Stérilisation 1 2024-2025 PDF

19/11/2024 LA STÉRILISATION DR FIALA SARAH DR NEHAL CHAHINEZ ℘ Introduction ℘ Définitions ℘ Domaines d’application ℘ Méthodes de stérilisation : ₰ Procédé de Stérilisation par la chal...

19/11/2024 LA STÉRILISATION DR FIALA SARAH DR NEHAL CHAHINEZ ℘ Introduction ℘ Définitions ℘ Domaines d’application ℘ Méthodes de stérilisation : ₰ Procédé de Stérilisation par la chaleur ₰ Procédé de stérilisation par les rayonnements ₰ Procédé de stérilisation par les antiseptiques gazeux ₰ Procédé de stérilisation par filtration ₰ Préparation dans des conditions aseptiques 1  19/11/2024 Introduction Au début du XVIIIème siècle:  LEEUWENHOEK : Découverte du monde des microbes grâce au microscope  NEEDHAM : Rôle de la chaleur sur la conservation des aliments En 1851: Mise au point d’une méthode de conservation alimentaire par la chaleur par Appert mise au point de l’autoclave (stérilisation moderne) Entre 1857 et 1880 :  Pasteur Microbiologie moderne + Notions de Stérilisation  Joseph Lister Méthode chirurgicale antiseptique Définitions Stérilisation : Opération pharmaceutique qui consiste à éliminer ou à détruire tous les micro-organismes vivants, de quelque nature et sous quelque forme que ce soit, portés par un objet parfaitement nettoyé. But Eviter d’introduire des germes dans l’organisme. BPF (Partie IV, LD1) : Fabrication des médicaments stériles. Stérilité = état éphémère = absence de micro-organismes viables. « Niveau d’Assurance de stérilité » (NAS) : Probabilité de trouver une unité non stérile < 10-6 Asepsie : ensemble de mesures propres à empêcher tout apport exogène de micro-organismes 2  19/11/2024 Que stérilise t-on? Médicaments Matériel Autres Méthodes de stérilisation Produits qui peuvent être stérilisés dans leur conditionnement définitif : ⁂ La stérilisation par la chaleur ⁂ La stérilisation par irradiation Destruction ⁂ La stérilisation par les antiseptiques gazeux Produits qui ne peuvent pas être stérilisés dans leur conditionnement définitif : ⁂ La filtration stérilisante (Fluides) ⁂ La préparation dans des conditions aseptiques Elimination 3  19/11/2024  Principe général : Méthode physique absorption de quanta d’énergie par les micro-organismes  Sensibilité des germes à la chaleur : Espèce microbienne Micro- Forme organismes Nombre de germes initialement présents Facteurs intervenant dans Humidité Milieu de stérilisation pH la stérilisation Principe actif par la chaleur Modalités Température de stérilisation Durée 4  19/11/2024  Espèce microbienne : Un micro-organisme sensible : destruction avec un nombre faible de photons. Les spores sont plus résistantes que les formes végétatives : - Formes végétatives : destruction à une T° de 52°C à 60°C pendant 5 à 60 min en milieu aqueux. - Spores : destruction à des températures largement supérieures. Efficacité de la méthode : prendre un micro-organisme particulièrement résistant à la chaleur - Industrie alimentaire : les spores de Clostridium botulinum (germe pathogène). - Dans la pratique: spores de germes non pathogènes : & Bacillus stearothermophilus pour la chaleur humide. & Bacillus subtilis pour la chaleur sèche.  Durée du traitement et nombre initial de germes : Nombre de germes survivants Log N/N0 = - kt N0 : nombre initial de germes N : nombre de germes au temps t t Pour augmenter les chances de réalisation d’une bonne stérilisation , il faut avoir le moins de germes possible avant l’opération : - Matériel et verrerie très propres. - Eau fraichement distillée. - Travailler dans des conditions rigoureuses d’asepsie. 5  19/11/2024  Température: Destruction des spores de Clostridium botulinum par la chaleur Plus on utilise une T°élevée, moins il faut de temps pour atteindre le même résultat en fin de stérilisation  Cycle de stérilisation ou barème de stérilisation Objectif : ne pas soumettre les médicaments à un traitement thermique excessif en cas de stérilisation à grande échelle.  Temps de réduction décimale : DT Temps nécessaire à réduire la population de micro-organismes d’un facteur 10 à une température donnée.  Valeur d’inactivateur thermique « Z »: Elévation de température nécessaire pour réduire le temps de réduction décimale «DT» d’un facteur 10. Bacillus stearothermophilus : Z = 10°C, D121.4°C = 1.5 à 2 minutes  Temps équivalent «LT» : Temps de destruction thermique LT à la température T nécessaire pour obtenir le même effet qu’un temps défini à la température de référence. Il permet de comparer des traitements thermiques différents. Exemple: 1 minute à 121.1°C équivaut à 2 minutes à 118°C. 6  19/11/2024  Taux de létalité : LZT Rapport entre l’effet létal à la température T et l’effet létal à la température de référence. Rapport entre le temps équivalent à la température de référence et le temps équivalent. Expression en %.  La valeur stérilisatrice « FZT » : La somme des effets stérilisants sur l’ensemble du cycle de stérilisation. FZT = T0 LZT  dt En pratique, c’est la surface sous la courbe L = f(t) qui peut être facilement calculée par la méthode des trapèzes. FZT =  LZT  t Lorsque Z = 10°C et T = 121.1°C ; on note FZT, F0 dans le cadre de la stérilisation par la chaleur humide. F≥F0 cycle validé  Nature du milieu :  Humidité : En milieu sec , la destruction des germes est plus difficiles T = 170°C pendant 1 heure pour détruire tous les germes bactériens (Bacillus subtilis ) Mécanismes de destruction différents en chaleur sèche et en chaleur humide : Chaleur sèche oxydation Chaleur humide coagulation des protéines.  Principe actif : Pouvoir bactéricide se manifestant après élévation de température et augmentant l’efficacité de la stérilisation par la chaleur Exemple : salicylate de sodium, carbonate acide de sodium.  pH : Destruction des microorganismes plus aisée en milieu acide ou alcalin. 7  19/11/2024  Étapes préliminaires de la stérilisation: Pré-désinfection :  La population de micro-organismes  Protéger le personnel  Par Immersion : détergents+ désinfectants Nettoyage:  Obligatoire  Manuel ou automatique  3 actions: mécanique, chimique et thermique Séchage :  On ne stérilise bien que ce qui est sec  En fin de nettoyage  Machine à laver ou chiffon propre Stérilisation 1- PROCÉDÉ DE STER LISATION PAR LA CHALEUR 8  19/11/2024 Principe Stérilisation à l’air chaud et à pression atmosphérique dans: - Four Pasteur ou Poupinel & Opérations discontinues. & Fours à deux portes préférables. - Fours tunnels (opérations continues) Mécanisme d’action Oxygène de Oxydation des Destruction des T° élevé l’air protéines bactérienne micro-organismes Température de stérilisation  Stérilisation finale : 140°C 4H 160°C 2H30 (Pharmacopée européenne) 170°C 1H 180°C 30min  Dépyrogénisation : T° > 220°C Calcul de F:  T° de référence =180°C.  Indicateur biologique de référence : Bacillus subtilis.  D= 3min et Z=30°c 9  19/11/2024 Applications:  Matériel en métal (sensible à la rouille) ou en verre (ampoules et petits flacons).  Dépyrogénisation des ampoules injectables.  Poudres difficile à produire aseptiquement.  Filtres poreux (filtres à charbon). Avantages et Inconvénients 10  19/11/2024 Prion  Facteur infectieux d’un type radicalement nouveau  Forme pathologique d’une protéine normale des mammifères  Encéphalopathies subaigües spongiformes transmissibles  Extrême résistance aux procédés de stérilisation conventionnels Principe Stérilisation à la vapeur d’eau chaude et à pression élevé, réalisée dans un autoclave Mécanisme d’action Vapeur d’eau saturée Perméabilité de Hydrolyse des sous pression Chaleur la membrane des protéines spores plasmatiques Température de stérilisation: 121°C avec un excès de pression, pendant 15 min - Objet thermorésistant. - A l’hôpital : linge, pansements, instruments de chirurgie (134°C), objet en latex et caoutchouc (121°C) - Industrie pharmaceutique : solutés médicamenteux de produits thermorésistants (sérum glucosé, eau physiologique) 11  19/11/2024 Appareillage: Autoclave SIMPLE INDUSTRIELS En discontinu En discontinu En continu - Horizontaux - Stérilisation au fur et à - Ouverture latérale mesure du remplissage - Chariots à plateaux - Même régime - Souvent 2 portes - Meilleur rendement -Enregistreur de P, T -Très encombrant -Enveloppe chauffante - Capacité + grande Le chauffage est assuré électriquement ou avec de la vapeur surchauffée. Autoclave simple:  le manomètre est gradué en excès d’atmosphère sur la pression normale : 0 atmosphère + 100°C 0,5 atmosphère + 110°C 1 atmosphère + 121°C 2 atmosphères + 134°C 3 atmosphères + 144°C  Remplissage (eau et objets à stériliser) et fermeture de l’autoclave.  Chauffage allumé avec robinet d’évacuation ouvert (purge de l’air présent).  Fermeture du robinet dès la sortie de vapeur.  Augmentation de la température et de la pression intérieures (1 atm, 121°C).  Maintien du chauffage pendant 20 minutes une fois la pression atteinte.  Arrêt du chauffage et refroidissement lent de l’autoclave.  Ouverture du robinet d’échappement après retour du manomètre au zéro (100°C) 12  19/11/2024 Contrôle en cours de stérilisation  Contrôler les paramètres physiques : T° , pression et durée  Enregistrer le cycle de température à l’aide de : - Sondes ou couple thermoélectriques - Tubes témoins - Rubans adhésifs  Vérifier l’efficacité du traitement par des indicateurs biologiques de référence « Bacillus stearothermophilus »  Contrôler le bon fonctionnement et la fiabilité des dispositifs de purge, d’évacuation de l’air résiduel, de ventilation, de refroidissement,…doivent être vérifiés régulièrement 13  19/11/2024 Autres procédés de stérilisation par la chaleur Flambage Ebullition Tyndallisation Désinfection des objets de l’eau 3 chauffages (70°C, 30min de petite taille à : à 1h) espacés de 24heures. Flamme 1er chauffage: forme d’un bec Que les formes végétatives sporulée forme bunsen végétative 2ème et 3ème : destruction de la forme végétative Solutés ne supportant pas Lampe à alcool Se répartit mal sur les T° >100°C cavités Microbiologie et fermeture des ampoules 14