: - CARACTERÍSTICAS DEL DISOLVENTE - ESPECIE ABSORBENTE - LONGITUD DE ONDA DE TRABAJO UNIDADES L /mol*cm El coeficiente de extinción depende de la mólecula y de la longitud de onda La absorbancia es proporcional a la concentración de la especie absorbente Propiedad aditiva de la absorbancia La absorbancia total de una muestra a una LONGITUD DE ONDA DETERMINADA, ES LA SUMA DE LAS ABSORBANCIAS DE CADA UNO DE SUS CONSTITUYENTES A DICHA LONGITUD DE ONDA Supuestos para que se cumpla la Ley de Lambert-beer 1) La radiación es monocromática 2) Sólo hay absorción → No refracción, no reflexión, no dispersión, etc. 3) La capacidad de absorción de cada especie no se afecta por las vecinas → Nointeracciones entre especies → a = concentración (Sólo en disoluciones diluidas) Limitaciones de la ley de lambert- beer REALES - Variación de la absortividad debida al disolvente - Concentración APARENTES - Instrumentales: radiación policromática - Químicas: cambios químicos de las especies absorbentes por interacción con el disolvente Desviaciones de la Ley de Beer 2) Desviaciones aparentes a) Debido al sistema Desviaciones a la ley de Beer La mayor parte de las especies cumplen con la ley en un determinado intervalo de concentraciones. Fuera de él, experimentan desviaciones positivas o negativas. Esto se observa bien en el calibrado: Es preciso asegurar que se está trabajando en el intervalo lineal Selección de la longitud de onda de trabajo Se debe de procurar medir las absorbancias en el entorno más próximo a la longitud máx. De la absorción en el espectro (se minizan errores) y se logran máximas sensibilidades Midiendo lejos de ese punto de máxima absorción: pequeñas variaciones en la medida se traducen en grandes cantidades Errores espectromagnéticos Es conveniente ajustar el intervalo óptimo de transmisión en las que el error de concentración es mínimo. Es fácilmente demostrable que calibrando concentraciones que supongan un 20-80% de transmitancia, el error es mínimo Instrumentación Espectrofotómetro - Lámpara Proporciona una mezcla de longitudes de onda (lámpara de deuterio para la luz U.V y lámpara de wolframio o tungsteno para el visible) - Monocromador Separa la luz en distintos componentes con su longitud de onda características - Colimador Selecciona el paso de una única radiación con una única longitud de onda, es básicamente una “abertura”, cuyo tamaño tiene un límite, siendo más grande o pequeña dependiendo de que el aparato sea menos o más sensibles - Cubeta Donde se coloca la muestra. Los prismas tienen dos caras opacas y dos caras transparentes. En la zona visible estas cubetas son de plástico, mientras que para el UV se utilizan de cuarzo para evitar el ruido de fondo  - Fotomultiplicador Transforma la radiación emergente en una señal eléctrica, que va a ser el valor de absorbancia de la muestra Componentes básicos de los instrumentos 1) Una fuente estable de energía radiante (radiación electromagnética) 2) Un selector de onda 3) Un compartimiento de muestra 4) Un detector sensible a la radiación 5) Un transductor (transforma la radiación en una señal eléctrica) 6) Un ordenador o registrador: visualiza la señal eléctrica Fuente de radiación 1) Debe generar una radiación suficientemente energética (consiga excitar al analito) e intensa (consiga excitar a todas las moléculas de analito) → alta sensibilidad 2) La intensidad de la radiación debe ser estable en el tiempo → alta reproducibilidad 3) La intensidad de la radiación varía de forma exponencial con el potencial de la toma de corriente → El potencial debe ser estable (corriente estabilizada) → alta reproducibilidad Tipos de fuentes (a) Fuente continuas → Emite radiación de intensidad similar en un gran intervalo continuo de longitud de ondas→ Una misma fuente sirve para gran número de analitos (b) Fuente de líneas → Emite radiación a un número discreto de longitud de onda, pero normalmente muy intensas → altas ensibilidad Fuentes de energía En absorción molecular la muestra debe ser irradiada con energía luminosa, procede de una fuente. Dependiendo de la zona de trabajo, las propiedades de la fuente son distintas. Las fuentes deben ser uniformes en intensidad Selector de la longitud de onda 1) Restringen la radiación incidente o la que llega al detector a una banda estrecha de L. De onda (radiación monocromática) → alta selectividad 2) Radiación monocromática (en técnicas de absorción) → Aumenta el intervalo de linealidad 3) Tipos: (a) Monocromadores (red de difracción y prisma): Sistemas ópticos que permiten obtener una radiación monocromática. Permiten seleccionar el intervalo de L. onda (b) Filtros: Sistemas que sólo dejan pasar a su través un intervalo estrecho de L.onda. El intervalo de L. onda es fijo Características Longitud de onda de máxima transmisión Porcentaje de transmitancia en el máximo Ancho de banda efectivo Diseños - Filtros de corte - Filtros de absorción - Filtros de interferencia - Monocromadores de prisma  - Monocromadores de red Selección de la longitud de onda con monocromadores Componentes básicos - Rendijas de entrada y de salida - Espejo colimador - Elemento dispersante (prisma o red) - Espejo o lente focalizador - Ventanas de entrada y salida Detector de radiación Definición: Sistema que indica la existencia de algún fenómeno físico (en este caso de radiación). Ej.: Película fotográfica (radiación), el ojo humano (radiación), el nivel de mercurio en un termómetro (Tª) Características ideales (a) Elevada sensibilidad espectral → Ha de ser sensible y a cualquier onda con bajo ruido de fondo (b) Respuesta estable y a todas las ondas → alta Reproducibilidad Tipos de detectores a) Fototubo Fotocátodo (cátodo fotosensible: la radiación provoca desprendimiento de e- que son dirigidos hacia el ánodo) y un ánodo que están dentro de una cámara transparente a la radiación que se encuentra al vacío b) Fototubo multiplicador Sistema similar al anterior, pero con unos artificios llamados dinodos que multiplican los e– generados en el cátodo: se amplifica la señal: alta sensibilidad c) Fotodiodos Detectores Al final la luz seleccionada tiene que ser detectada y cuantificada. *Esto se consigue con el empleo de detectores cuyo cometido es convertir la respuesta del instrumento en una señal medible. *Dependiendo del tipo de luz con el que se trabaja existen distintos tipos de detectores: Requisitos de los detectores - Deben responder a un amplio rango de longitudes de onda - Deben ser respuesta rápida - Deben ser sensibles a bajos niveles de radiación - Deben producir señal eléctrica fácilmente amplificable - Deben tener bajo nivel de ruido - La señal debe ser proporcional a la potencia radiante Fototubos y fotomultiplicadores Están basados en el efecto fotoeléctrico, en el que la incidencia de un haz fotónico sobre un metal es capaz de generar energía eléctrica Detector Tubo fotomultiplicador Cada dinodo se conecta a una fuente externa de 90 V generando en el colector una avalancha de 106 a 107 electrones por cada fotón incidente para el caso de un tubo fotomultiplicador de 9 dinodos Compartimiento de muestra Definición: Recipiente donde tiene lugar la interacción materia- radiación y que por tanto tiene que ser de un material transparente a la radiación (no absorción) y de paredes perfectamente pulidas (no dispersión) Transductor Definición: Sistema que transforma señales como la intensidad de luz, el pH, la masa, la temperatura, etc. en señales eléctricas que posteriormente podrán ser amplificadas, manipuladas y finalmente convertirse en números proporcionales a la magnitud de la señal original Procesador de señal y lectura Es el último componenete básico de instrumentación Todo espectrofotómetro ha de disponer de: 1. Sistema de amplificación propia que produzca una señal medible 2. Un sistema procesador de la señal, que permita eliminar, promediar datos, proporcionar salida de lectura, dirigir la salida de la señal.etc 3. Una salida de la señal: digital, registrador.etc 4. Tener cierta capacidad de procesar números /FTIR Tipos de espectrofotometros - De un solo haz de luz: Solo podemos poner una cubeta de medida, y por lo tanto hay que restar el valor del blanco a todos los valores de absorbancia obtenidos de los distintos tubos de ensayo. - De doble haz Después del colimador tiene un divisor de haz, que divide un haz de luz en dos de idéntica intensidad, pudiéndose medir así la muestra frente a una cubeta blanco (la máquina nos da los valores ya restados automáticamente) Espectrofotómetros Monohaz o haz simple Doble haz Se puede desdoblar el haz a intervalos regulares con la ayuda de un choper La mitad de la luz atraviesa la muestra y la otra un “blanco” La absorbancia medida tiene en cuenta la ratio de absorción muestra/blanco y permite corregir las desviaciones en el detector y en la fuente de salida La velocidad de cambio del chopper es una limitación a la L.onda que puede seleccionar el instrumento. Instrumentación comparada Técnicas moleculares 1) Absorción  2) Fluorescencia Técnicas atómicas 1) Absorción  2) Emisión 3) Fluorescencia Espectrofotómetro IR Son de dos tipos 1) Dispersivos (descansan en un sistema monocromador y de barrido para producir el espectro). 2) Transformada de Fourier (usan una combinación de interferencias constructivas y destructivas junto con la transformada para producir el espectro). Dispersivos Aplicaciones analíticas La espectrofotometría de absorción molecular se puede aplicar tanto al análisis cualititativo como cuantitativo. Análisis cualitativo: Los espectros de la muestra se han de comparar con los correspondientes a estándares con el fin de identificar las bandas de absorción coincidentes. Este tipo de análisis es más frecuente en UV e IR para identificar compuestos orgánicos y más rara vez se utiliza el Vis. Análisis cuantitativo: Está basado en la ley de Beer-Lambert en el intervalo de concentraciones de cumplimiento de la ley. Se establece la curva de calibrado usando estándares y la absorbancia de la muestra de concentración desconocida se remite a la curva ( a veces basta con un solo estándar). Procedimiento: En espectrofotometría Vis., el analito se suele incorporar a una especie compleja que presente bandas de absorción intensas. La selección de la L.onda a la que se mide la absorbancia, puede contribuir a incrementar la selectividad de la medida (si absorbe sólo el analito) Siempre que sea posible se debe medir la absorbancia a L.onda max Es una técnica rutinaria y especialmente sensible en fluorescencia Curva de calibración para manganeso en forma de ion permanganato por espectrofotometría UV- VIS (longitud= 545nm)